丁香園上面總結(jié)的方法,排版有點亂。其實過程與大鼠近似，我的經(jīng)驗是：1.材料準(zhǔn)備；大剪刀、眼科剪、眼科鑷、大鑷子、濾紙、竹簽等；2。步驟：處死小鼠，取頭顱;剪開皮膚，漏出顱骨；用大尖鑷子夾住兩側(cè)眼眶，用眼科剪稍剪除顱骨中線；再用眼科鑷夾住顱骨從內(nèi)向外夾，從下向上逐步去除顱骨;當(dāng)全腦露出時,再用眼科鑷去除腦膜和血管；然后用竹簽從嗅球處向下取出全腦，即可.3.注意事項：用力輕柔，否則容易弄破腦部；用剪刀剪顱骨時,一定要貼壁向上剪,否則容易剪破腦部；去除腦膜時,不能硬拉，否則容易弄破大腦；取出全腦時應(yīng)把頭頂朝下，用竹簽輕輕取出，離桌面也不要太遠、高；若留病理，建議一定要取完整無損的大腦.做免疫組化的話,稍微麻煩一點兒，因為腦組織含水量多，要固定的好，就需要先灌注.先麻醉小鼠剪開胸腔，找到心臟,從心尖入針，剪開右心耳先用生理鹽水灌注直到從心耳流出來的水清亮了再改用固定液(一般是4％多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬小鼠只需要用注射器就行了，我做的25~35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛.具體步驟:常規(guī)麻醉小鼠將其固定用剪刀剪開胸部皮膚暴露出皮下組織，剪開時注意鈍性分,以免誤傷然后用鑷子提起劍,用剪刀剪開胸腔剪斷兩側(cè)肋骨,暴露整個胸腔，小心誤傷肺及心臟、大血管。用鑷子撕開心包膜，暴露心臟,用眼科剪剪開右心耳，然后提起心尖將準(zhǔn)備好的生理鹽水注射器插入左心室,注射，注射時小心針頭滑脫.生理鹽水灌流至肺和肝的顏色都變成灰白色即待抽搐結(jié)束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在頸部離斷頭顱,用剪刀在小鼠頭顱中間皮膚剪一刀將兩邊皮膚向下翻用手捏住暴露整個顱骨用眼科剪從脊髓端插入椎孔沿著顱正中線剪開顱,注意剪刀向上翹一些以免誤傷腦組,剪開后用彎眼科鑷分離顱骨小心分離直至暴露整個大腦然后用彎鑷伸入顱底離斷顱底神經(jīng)，就可以取出整個腦子了。放多聚里固定24h后包埋切片即可。具體操作如下：實驗操作步驟：1)小鼠稱重，以每克小鼠0。0025ml％戊巴比妥鈉劑量的實施腹腔麻醉。也可以用10%的水合氯,3-5ul/g腹腔注射麻醉。2)將麻醉的小鼠仰放在操作臺上，去毛。3）解剖小鼠，暴露心.4）找到心尖部，左手用鑷子提起心尖部，右手或左手將灌流針刺破心尖部進針約0.5c（最好是用小點的針頭，止血鉗固定針尖，剪開右心.5)將灌流器的導(dǎo)管部開口放到生理鹽水中里打開灌流器灌流直到從右心耳流出的液體為無色,同時小鼠肝臟色淡，腸管腫脹為止，停止灌流。沒有灌流器的用注射器或者吊瓶都可以.6)將灌流器的導(dǎo)管小心的移至4％多聚甲醛或25％戊二醛中注意不要產(chǎn)生氣泡開始灌流.此時如果看到小鼠四肢突然緊張尾部卷曲,說明達到固定效果.7）灌流大約5分鐘，灌流液用量約150毫升左右結(jié)束。（小鼠的用量沒這么多）8)取材。取實驗所需的標(biāo)本。9)將取出的材料放到事先準(zhǔn)備的多聚甲（戊二醛)中固定2——4小時后移至30%蔗糖中4度冰箱保存過夜。我們實驗室鼠腦冰凍切片采用4％的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注saline20ml,4％多聚甲醛20ml經(jīng)左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6，浸20％—30％糖沉,就可以切,切片首先需要冰凍切片機，我們的leica1900的不知道lz那里有沒有這個機,還有一種原始的自己刷凍臺的那種，比較麻煩，切片厚度大概選擇20-40um差不多開胸時要把肋骨提,大U字剪開左右肋弓后掀起，血管鉗固定一下（以免擋遮視野;平頭針插入后稍許打開輸液器開關(guān)并迅速剪開充盈的右心耳（可見血涌出),用血管鉗將心室和平頭針一起鉗夾固定再（但滴速也不能太快以免血管被沖破,，。：%醛-鈉/鈉：A醛 g水 lBO 6。g水lC：Hg水mA在l的待時,要。B液和C液配后,將B液入C液入A液以nH或Nl將H調(diào)至7。2～,至l合圍:究,時,配醛存但同時也看到了關(guān)于同一個問題有很多不同的回,我想結(jié)合自己的實驗，希望各位老師能就我提出的問題說說自己的經(jīng)驗看,給我啟示,因為很多自己未做,怕自己哪里操作不恰當(dāng)而影響實驗結(jié)果，非常感謝各位老師的不啻賜教！首先,我做的是大鼠（體重約230—250g），模型是大腦中動脈栓塞，在不同的量PRnt的面.：量R：1么,，？2轉(zhuǎn)0？3中A—0么,？nt：4注,？5于R和nt段話)：6液,？7、4？8、4？9的S是B度是5到%再%么?？0次,后,，后%用M的S水3了更的,？1或.6？瓶l入g鈉,素存,用4推,推l，n度。含U于,用l成0液肝。素0g凝0l液(按g于0，0單凝l血液計）.如果肝素的純度不高，或過期，所用的劑量應(yīng)增大2~3倍。用于試管內(nèi)抗凝時，一般可配成1%肝素生理鹽水溶液，取0.1ml加入試管內(nèi)，加熱80℃烘干，每管能使5～10ml血液不凝固.作全身抗凝時，一般劑量為：大鼠2.5～3mg·(200300g體重)—1,兔或貓10mg·kg1，狗5~10mg·kg1。如果肝素的純度不高，或過期，所用的劑量應(yīng)增大2~3倍。7、4％多聚甲醛灌注固定一般灌注多常時間?多少毫升？一般多聚甲醛灌注20min100ml縮(這）,的。8、%多？片,片,者h。小干,放。9水,S是B度是15％到20％再3%？用0M的PB配配0和0度糖4h?，F(xiàn)h底.0后,再，后30％用0。M的S水3天會好,如本,？話,囟m前囟m左。經(jīng)則,。T—PE與WB都是分子生物學(xué)方面的實驗,可以共用一個標(biāo)本一般不需要灌注，文獻上都如,需要新鮮的腦組織，液氮速凍，80度保存，半年應(yīng)該沒問題，既然是MCA取A域,后m帶,子子,注,頭。水3脫關(guān),，0糖1天%糖2共3。注吧?取T—R和B比冰Sl一般1完)間,是，）了,有。我也說兩句冰凍切片灌注用生理鹽水還是PBS這個問題不是主要問題主要作用在于你能否沖干凈血管內(nèi)的血液,而且一般觀點認為灌注液最好在10分鐘之內(nèi)沖完(原因可能在于缺血后腦細胞在10分鐘后會大量死亡）,而且灌注液最好不要用冰凍的（原因有時候冰凍的液體也會使老鼠抽搐，造成你的判斷失誤)沖洗液的速度越快越好,量要適當(dāng)控制過量的話細胞會腫大,一般我們以肝臟變白為標(biāo)準(zhǔn)，如果還不放心的話，再稍微延長點時間，但是最好不要超過10分鐘。灌注時有一點小技巧,就是把心臟稍微往大鼠的右邊向上扭一點,以進針沒有阻滯感為佳.以6到12小及行.這的,個是0％水(s配置)等。單凍,讓一在-0左—5。卡C0的片程.其應(yīng)了.：、0。1M的PB0。M的S調(diào)H驗耳。腦,快,而體.在4度行.4％是4。，是24小過1周失,不結(jié)。到4度行4，h后如2天大：是0？，。好4至0度.外用T埋,到-0是0度,？?？四:這？了.過,所以急切想聽聽大家的看法。