實驗一試劑的配制第一頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二一、實驗目的通過本實驗，掌握常用LB液體/固體培養(yǎng)基和質(zhì)粒提取試劑的配制方法和技術(shù)，為后續(xù)實驗做準備第二頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二二、實驗儀器電子天平pH酸度計磁力攪拌器TOMYSS-325/245自動蒸汽滅菌鍋第三頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二電子天平FA/JA系列稱量范圍：0～200g讀數(shù)精度：0.1mg（FA2004）1mg（JA2003）稱盤直徑：80mm（FA2004）110mm（JA2003）預熱時間：120min（FA2004）60min（JA2003）將天平置于穩(wěn)定的工作臺上，避免振動、陽光照射和氣流使用前觀察水平儀，使水泡位于水平儀中心接通電源，開始通電工作（顯示器未工作），通常需預熱后方可開啟顯示器，進行操作使用ON開啟顯示器鍵/OFF關(guān)閉顯示器鍵/TAR清零、去皮鍵第四頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二pH酸度計210A酸度計標準配置：210A主機1臺，9V電池1塊，910600pH電極1支，pH4.01緩沖液，pH7.00緩沖液，pH10.01緩沖液Mode鍵用來改變模式：MEASURE－CALIBRATE－SETUP用蒸餾水沖洗電極，用紙巾把電極附著的水分吸干，然后將電極插入第1點緩沖液（pH7.00），均勻攪拌緩沖液按mode鍵至屏幕上部顯示CALIBRATE，屏幕下部出現(xiàn)7－4，表示用7.00和4.01的緩沖液校正，按no鍵可以選擇7－10/SET/7/7－4當屏幕下部顯示7－4或7－10時，壓yes鍵確認屏幕出現(xiàn)P1，當屏幕出現(xiàn)ready時，第1點校正完成，壓yes鍵確認，儀器進入準備第2點校正，屏幕出現(xiàn)P2將電極從第1點緩沖液中取出，蒸餾水清洗并用紙巾吸干后，將電極插入第2點緩沖液，均勻攪拌緩沖液，當屏幕出現(xiàn)ready時，第2點校正完成，壓yes鍵確認，屏幕顯示電極2點校正后的斜率值，儀器自動回到測量狀態(tài)將電極取出，蒸餾水清洗并用紙巾吸干后，即可測量樣品溶液第五頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二磁力攪拌器（配攪拌子）第六頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二TOMYSS-325/245自動蒸汽滅菌鍋檢查排放蒸汽的水壺，使腔體內(nèi)的水位與托板齊平SET鍵設(shè)置溫度和時間（121℃，20min）關(guān)閉排氣閥，Start機器開始運行，CheckHeat檢查設(shè)置的溫度，Stop鍵終止機器運行程序運行結(jié)束，旋開排氣閥或機器自行排氣至壓力為0。溫度降至80℃以下壓力為0時方可開蓋。運行過程中勿接觸蓋子腔體內(nèi)經(jīng)常清潔第七頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二LB液體培養(yǎng)基25ml/2瓶+50mL/3瓶LB固體培養(yǎng)基（150ml/2瓶）——每150ml液體培養(yǎng)基中加2.25g瓊脂溶液Ⅰ（pH8.0，100ml）0.4mol/LNaOH（100ml）2％SDS（100ml）溶液Ⅲ（pH4.8，100ml）70％乙醇（100ml）50×TAE（200ml）溶液Ⅱ三、試劑配方及配制的操作步驟76，79頁第八頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二（1）LB液體培養(yǎng)基將胰蛋白胨（typtone）10g酵母提取物（yeastextract）5g氯化鈉10g完全溶解在950mL去離子水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，加入去離子水至總體積為1L，121℃濕熱滅菌20min。冷卻后4℃保存?zhèn)溆?。?）固體LB培養(yǎng)基：每升LB培養(yǎng)基中加15g瓊脂1.LB液體/固體培養(yǎng)基（76頁）2.氨芐青霉素(Amp)：用無菌水配制成100mg/mL溶液，置－20℃冰箱保存。第九頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二3溶液Ⅰ50mmol/L葡萄糖25mmol/LTris·HCl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)稱量→溶解→調(diào)節(jié)pH值→定容→滅菌4溶液Ⅱ0.4mol/LNaOH2%SDS用前等體積混合。稱量→溶解→定容5溶液Ⅲ(pH4.8)5mol/L乙酸鉀60mL冰乙酸11.5mL水28.5mL79頁第十頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二670%乙醇：放置于－20℃冰箱保存，用后即放回。7胰RNA酶將RNA酶溶于10mmol/LTris·HCl(pH7.5)、15mmol/LNaCl中，配成10mg/mL濃度，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫，保存于－20℃。8平衡酚(pH8.0)(購于申能博彩公司)第十一頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二9.50×TAE（500mL）121gTris堿28.55mL冰乙酸50mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)第十二頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二四、試劑滅菌LB液體/固體培養(yǎng)基溶液Ⅰ50×TAE第十三頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二實驗課20人每班試劑配制時：25mLLB液體培養(yǎng)基/100mL錐形瓶，4瓶/10人溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ，1套/10人50×TAE，500mL/30人實驗分組第十四頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二五、思考題分子生物學實驗中，為什么要對器具和耗材等進行清洗和高溫濕熱滅菌？如果