二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析1鈣通道阻滯藥物（calciumchannelblocker）：是指能選擇性地阻滯Ca2+經細胞膜上電壓依賴性鈣通道進入胞內、減少胞內Ca2+濃度，從而影響細胞功能的藥物，也稱“鈣拮抗藥”（calciumantagonist）。二氫吡啶類（dihydropyridines，DHP）鈣通道阻滯藥物：為目前臨床上特異性最高、作用最強的一類鈣拮抗劑，廣泛應用于缺血性心血管疾病、高血壓、腦血管疾病等的治療。硝苯地平為第一個上市的DHP藥物。2一、二氫吡啶類藥物的結構與性質二氫吡啶類藥物的母核結構：本類藥物均含有苯基-1,4二氫吡啶的母核（一）結構3為活性必需，變成吡啶環(huán)或六氫吡啶環(huán)活性消失鄰、間位有吸電子基團活性較佳，對位取代活性下降硝苯地平（nifedipine)尼群地平（nitrendipine)4尼莫地平（nimodipine)尼索地平（nisoldipine)非洛地平（Felodipine)拉西地平（Lacidipine)5伊拉地平（Isradipine)苯磺酸氨氯地平(Amlodipinebesylate)（二）主要理化性質1.二氫吡啶環(huán)的還原性

二氫吡啶環(huán)，具有還原性，可用氧化還原反應鑒別和氧化還原滴定法進行含量測定。2.硝基的氧化性

苯環(huán)上大多有硝基，具有氧化性，可被還原劑還原為芳伯氨基，可用重氮化-偶合反應鑒別。63.二氫吡啶環(huán)氨基質子解離性

二氫吡啶類藥物與堿作用后，二氫吡啶環(huán)1,4-位氫可以發(fā)生解離，形成p-π共軛而發(fā)生顏色變化，可以進行鑒別。74.穩(wěn)定性

二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學反應，因此要避光保存此類藥物。5.旋光性

本類藥物的C4位多為手性碳原子，具有旋光性。藥物溶劑濃度（μg/ml）λmax/λmin(nm)吸光度比值硝苯地平無水乙醇15237,320-335寬吸收尼群地平無水乙醇20236,353/303A353/A302=2.1-2.3尼莫地平乙醇10237尼索地平無水乙醇10237非洛地平乙醇20238,36186.吸收光譜特性

本類藥物具有芳環(huán)，有明顯的紫外和紅外吸收特征。二、鑒別試驗（一）化學鑒別法

1.與亞鐵鹽的反應苯環(huán)硝基的氧化性，可將Fe(OH)2氧化成Fe(OH)3(紅色沉淀）9如尼莫地平（ChP2010）的鑒別：取本品20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L硫酸1滴與0.5mol/L氫氧化鉀溶液1ml，強烈振搖，1分鐘內沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色。2.與NaOH試液反應丙酮溶液+NaOH如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2010）橙紅色溶液藥物被堿水解后，水解后的苯基-1,4二氫吡啶基團溶于丙酮呈現(xiàn)橙紅色。103.沉淀反應本類藥物含有1,4-二氫吡啶結構，可與重金屬鹽類形成沉淀。

尼莫地平+HgCl2白色沉淀尼群地平+KBiI4橙紅色沉淀114.重氮化-偶合反應苯環(huán)硝基具有氧化性，在酸性條件下可被鋅粉還原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反應進行鑒別。12如硝苯地平（BP2010）的鑒別：取本品25mg，加10ml鹽酸-水-乙醇混合溶液（1.5：3.5：5），溫熱，加入鋅粒0.5g，放置5分鐘，濾過，濾液加亞硝酸鈉試液（10g/L）5ml，放置2分鐘，再加入氨基磺酸胺溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色。1.紫外分光光度法13(二)分光光度法本類藥物具有芳香環(huán)，有紫外特征吸收，因此可用UV進行鑒別。如尼群地平軟膠囊的鑒別：取本品的內容物約1g，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋置刻度，搖勻，取10ml,置100量瓶中，用無水乙醇稀釋置刻度，在353nm與303nm的波長處分別測定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應為2.1-2.3。2.紅外分光光度法

如尼群地平片的紅外鑒別試驗143.色譜法15（1）HPLC尼群地平片的鑒別：供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致。二氫吡啶類藥物具有不同的分子結構，其色譜行為有所差別，可用于分離鑒別。如硝苯地平的鑒別對照品和供試品:固定相：硅膠F254薄層板上流動相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（40：60）檢查：紫外光燈（254nm）下檢查。16（2）TLC供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點一致三、有關物質的檢查

二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學歧化作用，引入雜質，因此各國藥典標準中均規(guī)定在避光條件下進行有關物質檢查，大多采用HPLC法。17

如硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產物：雜質I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯18硝苯地平雜質I雜質II具體方法（P259-260）：1.供試液的制備2.有關雜質對照品液Ⅰ和Ⅱ的制備3.色譜條件填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相：甲醇-水（3：2）檢測波長：235nm結果：按外標法以峰面積計算，均不得超過0.1%，其他單個雜質的峰面積不得大于對照品溶液中硝苯地平峰面積，雜質總量不得過0.5%。19四、含量測定（一）鈰量法優(yōu)點：①以Ce(SO4)2標準溶液穩(wěn)定，長時間放置、曝光、加熱不會引起濃度的變化。②Ce4+還原為Ce3+是單電子轉移，不生成中間價態(tài)，反應簡單，副反應少。③大部分有機物不與Ce(SO4)2作用，不干擾測定。④特別適用于糖漿劑以及片劑等制劑藥物的測定。終點指示：①Ce4+為黃色，Ce3+為無色，Ce4+可自身作為指示劑，但不夠靈敏。②常用鄰二氮菲作為指示劑，即稍過量的Ce4+將指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈無色，以指示終點的到達。20二氫吡啶類藥物具有還原性，可用鈰量法測定該類藥物的含量。鈰量法也稱為硫酸鈰法，是以Ce(SO4)2為標準溶液的氧化還原滴定法。鄰二氮菲指示液：鄰二氮菲-Fe(II)指示劑配置方法：將1.485g一水合鄰二氮菲和0.695gFeSO4·7H2O溶于100mL水中來配制。21如硝苯地平的含量測定測定原理：ChP2010收載的二氫吡啶類原料藥，BP2010收載的尼莫地平、尼群地平、非洛地平、硝苯地平均采用該法測定含量。2223（二）紫外-可見分光光度法本類藥物在紫外光區(qū)有特征吸收，因此可用紫外-可見分光光度法測定含量。HPLC法通過分離可消除有關物質及制劑中輔料的干擾，準確測定藥物含量。各國藥典二氫吡啶類藥物的原料及制劑大多采用本法測定含量。24（三）高效液相色譜法25尼莫地平還原性——鈰量法含量測定與重金屬形成沉淀——鑒別見光易分解——有關物質氫易解離——鑒別水解——鑒別氧化性（將氫氧化亞鐵氧化成氫氧化鐵）——鑒別重氮化-偶合反應——鑒別UV——鑒別和含量測定IR——鑒別HPLC——鑒別和含量測定26練習題1.尼莫地平具有氧化性，與亞鐵鹽反應，呈現(xiàn)的顏色變化是A.溶液變?yōu)榘咨獴.出現(xiàn)沉淀，沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色C.溶液顯橙紅色D.出現(xiàn)橙紅色沉淀E.無變化272.各國藥典規(guī)定對二氫吡啶類藥物中引入的雜質檢查大多采用的方法是A.TLCB.紫外分光光度法

C.比色法

D.HPLCE.IR3.ChP2010的二氫吡啶類藥物原料藥均采用何種方法測定含量A.TLCB.紫外分光光度法

C.鈰量法

D.HPLCE.非水溶液滴定法28291.二氫吡啶類藥物的共同特征是均含有

的母核。2.二氫吡啶類藥物的苯環(huán)硝基具有

性，在酸性下被鋅粉還原為

，可用重氮化-偶合反應鑒別。苯基-1,4二氫吡啶氧化芳伯氨基30第十二章喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析31第一節(jié)喹啉類藥物的分析臨床上以周期性定時性發(fā)作的寒戰(zhàn)、高熱、出汗退熱，以及貧血和脾大為特點。瘧疾(malaria)，是由瘧原蟲經蚊叮咬傳播的傳染病。寄生于人體的瘧原蟲有間日瘧原蟲、惡性瘧原蟲、三日瘧原蟲及卵形瘧原蟲4種，分別引起間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。32根據(jù)用藥目的，抗瘧藥分為三類：用于控制癥狀的抗瘧藥：如磷酸氯喹、硫酸奎寧、磷酸咯萘啶、青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、本勿醇等。用于控制復發(fā)和傳播的抗瘧藥：如磷酸伯氨喹等。用于病因性預防的抗瘧藥：如乙胺嘧啶、磺胺類等。一、喹啉類藥物的基本結構與主要性質33（一）基本結構喹啉結構特點：含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應性能基本與吡啶相同。脂肪氮——堿性34典型藥物（金雞納霜）奎寧環(huán)1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷硫酸奎寧(quininesulfate)硫酸奎尼丁(quinidinesulfate)3536磷酸咯萘啶1,5-萘啶四氫吡咯（二）主要性質硫酸奎寧*N喹啉環(huán)1.堿性2.旋光性4.熒光特性3.UV吸收pKb=9.8pKb=5.237硫酸奎寧比旋度為-237°~-224°硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸溶液中顯藍色熒光二、鑒別試驗（一）化學法1.綠奎寧反應（鑒別6-位含氧喹啉衍生物）Cl2NH3試液H+，中性藍色H+，酸性紫紅色硫酸奎寧硫酸奎尼丁翠綠色38二醌基亞胺的銨鹽或Br2ChP硫酸奎寧的鑒別：取本品約5mg，加水5ml溶解后，加溴試液3滴與氨試液1ml，即顯翠綠色。（二）

光譜法1.UV—特征值示例12-3ChP磷酸咯萘啶的UV鑒別：取本品，加磷酸緩沖液制成每1ml中約含10ug的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在260與276nm波長處有最大吸收。39ChP磷酸氯喹、磷酸咯萘啶（示例12-2）（示例12-3）ChP磷酸伯氨喹（示例12-4）示例12-4ChP磷酸伯氨喹的UV鑒別：取本品，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中約含15ug的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在265與282nm波長處有最大吸收，其吸光度分別為0.50~0.52和0.49~0.51。2.熒光光譜特征藍色熒光（示例12-5）dilH2SO4硫酸奎寧40示例12-5ChP硫酸奎寧的熒光鑒別：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使溶液成酸性，即顯藍色熒光。硫酸奎寧、二鹽酸奎寧、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在CHP中均采用紅外光譜進行鑒別。3.IR41示例12-6ChP磷酸氯喹的IR鑒別：取本品約0.5g，置分液漏斗中，加水25ml溶解后，加氫氧化鈉試液5ml、乙醚50ml振搖提取，醚層用水洗滌后通過置有無水硫酸鈉的漏斗濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣用五氧化二磷為干燥劑減壓干燥至析出結晶，其紅外光譜應與氯喹的對照圖譜一致。三、純度檢查（一）硫酸奎寧的純度檢查42奎寧主要從金雞納樹皮中提取，在提取分離過程中除了得到奎寧外，還可得到奎寧丁、辛可寧和辛可尼定等其他金雞納堿。硫酸奎寧為白色針狀晶體，在氯仿-乙醇（2：1）溶液中易溶，在水、乙醇、氯仿和乙醚中微溶。純度控制主要通過檢查酸度、氯仿-乙醇中不溶物質和其他金雞納堿等。來源：主要是在成鹽過程中引入檢查法：取本品0.20g，加水20ml溶解，用酸度計進行測定，pH應為5.7~6.6。43

1.酸度

目的：主要控制藥物中酸性雜質2.三氯甲烷-乙醇中不溶物質目的：主要控制醇中不溶性雜質或無機鹽類。檢查法：取本品2.0g三氯甲烷-無水乙醇（2:1）15ml50℃,10min垂熔坩堝濾過濾渣洗滌沉淀，5次每次10ml105℃干燥至恒重殘渣（標準：不超過2mg）44來源：制備過程中引入。3.其他生物堿方法：HPLC和TLC主成分自身對照法或雜質對照品對照法檢查法：對（50μg/mL）硅膠G氯仿-丙酮-二乙胺（5:4:1.25）對供45目的：主要控制在奎寧提取分離過程中可能混入的奎寧丁、辛可寧和辛可尼定等其他金雞納堿。供（10mg/mL）用碘鉑酸鉀試液顯色（二）磷酸咯萘啶的純度檢查46磷酸咯萘啶為黃色至橙黃色晶體性粉末，具引濕性，在水中易溶，在乙醇和乙醚中幾乎不溶。磷酸咯萘啶在生產和貯藏過程中引入的有關物質，主要通過溶液的澄清度與顏色、有關物質等項目的檢查進行控制。來源：主要是在成鹽過程中引入檢查法：取本品1.0g，加水25ml溶解，用酸度計進行測定，pH應大于2.4。47

1.酸度

目的：主要控制藥物中酸性雜質48

2.水中不溶物目的：主要控制藥物中不溶性物質檢查法：取本品2.0g加水25ml溶解放置30min垂熔坩堝濾過濾渣用水15ml分次洗滌105℃干燥至恒重殘渣不得超過4mg（注射用）或7mg（口服用）49

3.氯化物來源：生產工藝中帶入檢查法：取本品0.10g加水4ml溶解加20%NaCO35ml垂熔漏斗濾過濾液漏斗用水15ml分次洗滌加水至25ml與標準NaCl溶液比較限量0.03%50

4.甲醛來源：在合成反應中使用甲醛進行縮合四氫吡咯40%甲醛51取本品50.0mg加水2ml溶解加5%NaCO34ml濾過濾液加50%硫酸3ml加品紅亞硫酸試液3ml與新制甲醛對照液比較限量0.2%20-30℃,30min檢查法：甲醛和品紅亞硫酸試液反應呈紫紅色52

5.四氫吡咯來源：在合成反應中使用四氫吡咯進行縮合檢查法：Rimini試驗，即硝普鈉（亞硝基鐵氰化鈉，Na2[Fe(CN)5NO]）與胺的反應。與一級胺的反應產生紅色化合物，與二級胺的反應則生成藍色化合物。取本品10.0mg加水2ml溶解加5%NaCO32ml濾過濾液加亞硝基鐵氰化鈉乙醛試液1ml5分鐘內不得顯藍紫色四、含量測定非水滴定法（堿量法）HPLC法53（一）硫酸奎寧的含量測定2（1）直接滴定法硫酸奎寧原料藥的含量測定摩爾比=1:(4-1)=1:31454非水滴定法（堿量法）55示例12-7ChP硫酸奎寧的含量測定：取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸10ml溶解后，加酸酐5ml與結晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯藍綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于24.90mg的(C20H24N2O2)2?H2SO4（分子量746.93）。T=0.1X1/3X746.93=24.90mg/ml2（2）先堿化再滴定硫酸奎寧制劑的含量測定摩爾比=1:44堿化5657示例12-8ChP硫酸奎寧片的含量測定：取本品20片，除去包衣后，精密稱定，精密稱取適量，置分液漏斗中。加氯化鈉0.5g與0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，混勻，精密加三氯甲烷50ml，振搖10分鐘，靜置，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加醋酐5ml與二甲基黃指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液顯玫瑰紅色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于19.57mg的(C20H24N2O2)2?H2SO4?2H2O（分子量783）。T=0.1X1/4X783=19.57mg/ml58HPLC法示例12-9USP硫酸奎寧片含量的HPLC測定法色譜柱：C18流動相：水-乙腈-甲磺酸溶液——二乙胺溶液檢測波長：235nm結果：采用對照品，按外標法以峰面積計算原料藥——非水滴定法制劑——UV法、提取酸量法、HPLC法59（二）磷酸氯奎的含量測定6061硫酸奎寧堿性——非水滴定含量測定綠奎寧反應——鑒別在稀硫酸中有熒光——鑒別UV——鑒別和含量測定IR——鑒別硫酸鹽鑒別反應HPLC——檢查和含量測定62第二節(jié)青蒿素類藥物的分析青蒿素為脂溶性，易透過血腦屏障，是一種高效、速效、低毒的抗瘧藥。主要用于耐氯喹的惡性瘧，包括腦型瘧的搶救。青蒿素又名黃蒿素，是我國學者從菊花科植物黃花蒿中提取分離得到的一個含過氧基團的新型倍半萜內酯。一、青蒿素類藥物的基本結構與主要性質63（一）基本結構64（二）主要性質1.氧化性具有過氧橋結構2.旋光性具手性中心，有旋光性3.水解性僅青蒿素有內酯結構，在堿性

條件下發(fā)生水解4.UV吸收分子結構中沒有共軛體系，

UV吸收光譜主要是末端吸收*******二、鑒別試驗（一）呈色反應1.過氧橋的氧化反應（酸性條件下將I-氧化成I2）乙醇溶解KI和稀H2SO4藍紫色青蒿素65淀粉指示液示例12-13ChP青蒿素的鑒別：取本品約5mg，加無水乙醇0.5ml溶解后，加碘化鉀試液0.4ml，稀硫酸2.5ml與淀粉指示液4滴，立即顯紫色。662.羥肟酸鐵反應含內酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件下與羥胺反應生成羥肟酸，在稀酸溶液中與高鐵離子呈紫紅色。NH2OHFe3+H+呈色ChP2010收載了青蒿素和青蒿琥酯的羥肟酸鐵鑒別反應OH-示例12-16ChP青蒿素的鑒別：取本品約5mg，加無水乙醇0.5ml溶解后，加鹽酸羥胺試液0.5ml與氫氧化鈉試液0.25ml，置水浴中微沸，放冷后，加鹽酸2滴和三氯化鐵試液1滴，立即顯深紫紅色。3.香草醛-硫酸（硫酸香蘭素顯色劑）反應67使分子中的羧基脫水，增加雙鍵位移，分子縮合反應生成共軛系統(tǒng)，在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。示例12-17ChP青蒿琥酯的鑒別：取本品約50mg，加三氯甲烷1ml溶解后，取3-4滴置白瓷板上，待三氯甲烷揮發(fā)后，加2%香草醛硫酸溶液1滴，顯紅色。68（二）吸收光譜特征1.紅外吸收光譜特征：青蒿素類抗瘧原料藥在ChP2010中均采用紅外光譜進行鑒別，要求所得紅外光譜圖與對照圖譜一致。制劑的紅外光譜鑒別須經提取分離，殘渣干燥后進行紅外光譜圖與對照圖譜比較。2.紫外吸收光譜特征：青蒿素類藥物分子結構中不具共軛體系，ChP2010中均未采用本法鑒別青蒿素類藥物。69（三）色譜法供試品主峰保留時間與對照品主峰保留時間一致1.HPLC法（原料藥ChP2010）供試品所顯主斑點的位置和顏色與對照品主斑點的位置和顏色一致2.TLC法（制劑ChP2010）70示例12-19ChP