發(fā)酵靈芝多糖對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制及其與血清蛋白的分子對(duì)接模擬靈芝為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，具有抗腫瘤、提高機(jī)體免疫等功效。靈芝深層發(fā)酵技術(shù)縮短了靈芝的生產(chǎn)周期，增加了活性物的成分與含量，為靈芝的深度開(kāi)發(fā)與利用奠定了基礎(chǔ)。靈芝多糖為靈芝的主要活性成分之一，具有多種生物活性，特別是在抗腫瘤方面有較理想的藥效。靈芝多糖在體內(nèi)抗腫瘤活性的發(fā)揮也與人血清蛋白（）對(duì)其存儲(chǔ)和運(yùn)輸有關(guān)，因此研究靈芝多糖與 的相互作用對(duì)靈芝多糖的開(kāi)發(fā)、劑量的調(diào)節(jié)以及藥理的研究具有重要的參考意義。針對(duì)目前發(fā)酵靈芝多糖抗肝癌作用機(jī)制的研究較少，并且還未見(jiàn)多糖與相互作用的研究，本論文以發(fā)酵靈芝多糖為研究對(duì)象，從直接抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)兩方面探討靈芝多糖對(duì)肝癌細(xì)胞 的抑制作用;在此基礎(chǔ)上采用 芯片技術(shù)研究靈芝胞內(nèi)多糖對(duì) 細(xì)胞 表達(dá)的影響；同時(shí)，由于典型致癌基因常為氧化受損，而 在芯片表面的連接方向?yàn)??'端，在芯片雜交過(guò)程中氧化受損的 因空間位阻效應(yīng)而影響核苷酸之間的配對(duì)?；诖?，本文采用量子化學(xué)法結(jié)合 軟件研究了氧化受損核苷酸與核苷酸的相互作用。最后采用 軟件的 模塊研究多糖與的分子對(duì)接，從多糖對(duì)親和力的角度來(lái)闡述多糖的抗腫瘤機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)首先從靈芝深層發(fā)酵上清液中提取胞外多糖，從發(fā)酵菌絲體中提取胞內(nèi)多糖。所獲得的胞外多糖主要組分的重均分子量（）為 ，其單糖組成（摩爾比）為巖藻糖：氨基葡萄糖：阿拉伯糖：氨基半乳糖：半乳糖：葡萄糖：木糖：

甘露糖；2胞.內(nèi)0多3糖:主8要3組.分0的8甘露糖,其相應(yīng)的單糖組成（摩爾比）為阿拉伯糖：半乳糖：葡萄糖:木糖：甘露糖.木糖：甘露糖.采用法研究了靈芝胞內(nèi)外多糖對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。在濃度為M，作用時(shí)間為時(shí)，胞外多糖與胞內(nèi)多糖對(duì)胞的抑制率分別為和其其。2在濃度為M，作用時(shí)間為時(shí)，胞外多糖與胞內(nèi)多糖對(duì)胞的抑制率分別為和其其。2與%此同時(shí)，考察了靈芝多糖對(duì)巨噬細(xì)胞釋放量的影響,結(jié)果表明胞內(nèi)多糖比胞外多糖更容易激活細(xì)胞從而釋放出更多的并且這兩種多糖對(duì)6細(xì)4胞.無(wú)毒性。在此基礎(chǔ)上，采用芯片技術(shù)研究靈芝胞內(nèi)多糖作用于細(xì)胞后對(duì)其的調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有61種產(chǎn)生差異性表達(dá)，包括其中 種的表達(dá)最并且這兩種多糖對(duì)6細(xì)4胞.無(wú)毒性。在此基礎(chǔ)上，采用芯片技術(shù)研究靈芝胞內(nèi)多糖作用于細(xì)胞后對(duì)其的調(diào)控作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有61種產(chǎn)生差異性表達(dá)，包括其中 種的表達(dá)最為顯著，的3表1達(dá)3上1調(diào)了92倍。的調(diào)控同時(shí)反映在免疫相關(guān)和癌癥直接相關(guān)的兩個(gè)方面，揭示靈芝胞內(nèi)多糖對(duì)細(xì)胞的抑制作用是通過(guò)這兩個(gè)方面而不是通常所認(rèn)為的僅僅通過(guò)免疫調(diào)控來(lái)實(shí)現(xiàn)的。氧化受損是基因突變誘發(fā)癌癥的主要原因之一。在芯片雜交過(guò)程中氧化受損的 核苷酸因空間效應(yīng)而影響其與）核苷酸的配對(duì)。受損的 核苷酸因空間效應(yīng)而影響其與）核苷酸的配對(duì)。基于此本文運(yùn)用量子化學(xué)法研究了種氧化受損的 核苷酸（ 、 、A、C、G、U）核苷酸的相互作用。研究表明反式構(gòu)型的所形成的復(fù)合物最穩(wěn)定。式構(gòu)型的所形成的復(fù)合物最穩(wěn)定。另外，順式另外，順式與形成復(fù)合物后，其分子間發(fā)生了氫遷移，從而使復(fù)合物更加穩(wěn)定。靈芝胞外多糖的抗腫瘤活性較弱，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)其進(jìn)行硫酸化修飾后發(fā)現(xiàn)其抗肝癌活性有所提高。其原因之一在于多糖的硫酸化修飾改變了多糖的構(gòu)型。因此，多糖的生物活性與其構(gòu)型密切相關(guān)。本文根據(jù)靈芝胞外多糖的單糖組成構(gòu)建多糖模型。采用軟件的 模塊構(gòu)建了主鏈分別為a葡聚糖（a）、a甘露糖（a ）和a半乳糖（a）的多糖。并且對(duì)每種多糖分別考慮一和一這兩種糖苷鍵類(lèi)型。在此基礎(chǔ)上，構(gòu)建取代度分別為和的硫酸化胞外多糖。從模擬的結(jié)果來(lái)看，a一 葡聚糖有直鏈狀構(gòu)型的趨勢(shì)，當(dāng)硫酸基取代在和位上時(shí)該多糖構(gòu)型也呈直鏈狀，其余硫酸化的a一葡聚糖均呈無(wú)規(guī)線(xiàn)團(tuán)；a 一葡聚糖、一一a半乳糖和一a甘露糖均以無(wú)規(guī)線(xiàn)團(tuán)存在，它們的硫酸化衍生物大多為直鏈狀構(gòu)型；一a甘露糖的構(gòu)象為直鏈型，且糖鏈帶有一定柔性。硫酸基取代在位時(shí)該多糖呈無(wú)規(guī)線(xiàn)團(tuán)。除此以外，該多糖的硫酸化衍生物均為直鏈狀。這表明多糖經(jīng)硫酸化后由于硫酸基團(tuán)的靜電排斥作用使得鏈的構(gòu)型更為舒展。多糖與 的相互作用影響著多糖在體內(nèi)抗腫瘤活性的發(fā)揮。本文采用分子對(duì)接法中 程序研究上述各多糖模型與 的相互作用。結(jié)果表明，大多數(shù)硫酸化多糖對(duì) 的親和力小于未硫酸化的多糖對(duì)的親和力。因此可以推測(cè)，硫酸化多糖在體內(nèi)的游離濃度較高，利于