四極桿系統(tǒng)的校正四極桿系統(tǒng)的校正校正–硬件vs軟件硬件的校正是由原廠和維修工程師進(jìn)行的，可以保證名義質(zhì)量數(shù)的準(zhǔn)度。對(duì)于某些應(yīng)用，硬件校正是足夠的。對(duì)于需要最高的質(zhì)量準(zhǔn)確度的情況，用戶可以通過(guò)Masslynx軟件進(jìn)行軟件校正，并將系統(tǒng)的質(zhì)量校正變得更為精確。在識(shí)別未知物以及MRM和SIR分析時(shí)，確認(rèn)選擇了準(zhǔn)確的質(zhì)量數(shù)，這是非常有用的。校正–硬件vs軟件硬件的校正是由原廠和維修工程師進(jìn)行校正中的可變因素環(huán)境的改變溫度或者濕度的改變

隨著時(shí)間變化而發(fā)生的電源變化

改變了分辨率設(shè)置

在儀器的校正范圍內(nèi)工作是非常重要的!如同您不愿意在定量曲線之外進(jìn)行定量計(jì)算一樣，您也不希望在您的質(zhì)量數(shù)校正曲線之外工作。校正中的可變因素環(huán)境的改變儀器的校正曲線（CalibrationCurves）一臺(tái)三重四極桿的儀器需要有三種校正曲線：對(duì)于MS1和MS2,有六條校正曲線靜態(tài)校正（Staticcalibration）可以使四極桿質(zhì)量分析器準(zhǔn)確地定位于感興趣的特定質(zhì)量數(shù)上。(例如調(diào)諧，SIR和MRM).掃描校正（Scanningcalibration）保證在掃描采集中峰采集的質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確性。(例如全掃描FullScan).掃描速度補(bǔ)償（Scanspeedcompensationcalibration）：當(dāng)儀器快速掃描是，補(bǔ)償系統(tǒng)中的“滯后時(shí)間”。質(zhì)譜儀的每一種校正都需要參考溶液。不過(guò)，MassLynx可以在一個(gè)步驟中執(zhí)行所有必須的校正。儀器的校正曲線（CalibrationCurves）一臺(tái)三校正步驟每個(gè)參考溶液的質(zhì)譜圖都是已經(jīng)采集好的。采集過(guò)的質(zhì)譜圖中的峰與儲(chǔ)存于參考文件表格中的預(yù)期理論質(zhì)量數(shù)相匹配。Amassspectrumofareferencesolutionisacquired.ThepeaksintheacquiredspectrumarematchedagainstatableofexpectedtheoreticalmasseswhicharestoredinaReferenceFile.參考文件中的每一個(gè)峰與采集的質(zhì)譜圖中對(duì)應(yīng)的峰相匹配。EachpeakintheReferenceFileismatchedtoacorrespondingpeakintheacquiredspectrumfile.Acalibrationcurveiscreatedthat‘a(chǎn)djusts’themassesoftheexperimantalspectralpeakstothetheoreticalmassesofpeaksaslistedinthereferencefile.一般注射泵TypicallyaSyringePumpcapableofdeliveringaslow,steadyflowrateof5or10μL/minisusedwithanInfusionKitconsistingofafusedsilicacapillarytubingwithappropriatefittings.校正步驟每個(gè)參考溶液的質(zhì)譜圖都是已經(jīng)采集好的。采集過(guò)的質(zhì)譜圖參考溶液（ReferenceSolutions）參考溶液用于在一個(gè)寬mass范圍內(nèi)產(chǎn)生多離子。質(zhì)譜儀可以在此范圍內(nèi)被校正。

常用的參考溶液:PEG,PPGNaI/CsI,NaI/RbIHorseMyoglobin,PolyAlanine在此章節(jié)的最后有一些常用的參考溶液的配制方法。參考溶液（ReferenceSolutions）參考溶液用參考文件ReferenceFile參考文件中包括參考溶液產(chǎn)生的質(zhì)譜峰的信息，Masslynx軟件將在校正過(guò)程中對(duì)其進(jìn)行搜索并匹配之。該文件既有mass（m/z

）信息，也有這些峰預(yù)期的強(qiáng)度。強(qiáng)度信息在校正LC/MS系統(tǒng)時(shí)，通常是不用的。參考文件置于Masslynx軟件的Ref文件夾下。參比文件都是text文本文件，可以用Notepad寫字板瀏覽之。參比文件必須具備一個(gè)“.ref”的擴(kuò)展名。參考文件ReferenceFile參考文件中包括參考溶液產(chǎn)MS校正的方式從調(diào)諧頁(yè)面進(jìn)入，選擇校正－儀器校正使用自動(dòng)調(diào)諧中的校正功能對(duì)于SQD、TQD，可以使用IntelliStart–InstrumentSetup功能進(jìn)行儀器校正MS校正的方式從調(diào)諧頁(yè)面進(jìn)入，選擇校正－儀器校正校正儀器CalibrateInstrument校正儀器CalibrateInstrument校正窗口

校正窗口校正的參考文件ExamplesofCalibrationReferenceFiles->Myo.refMyo1500.refMyo1500n.refMyoneg.refMyotrp.refPigb.refNaics.refNaics1.refNaics2.refNaics3.refNaics4.refNaineg.refNairb.refPegh.refPegh1000.refPegh2000.refpeghna.refpeghnam.refpeghnh4.refppghna.refppghnh4.refHorseMyoglobinandPigNaIwithCsorRbPEGorPPGCalibrationReferenceFilesAreStoredin:C:\MASSLYNX\REF校正的參考文件ExamplesofMyo.refNaicsNote:Na+ =22.9898Cs+ =132.9054I- =126.9045Na(NaI)+ =173Na(NaI)2+ =322Na(NaI)3+ =472校正的參考文件Note:校正的參考文件NaI參考溶液的特性

NaI基質(zhì)的溶液有Na、I的優(yōu)勢(shì)，并有單一同位素。系統(tǒng)不必區(qū)分來(lái)自于不同同位素的各組峰。solutionshavetheadvantageofsodiumandiodinebeingmonoisotopic.Therearenosetsofmultiplepeaksfromdifferentisotopesthatthesystemhastodifferentiatebetween.使用NaI/RbI溶液校正低于85amu，使用NaI/CsI溶液校正低于133amu時(shí)，存在問(wèn)題。Theremaybeaproblemwithcalibratingbelow85amuwithNaI/RbIand133amuwithNaI/CsI.完成了校正，在將所有的NaI清除出系統(tǒng)之前，可以看到ESP-的靈敏度降低，同時(shí)ESP+可以看到一系列Na的加合物YoumayseeadecreaseofsensitivityinnegativeESPandincreasedformationofsodiumadductsinpositiveESPrightafteryoucalibratetillalloftheNaIwashesoutofyoursystem.NaI溶液生成的離子可以高達(dá)4000amu。NaI參考溶液的特性NaI基質(zhì)的溶液有Na、I的優(yōu)勢(shì)，Magnifiedby450XMagnifiedby5XNaIRbI質(zhì)譜圖Magnifiedby450XMagnifiedbyPEG/PPG參考溶液的特性PEG/PPG基質(zhì)的溶液形成來(lái)源于不同同位素(主要是C)的多個(gè)峰。

這些同位素峰組可以檢查質(zhì)譜儀的分辨率。PEG/PPG溶液非常容易電離。PEG(或者PPG)的混合物可以在一個(gè)寬質(zhì)量數(shù)范圍內(nèi)產(chǎn)生離子(高達(dá)2500)。PEG/PPG溶液產(chǎn)生的碎片可以用于形成離子低至50amu之下。

PEG/PPG可能變得很“粘稠”，清洗出系統(tǒng)可能需要一些時(shí)間。

在確定的條件下，PEG/PPG溶液可以產(chǎn)生一系列的多電荷離子，也可以產(chǎn)生一系列的單電荷離子。這些系列可以交疊并導(dǎo)致在一定質(zhì)量數(shù)范圍內(nèi)的校正困難。PEG/PPG參考溶液的特性PEG/PPG基質(zhì)的溶液形成PEG1000質(zhì)譜圖實(shí)例PEG1000質(zhì)譜圖實(shí)例單電荷的銨加合物雙電荷的銨加合物PEG1000和醋酸銨單電荷的銨加合物雙電荷的銨加合物PEG1000和醋酸銨馬心肌紅蛋白（Myoglobin/PigB）參考溶液的特性當(dāng)分析蛋白和多肽時(shí)，質(zhì)譜儀常常測(cè)定多電荷離子的m/z.對(duì)于一些化合物，電荷狀態(tài)可以輕易地多達(dá)50。當(dāng)校正分析多電荷離子的四極桿系統(tǒng)時(shí)，校正通常是在能產(chǎn)生多電荷離子的校正溶液基礎(chǔ)上進(jìn)行的。Whencalibratingquadrupolesystemsthatareanalyzingmultiplychargedspecies,thecalibrationisoftenperformedonareferencesolutionthatproducesmultiplychargedions.這類應(yīng)用中的參考溶液的代表是馬心肌紅蛋白以及豬和/或牛血清蛋白。馬心肌紅蛋白（Myoglobin/PigB）參考溶液的特性當(dāng)17151413121110918851816192021222324多電荷化合物的質(zhì)譜圖171514131211109188518161920212Mass校正概述選擇并準(zhǔn)備參考溶液（referencesolution）。設(shè)置針/泵（syringe/pump）與正確的源。清除現(xiàn)有的任何軟件校正。對(duì)質(zhì)譜儀進(jìn)行調(diào)諧，找到參考溶液最佳靈敏度的參數(shù)。檢查Mass校正中用到的參數(shù)。開始mass校正步驟。必要時(shí)，查看并編輯校正。Mass校正概述選擇并準(zhǔn)備參考溶液（referencesTheCalibration‘Uncal.cal’shouldbeablankcalibration(nosoftwarecalibration)whichyoucanloadin(use“File/Open”menuitem).未校正的參考文件UncalibratedReferenceFileTheCalibration‘Uncal.cal’sh清除當(dāng)前的校正

清除當(dāng)前的校正選擇一個(gè)參考文件

選擇一個(gè)參考文件質(zhì)量分析器的設(shè)置質(zhì)量分析器的設(shè)置質(zhì)譜儀的調(diào)諧質(zhì)譜儀的調(diào)諧設(shè)置峰顯示的參數(shù)從校正范圍內(nèi)選擇四個(gè)代表性的峰并輸入到Mass一欄中。確認(rèn)選擇了計(jì)劃校正范圍的頂端和底端的質(zhì)量數(shù)。Makesureyoucheckamassnearthetopandbottomofthemassrangeoverwhichyouplantocalibrate.對(duì)于每一個(gè)峰，設(shè)置范圍（Span）大約為5。確認(rèn)選擇了質(zhì)譜上信號(hào)最弱的峰設(shè)置峰顯示的參數(shù)從校正范圍內(nèi)選擇四個(gè)代表性的峰并輸入到Mas峰優(yōu)化針對(duì)四個(gè)峰，盡可能地優(yōu)化毛細(xì)管和錐孔電壓。記住針對(duì)一個(gè)峰的絕對(duì)優(yōu)化條件也許會(huì)完全消除另一個(gè)峰……此處的目標(biāo)是找出符合四個(gè)峰的條件。同時(shí)也要檢查參考溶液中強(qiáng)度最大的峰，以此確認(rèn)系統(tǒng)并未被飽和。峰優(yōu)化針對(duì)四個(gè)峰，盡可能地優(yōu)化毛細(xì)管和錐孔電壓。編輯參考文件EditingtheReferenceFile如果您不能找到某一個(gè)峰，它們可以通過(guò)在峰前面添加一個(gè)“；”而加以注釋。在校正步驟中，將不使用此標(biāo)示出的峰。確認(rèn)保存了(File,Save)參考文件。如果標(biāo)識(shí)出了特定的峰，保存尤其重要。編輯參考文件EditingtheReferenceFiAutoCalCheckParametersAutoCalCheckParameters校正參數(shù)CalibrationParameters校正參數(shù)CalibrationParametersQuadMassMeasureParametersQuadMassMeasureParameters開始校正采集StartCalibrationAcquisition開始校正采集StartCalibrationAcquis采集參數(shù)AcquisitionParameters采集參數(shù)AcquisitionParameters針對(duì)靜態(tài)校正針對(duì)掃描速度補(bǔ)償針對(duì)scan校正采集參數(shù)AcquisitionParameters針對(duì)靜態(tài)校正針對(duì)掃描速度補(bǔ)償針對(duì)scan校正采集參數(shù)AcquAcquiringforCalibrationAfteralltheparameters(massrange,runduration,etc.)areentered,ClickOKandyouwillreturntowindowshowntotheright.ThisbringsyoubacktotheAutomaticCalibrationwindow(showntotheright),ClickOKtobeginacquisitionAcquiringforCalibrationAfterMonitoringtheAcquisition一旦校正采集開始，可以從此窗口監(jiān)測(cè)校正過(guò)程。每當(dāng)一個(gè)校正完成，每一階段都會(huì)顯示狀態(tài)（pass/fail）。MonitoringtheAcquisition一旦校正檢查校正文件如果你選擇了“打印報(bào)告”（PrintReport）選項(xiàng)，Masslynx將在校正完成后打印一份有所有校正的報(bào)告。檢查報(bào)告，查看校正是怎樣進(jìn)行的，報(bào)告包括：采集的質(zhì)譜圖AcquiredSpectrum參考峰的質(zhì)量數(shù)ReferencePeakMasses采集的峰與校正線之間的偏差。Deviationsoftheacquiredpeaksfromthecalibrationline.檢查校正文件如果你選擇了“打印報(bào)告”（PrintRepo采集的譜圖參比峰的質(zhì)量數(shù)采集的峰與校正線之間的偏差打印出的校正報(bào)告的實(shí)例采集的譜圖打印出的校正報(bào)告的實(shí)例AcquisitionofSpectraforCalibration針對(duì)每一個(gè)校正類型，質(zhì)譜圖都采集并存放在一個(gè)后綴是.raw的文件中。

質(zhì)譜文件名

靜態(tài)Static:StaticMS1=StatMS1.rawStaticMS2=StatMS2.raw掃描Scanning:ScanningMS1=ScnMS1.rawScanningMS2=ScnMS2.raw掃描速度補(bǔ)償ScanSpeedCompensation:ScanSpeedCompensationMS1=FastMS1.rawScanSpeedCompensationMS2=FastMS2.rawAcquisitionofSpectraforCalScanningCalibrationScanSpeedCompensation校正中采集的質(zhì)譜圖實(shí)例

ScanningScanSpeed校正中采集的質(zhì)譜圖實(shí)例對(duì)于靜態(tài)校正，質(zhì)譜圖只采集每一個(gè)峰附近較小的質(zhì)量范圍。對(duì)于652峰，質(zhì)譜圖只測(cè)定648至657Da的范圍FromaStaticCalibration校正質(zhì)譜圖對(duì)于靜態(tài)校正，質(zhì)譜圖只采集每一個(gè)峰附近較小的質(zhì)量范圍。Fro質(zhì)量范圍

分辨率離子能量慢和快的掃描速度檢查校正質(zhì)量范圍分辨回顧校正報(bào)告

回顧校正報(bào)告回顧校正報(bào)告查看曲線:選擇校正類型(Static,Scanning,ScanSpeedCompensation)以及四極桿(MS1orMS2)2)可以用‘BrowseIn’瀏覽選擇相應(yīng)的文件:3)點(diǎn)擊‘OK’隨后出現(xiàn)校正報(bào)告?；仡櫺Ｕ龍?bào)告查看曲線:回顧校正文件回顧校正文件編輯校正有時(shí)選擇峰會(huì)出錯(cuò)，如此例所示.鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)擊并托拽到感興趣的峰上，可以編輯并手工選擇正確的峰。編輯校正有時(shí)選擇峰會(huì)出錯(cuò)，如此例所示.編輯校正選擇了錯(cuò)誤的峰錯(cuò)誤的峰取消選擇選擇正確的峰編輯校正選擇了錯(cuò)誤的峰錯(cuò)誤的峰取消選擇選擇正確的峰保存校正保存校正校驗(yàn)校正校正結(jié)果也可以被校驗(yàn)。Withthecalibrationthatistobeverifiedinplaceonthemassspectrometer,usethesamesetupasthatusedforthecalibration.注意應(yīng)該使用同樣的分辨率和離子能量。

從采集對(duì)話框中，選擇‘Acquire&Verify’選項(xiàng)，并點(diǎn)擊‘OK’。校驗(yàn)校正校正結(jié)果也可以被校驗(yàn)。VerifyingaCalibrationSpectrawillbeacquiredandpeakmassescomparedagainstreferencefilemassesjustlikeinthecalibrationprocedure.Themassdifferenceswillbereportedtoseehowgoodthecurrentcalibrationis.Thespectraacquiredfortheverificationprocesswillbestoredusingslightlydifferentfilenames.Static:StaticMS1=StatMS1V.rawStaticMS2=StatMS2V.rawScanning:ScanningMS1=ScnMS1V.rawScanningMS2=ScnMS2V.rawScanSpeedCompensation:ScanSpeedCompensationMS1=FastMS1V.rawScanSpeedCompensationMS2=FastMS2V.rawVerifyingaCalibrationSpectra查看校正驗(yàn)證ReviewingaCalibrationVerification需要時(shí)可以查看每種校正的驗(yàn)證，從Ifitisnecessarytoreviewthecurvesforeachtypeofverification,thenfromthewindowmenu,clickon’Process,VerificationFromFile’and‘browsein’theappropriatefile.(SimilartoreviewingacalibrationasshowninStep16b.)查看校正驗(yàn)證ReviewingaCalibrationVerificationReportAThetopgraphshowsthepeaksfoundintheinfusedreferencesolution.ThemiddlegraphshowstheReferenceFilepeaks.Thelowergraphshowsthedifferencebetweenthemassfound(acquiredusingthecalibratedsystem)andthemassintheReferenceFile.Themassdifferencesshouldbelessthan0.1amu.VerificationReportAThetopg保存校正質(zhì)譜圖SavingCalibrationSpectraThecalibrationspectrumdatafilesareoverwritteneverytimeacalibrationisperformed.Saveormovethecalibrationdatafoldersoffintoanotherfolderforlateruseifneeded.Forexample,youcanload‘Uncal’andpracticechangingthemassmeasureparameters.Thenchoosethe‘RecalibrateFromFile’optionandselectoneofyoursavedfiles.保存校正質(zhì)譜圖SavingCalibrationSpecAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationAutoTuneWizard–CalibrationCalibrateCheckCalibrateCheckPEG1000withAmmoniumAcetatePEG1000withAmmoniumAcetateSodiumIodideSolutionforPositiveIonElectrosprayPrepareasolutionofsodiumiodideataconcentrationof:2μg/μL(micrograms/microliter)(2

mg/mL)in50:50propran?2?ol(IPA)/waterwithnoadditionalacidorbuffer.Addcesiumiodidetoaconcentrationof0.05

μg/μL(micrograms/microliter)(0.05

mg/mL).Cesiumiodideistoobtainapeakatm/z133(Cs+).Withoutthis,thereisagapinthecalibrationfileof150

amufromm/z

23(Na+)andthefirstclusteratm/z173,whichleadstopoormasscalibrationinthismassrange.DonotaddmoreCsIthansuggested,asitcanresultinamorecomplexspectrumduetotheformationofNaCsIclusters.Usereferencefile:NAICS.REFSodiumIodideSolutionforPosSodiumIodideSolutionforPositiveIonElectrospray(Alternative)Prepareasolutionofsodiumiodide,asdescribedpreviously,butinsteadofaddingcesiumiodide,userubidiumiodideatacon