臨床標(biāo)本微生物學(xué)檢驗(yàn)（二）

腦脊液標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)

學(xué)習(xí)目標(biāo)１熟悉腦脊液標(biāo)本中常見的病原體

２熟悉腦脊液標(biāo)本采集３掌握腦脊液標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)?zāi)X脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)正常人的腦脊液是無(wú)菌的。一旦感染，病情危急。一、腦脊液中常見病原體臨床上最常見的1．細(xì)菌性腦膜炎以結(jié)核性腦膜炎最為常見，肺炎球菌腦膜炎、流感嗜血桿菌腦膜炎及其他革蘭陰性桿菌腦膜炎均可發(fā)生。2．真菌性腦膜炎最常見隱球性腦膜炎。3．病毒性腦膜炎乙腦病毒、腸道病毒。腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)?zāi)X脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)二、標(biāo)本采集1.標(biāo)本采集多由臨床醫(yī)生采集，以70%酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之；然后以一特制通管針，輕輕的由第三與第四腰椎間的中線部位穿刺入脊髓蛛網(wǎng)膜采集約3～5ml腦脊液于3支無(wú)菌試管中，每支試管至少1～2ml；然后馬上將第2支（或第1支）送至實(shí)驗(yàn)室。做腦脊液培養(yǎng)時(shí)，建議同時(shí)做血培養(yǎng)。腰穿時(shí)必須作徹底消毒和無(wú)菌操作。2.標(biāo)本的運(yùn)送常溫立即送檢，實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)立即接種。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果，在結(jié)果報(bào)告時(shí)，在備注處注明此情況。如不能及時(shí)送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請(qǐng)勿使用血培養(yǎng)瓶）腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)程序腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)三、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)程序三、細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)?zāi)X脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)操作流程腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（二）檢驗(yàn)方法

（1）一般細(xì)菌涂片鏡檢：取沉淀物涂片，革蘭染色鏡檢，可初步報(bào)告。1.涂片鏡檢

混濁或膿性腦脊液可直接涂片，染色鏡檢。無(wú)色透明的腦脊液應(yīng)以3000r/m離心10～15分鐘，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牡牟煌扇〔煌娜旧椒ㄧR檢。

腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（二）檢驗(yàn)方法（2）結(jié)核分枝桿菌檢查：腦脊液表面如形成纖維網(wǎng)，疑為結(jié)核分枝桿菌，以4000r/min離心30分鐘，取沉淀物做涂片，抗酸染色鏡檢，可初步報(bào)告。腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（二）檢驗(yàn)方法（3）新型隱球菌檢查：取沉淀物涂片，墨汁染色鏡檢，可初步報(bào)告。2.分離培養(yǎng)與鑒定腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（1）一般細(xì)菌培養(yǎng)：取標(biāo)本分區(qū)劃線接種于血平板和巧克力平板上，置35℃CO2培養(yǎng)18～24h。根據(jù)菌落特征和形態(tài)染色，進(jìn)一步做生化試驗(yàn)及血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行鑒定，同時(shí)做AST。

（2）結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：疑結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，取腦脊液接種于羅-琴或米氏7H-10培養(yǎng)基，斜置于35℃培養(yǎng)7天后直立，繼續(xù)孵育至1個(gè)月，有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，對(duì)菌落進(jìn)行鑒定。腦脊液標(biāo)本的檢驗(yàn)（3）真菌培養(yǎng)：疑真菌感染時(shí)，用血平板或沙保弱培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，分別置22℃及35℃培養(yǎng)，有菌落生長(zhǎng)進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。

3.結(jié)果報(bào)告一旦發(fā)現(xiàn)病原體，立即報(bào)告臨床醫(yī)生。增菌培養(yǎng)過(guò)程中有菌生長(zhǎng)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行涂片、革蘭染色、鏡檢，及時(shí)報(bào)告細(xì)菌種類（