課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)體系1.分析培養(yǎng)基對(duì)微生物的分離作用。2.進(jìn)行土壤中微生物的分離、計(jì)數(shù)和鑒定。(重點(diǎn)、難點(diǎn))01探新知自主梳理02破重難講練互動(dòng)03固雙基當(dāng)堂達(dá)標(biāo)04課后鞏固提升一、篩選菌株的思路及計(jì)數(shù)1．篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于

生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)

其他微生物的生長(zhǎng)。(2)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許

種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)

其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。目的菌株抑制或阻止特定抑制或阻止2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1)活菌計(jì)數(shù)法：常用稀釋涂布平板法。①原理：當(dāng)樣品的

足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)

。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的

，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)

M。C：代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的

。V：代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的

(mL)。M：代表

。③統(tǒng)計(jì)方法：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取其

。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：在顯微鏡下直接觀察和計(jì)數(shù)微生物的數(shù)量。稀釋度活菌菌落數(shù)×平均菌落數(shù)體積稀釋倍數(shù)30～300平均值3．設(shè)置對(duì)照(1)對(duì)照實(shí)驗(yàn)：指除了

的條件外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。(2)主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。被測(cè)試非測(cè)試因素二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1．土壤取樣(1)取樣原因：土壤有“

”之稱。同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。(2)土壤要求：富含有機(jī)質(zhì)，pH接近

且潮濕。(3)取樣部位：距地表約

的土壤層。2．樣品稀釋(1)稀釋原因：樣品的稀釋程度直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得的菌落數(shù)在

之間，便于計(jì)數(shù)。微生物的天然培養(yǎng)基中性3～8cm30～300

(3)稀釋倍數(shù)①測(cè)定土壤中

的數(shù)量，一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。②測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用

倍稀釋。③測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用

倍稀釋。細(xì)菌103、104和105102、103和1043．微生物的培養(yǎng)與觀察(1)培養(yǎng)：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)

和培養(yǎng)

。(2)觀察：每隔

統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。4．細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，取同一稀釋度下的3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出

，并根據(jù)所對(duì)應(yīng)的

計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。溫度時(shí)間24h平均值稀釋度三、操作提示1．無(wú)菌操作(1)取土樣的用具在使用前都需要

。(2)實(shí)驗(yàn)操作均應(yīng)在

進(jìn)行。2．做好標(biāo)記：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多，為避免混淆，使用前應(yīng)標(biāo)明培養(yǎng)基的

、

以及平板上培養(yǎng)樣品的

等。3．制定計(jì)劃：對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，要事先制定計(jì)劃，以便提高

。4．菌種鑒定(1)方法：在以

為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。滅菌火焰旁種類培養(yǎng)日期稀釋度工作效率尿素

(2)原理

[預(yù)習(xí)小測(cè)]1．想一想怎樣選擇可用于計(jì)數(shù)的平板？提示：選擇菌落數(shù)在30～300的平板(相同稀釋度的平板均符合該特點(diǎn))進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后取平均值。2．判一判(1)篩選分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源，且為固體培養(yǎng)基()(2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)()(3)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)()(4)利用稀釋涂布平板法和平板劃線法均可實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)()(5)利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量()(6)培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基的pH值會(huì)增大()√××××√KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)從物理性質(zhì)看，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，從功能上看屬于________培養(yǎng)基。提示：固體選擇(2)該培養(yǎng)基是如何實(shí)現(xiàn)對(duì)分解尿素的細(xì)菌的篩選的？提示：該培養(yǎng)基中唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能夠分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，會(huì)因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖，所以用該培養(yǎng)基能夠篩選出分解尿素的細(xì)菌。

(3)如何證明該選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用？提示：同時(shí)設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基并進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目；若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明了選擇培養(yǎng)基的確起到了篩選作用。(4)如何證明所用的選擇培養(yǎng)基沒(méi)有受到環(huán)境污染？提示：將未接種的上述培養(yǎng)基與接種的上述培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，觀察是否有菌落的產(chǎn)生；若未接種的培養(yǎng)基無(wú)菌落產(chǎn)生，則證明培養(yǎng)基沒(méi)有受到環(huán)境污染。1．三種篩選目的菌株的方法方法特點(diǎn)舉例利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型選擇培養(yǎng)基進(jìn)行的選擇培養(yǎng)通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，使?fàn)I養(yǎng)缺陷型微生物不能正常生長(zhǎng)缺乏氮源的培養(yǎng)基可篩選固氮微生物利用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物加入青霉素的培養(yǎng)基可抑制細(xì)菌，分離出真菌利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)改變微生物的培養(yǎng)條件將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，可分離出耐高溫的微生物2.微生物篩選過(guò)程中必要的兩種對(duì)照培養(yǎng)基及其作用微生物篩選過(guò)程中，除選擇培養(yǎng)基外，另外還需設(shè)置兩組對(duì)照培養(yǎng)基，以提高實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和科學(xué)性。對(duì)照組作用現(xiàn)象結(jié)論未接種培養(yǎng)基有無(wú)雜菌污染的判斷未接種的培養(yǎng)皿中無(wú)菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染接種的全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基有無(wú)篩選作用的判斷全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用

[易錯(cuò)警示]

能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不一定都是目的菌株原則上選擇培養(yǎng)基只能允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，但實(shí)際上，微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問(wèn)題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長(zhǎng)繁殖，因此，能夠在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不一定都是目的菌株。1．在分解尿素的細(xì)菌的分離和鑒定中，對(duì)先后用到的兩種培養(yǎng)基，敘述正確的是(

)A．加入酚紅指示劑作為選擇培養(yǎng)基，再加入唯一碳源作為鑒別培養(yǎng)基B．加入唯一氮源作為鑒別培養(yǎng)基，再加入酚紅指示劑作為選擇培養(yǎng)基C．加入唯一氮源作為選擇培養(yǎng)基，再加入酚紅指示劑作為鑒別培養(yǎng)基D．加入酚紅指示劑作為選擇培養(yǎng)基，再加入唯一碳源作為鑒別培養(yǎng)基解析：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌；細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。答案：C2．某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生__________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是____________________________________________________________，但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是____________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。

(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有______________________________________________________________________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。解析：(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細(xì)菌是一種分解者，屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源。能分解尿素的細(xì)菌可以以葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可為多種有機(jī)物的合成提供原料。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，而其他兩組都含有含氮物質(zhì)NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用。

(3)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有：KH2PO4和Na2HPO4構(gòu)成緩沖液，可維持培養(yǎng)基的pH相對(duì)穩(wěn)定；KH2PO4和Na2HPO4能為微生物生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)鹽。答案：(1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)鹽離子，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定

[方法技巧]

選擇培養(yǎng)基的常見(jiàn)類型(1)分離微生物所用的選擇培養(yǎng)基一定是固體培養(yǎng)基，因?yàn)榫渲荒茉诠腆w培養(yǎng)基上形成。

(2)常見(jiàn)的選擇培養(yǎng)基①加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。②加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。③無(wú)氮源培養(yǎng)基可以分離固氮微生物。④以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基，可以分離能消除石油污染的微生物。⑤將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，可以分離耐高溫的微生物。(1)圖示統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法是_____________________________________，利用該法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目________，原因是_________。提示：稀釋涂布平板法少當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落(2)分離不同的微生物要采用不同的稀釋度，原因是____________________；稀釋操作成功的標(biāo)準(zhǔn)是___________________________________________。提示：土壤中各種微生物的數(shù)量是不同的得到2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)在30～300的平板

(3)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。①甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否真實(shí)可靠？為什么？提示：不真實(shí)。為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。②乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示：不合理。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能的影響因素，找出差異的原因，需重新實(shí)驗(yàn)，而不能簡(jiǎn)單地舍棄。

(4)某同學(xué)在三種稀釋度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，得到了以下數(shù)據(jù)，試計(jì)算1g樣品的活菌數(shù)。平板稀釋度平板1平板2平板3104菌落數(shù)太多，難以計(jì)數(shù)菌落數(shù)太多，難以計(jì)數(shù)菌落數(shù)太多，難以計(jì)數(shù)

105212234287

106212318

提示：105的稀釋度下取0.1mL涂布的三個(gè)平板的菌落數(shù)在30～300，計(jì)算其平均值為(212＋234＋287)/3≈244。進(jìn)一步可以換算出1g樣品中活菌數(shù)為(244÷0.1)×105＝2.44×108。1．測(cè)定微生物數(shù)量的方法的比較測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法(活菌計(jì)數(shù)法)和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下：項(xiàng)目顯微鏡直接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法(間接計(jì)數(shù)法)原理利用特定的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌項(xiàng)目顯微鏡直接計(jì)數(shù)法稀釋涂布平板法(間接計(jì)數(shù)法)主要用具顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)依據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上的菌落優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低(當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上觀察到的只是一個(gè)菌落)計(jì)算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝400×10000×每小格平均菌體數(shù)×稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝某一稀釋度下培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)÷涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)注：表中400和10000都是常數(shù)。2．實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論樣品的稀釋操作得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近[易錯(cuò)警示]

分離尿素分解菌操作中的注意事項(xiàng)(1)在實(shí)驗(yàn)操作中，每個(gè)步驟都要注意無(wú)菌操作，以防培養(yǎng)基被污染，影響實(shí)驗(yàn)效果。(2)樣品稀釋液的最佳濃度為獲得每個(gè)平板上有30～300個(gè)菌落，這個(gè)稀釋度細(xì)菌一般為104、105、106倍稀釋液，放線菌一般為103、104、105倍稀釋液，真菌一般為102、103、104倍稀釋液。(3)為排除非測(cè)試因素(培養(yǎng)基)的干擾，實(shí)驗(yàn)需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行空白對(duì)照。(4)每一稀釋倍數(shù)的菌液都至少要涂布3個(gè)平板，作為實(shí)驗(yàn)重復(fù)，求其平均值，若其中有菌落數(shù)與其他實(shí)驗(yàn)懸殊過(guò)大的，需要對(duì)該平板重新制作。1．用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是(

)A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和261，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是209、240和250，取平均值233解析：在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，所以A、B兩項(xiàng)不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。答案：D2．如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)示意圖。據(jù)圖分析下列敘述正確的是(

)A．3號(hào)試管中樣品的稀釋倍數(shù)為103倍B．用4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)約為5號(hào)試管的10倍C．5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×108個(gè)D．該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要高解析：將10g土樣加入90mL無(wú)菌水中后，土樣稀釋10倍，再經(jīng)3次10倍稀釋得到3號(hào)試管中的樣品，故3號(hào)試管中樣品的稀釋倍數(shù)是104倍，A錯(cuò)誤；4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，其稀釋倍數(shù)為5號(hào)試管的10倍，如果稀釋倍數(shù)適當(dāng)，操作等正確，其得到的菌落平均數(shù)可能是5號(hào)的10倍，B正確；5號(hào)試管進(jìn)行稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的結(jié)果表明，每克土壤中的菌株數(shù)為(168＋175＋×106＝×109(個(gè))，C錯(cuò)誤；稀釋涂布平板法得到的菌落可能存在兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌長(zhǎng)成一個(gè)菌落的情況，因此該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要低，D錯(cuò)誤。答案：B

[方法技巧]

用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的方法(1)稀釋涂布平板操作要求：按照平行重復(fù)原則每一稀釋度的菌液涂布3個(gè)或3個(gè)以上的平板。(2)計(jì)數(shù)的時(shí)機(jī)：當(dāng)各平板上菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)選擇可用于計(jì)數(shù)的平板：選擇菌落數(shù)在30～300的平板(相同稀釋度的平板均符合該特點(diǎn))進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后取平均值。[夯實(shí)生命觀念]1．測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。2．稀釋涂布平板法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目，但統(tǒng)計(jì)結(jié)果往往比活菌數(shù)目低。3．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離該細(xì)菌。4．鑒定分解尿素細(xì)菌的方法是在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，據(jù)是否變紅進(jìn)行判斷。

[注重語(yǔ)言表達(dá)]1．怎樣評(píng)價(jià)選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落。提示：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。2．怎樣判斷樣品的稀釋操作是否成功？提示：如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。3．教材P22“旁欄思考題”：如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？提示：統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板上的菌落數(shù)的平均值，然后根據(jù)公式(C÷V)×M進(jìn)行計(jì)算。1．下列能篩選出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基是(

)A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水解析：分離獲得分解尿素的細(xì)菌應(yīng)采用選擇培養(yǎng)基，要求培養(yǎng)基中唯一的氮源為尿素，同時(shí)還要含有碳源、水、無(wú)機(jī)鹽，A正確。答案：A2．下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是(

)A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48hD．確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)解析：檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，用蒸餾水配制培養(yǎng)基，常用高壓蒸汽滅菌法滅菌后，取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組放置在適宜條件下培養(yǎng)，在確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落在30～300的平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤；A是培養(yǎng)基的滅菌方法，B設(shè)置了一系列對(duì)照實(shí)驗(yàn)，C是細(xì)菌的培養(yǎng)方法。答案：D3．關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，下列操作需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行的一組是(

)①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培養(yǎng)A．①②③④⑤ B．②③④⑤C．③④⑤ D．②③④解析：土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行無(wú)菌操作，其中①土壤取樣是在室外進(jìn)行，⑤微生物的培養(yǎng)是在恒溫箱中進(jìn)行，其余過(guò)程都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，D項(xiàng)正確。答案：D4．“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中以土壤中的細(xì)菌為研究對(duì)象，要達(dá)到的目的是(

)①?gòu)耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌②從土壤中分離出能夠分解氨的細(xì)菌③統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少分解尿素的細(xì)菌④統(tǒng)計(jì)所取土壤樣品中究竟有多少分解尿素的細(xì)菌A．①③ B．②④C．①② D．③④解析：從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌并對(duì)其計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)的是每克土壤樣品中含多少分解尿素的細(xì)菌，用公式“每克樣品中菌株數(shù)＝(C/V)×M”進(jìn)行推測(cè)。其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。