雞蛋中金剛烷胺殘留量的測(cè)定液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞蛋中金剛烷胺殘留量檢測(cè)的液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞蛋中金剛烷胺殘留量的檢測(cè)。本方法檢出限為1μg/Kg，定量限為3μg/Kg。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理雞蛋中殘留的金剛烷胺用1%乙酸乙腈溶液提取，正己烷液液分配去脂，液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜正離子模式測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級(jí)水的規(guī)定。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。正己烷：色譜純。冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。甲酸：色譜純。無水硫酸鈉。1%乙酸乙腈溶液：量取冰乙酸10mL（4.4），置1000mL容量瓶中，用乙腈（4.2）溶解并稀釋至刻度，搖勻。20%乙腈水溶液：量取乙腈（4.2）20mL，置100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。0.1%甲酸水溶液：吸取甲酸（4.5）1.0mL，置1000mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。0.1%甲酸甲醇溶液：吸取甲酸（4.5）1.0mL，置1000mL容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻。金剛烷胺對(duì)照品（分子式C10H17N）：純度≥98%。D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（分子式C10H11ND6）：純度≥99%。金剛烷胺、D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（4.11）和D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（4.12）各10mg，分置10mL容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解并稀釋至刻度，配制成濃度各為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，-20℃以下保存，有效期3個(gè)月。金剛烷胺、D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密量取金剛烷胺貯備液和D6-金剛烷胺貯備液（4.13）各100μL，分置100mL容量瓶中，用20%乙腈水溶液（4.8）稀釋至刻度，配制成濃度各為1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，2℃～8℃保存，有效期2周。有機(jī)濾膜：0.22μm。儀器設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量0.00001g、0.01g。均質(zhì)機(jī)。渦旋混合器。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速8000r/min。氮吹儀。試驗(yàn)步驟試樣的制備取5枚新鮮或冷藏的空白或供試雞蛋，去殼后用均質(zhì)機(jī)勻漿，-20℃以下保存。提取稱取試料2.0±0.05g（精確至0.01g）置50mL離心管中，加入D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.14）20μL，再加入1%乙酸乙腈溶液（4.7）10mL，渦旋2min，8000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)入另一50mL離心管中，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，備用。凈化備用液中加入無水硫酸鈉3g，乙腈飽和的正己烷10mL，渦旋1min，8000r/min離心5min，棄去正己烷層，剩余溶液轉(zhuǎn)至另一50mL離心管中，40℃水浴氮吹至干，用1.0mL20%乙腈水溶液（4.8）溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，加入20%乙腈水溶液飽和的正己烷2mL，渦旋1min，8000r/min離心5min，取下層溶液，用有機(jī)濾膜過濾，供上機(jī)測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取金剛烷胺和D6-金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.14）適量，用20%乙腈水溶液（4.10）稀釋配制成金剛烷胺濃度為2、4、10、20、100、200ng/mL，D6-金剛烷胺濃度均為20ng/mL的金剛烷胺系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。測(cè)定高效液相色譜參考條件色譜柱：C1850mm×2.1mm，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸甲醇溶液，B相為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相梯度洗脫條件見表1。流速：0.3mL/min。進(jìn)樣量：5μL。柱溫：35℃。流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí)間（min）流速（mL/min）A相（%）B相（%）00.3109010.3109030.3307050.390106.50.31090質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源。掃描模式：正離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）。脫溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮或其他合適氣體。錐孔電壓、碰撞能量等應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度。監(jiān)測(cè)離子參數(shù)情況見表2。金剛烷胺、D6-金剛烷胺特征離子參考質(zhì)譜條件化合物定性離子對(duì)（m/z）定量離子對(duì)（m/z）錐孔電壓（V）碰撞能量（eV）金剛烷胺152.0＞92.9152.0＞135.03025152.0＞135.015D6-金剛烷胺158.0＞141.0158.0＞141.03015定性測(cè)定通過試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子相對(duì)照定性。試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2.5%；試樣特征離子的相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度比一致，相對(duì)豐度比偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷試樣中存在金剛烷胺殘留。定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許偏差相對(duì)離子豐度比（%）允許的相對(duì)偏差（%）＞50±20＞20～50±25＞10～20±30≤10±50定量測(cè)定取試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液上機(jī)測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比定量，標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中金剛烷胺和D6-金剛烷胺峰面積比均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)?？瞻自囼?yàn)除不加試料外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試料中金剛烷胺的殘留量（μg/kg）按下式計(jì)算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1）式中：X──供試試料中金剛烷胺殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；Ci──經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的試料溶液中金剛烷胺濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V──溶解殘?jiān)捏w積，單位為毫升（mL）；m──供試試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。測(cè)XX果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度靈敏度本方法檢出限為1μg/kg，定量限為3μg/kg。準(zhǔn)確度本方法在3μg/kg～30μg/kg