②抗原性（antigenicity)，指與抗體反應的性質(zhì)，這種結合反應具有特異性?？乖倪@兩種特性是不同的，具有免疫原性的物質(zhì)必然有抗原性，反之則不一定成立。具有上述兩種特性的物質(zhì)稱為完全抗原，只具有抗原性的物質(zhì)稱為半抗原，它能與抗體結合但不能誘導機體產(chǎn)生免疫應答.②抗原性（antigenicity)，指與抗體反應的12.抗體（antibody,Ab)機體受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)一種能與相應抗原發(fā)生特異性結合的球蛋白，因其具有免疫活性，習慣上稱為免疫球蛋白.

2.抗體（antibody,Ab)24.抗原抗體反應抗原與抗體相互作用是免疫學的基礎，二者通過大量非共價鍵連接，包括靜電力、氫鍵、疏水作用和范德華力等?？乖涂贵w在體內(nèi)進行的反應稱為免疫反應，在體外進行的反應稱為血清學反應。4.抗原抗體反應35.免疫分析免疫分析方法是研究免疫學的工具。免疫分析是基于抗原抗體之間的特異性相互作用從而實現(xiàn)對抗原、抗體或相關物質(zhì)進行分析檢測的方法。免疫反應的高選擇性、高親和性和高靈敏性為免疫分析的可靠和準確提供了保證。5.免疫分析4從本質(zhì)上講，幾乎所有的免疫分析都是基于識別位點的占據(jù)率的測定，根據(jù)這種反應性質(zhì)可分為競爭免疫分析和非競爭免疫分析。從本質(zhì)上講，幾乎所有的免疫分析都是基于識別位點的占據(jù)率的測定5二、酶聯(lián)免疫吸附分析法1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。

ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(immunoenzymatictechniques)的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術。二、酶聯(lián)免疫吸附分析法1971年瑞典學者Engvail和Pe6酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗體反應的高靈敏性和強特異性于一體，表現(xiàn)出簡單、快速、靈敏和選擇性高等優(yōu)勢，在20世紀80年代得到了快速發(fā)展，尤其在農(nóng)藥殘留測定方面表現(xiàn)最為活躍。采用EIJSA法不僅可以定性，而且可以定量，使用多孔滴定板，一次可進行大批量樣品的測定。酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗體反應的高靈敏性7用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；②酶標記的抗原或抗體（標記物）酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗體反應的高靈敏性和強特異性于一體，表現(xiàn)出簡單、快速、靈敏和選擇性高等優(yōu)勢，在20世紀80年代得到了快速發(fā)展，尤其在農(nóng)藥殘留測定方面表現(xiàn)最為活躍。4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽ELISA方法的建立包括待測農(nóng)藥、滴定板和酶的選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備和樣品前處理方法及質(zhì)量控制等。4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測三、ELISA應用實例ELISA方法的建立包括待測農(nóng)藥、滴定板和酶的選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備和樣品前處理方法及質(zhì)量控制等。用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；抗原與抗體相互作用是免疫學的基礎，二者通過大量非共價鍵連接，包括靜電力、氫鍵、疏水作用和范德華力等。甲氟磷酸異已酶（SOMAN）、③酶作用的底物（顯色劑）抗原和抗體在體內(nèi)進行的反應稱為免疫反應，在體外進行的反應稱為血清學反應。已商品化的篩選農(nóng)藥殘留的EIASA試劑盒種類很多，不僅能用于各種食品和多種環(huán)境樣品中的殺蟲劑、殺菌劑、除草劑分析，而且也能檢測多種環(huán)境污染物，如多氯聯(lián)苯、多環(huán)芳烴，以及黃曲霉素等多種天然毒素。已商品化的篩選農(nóng)藥殘留的EIASA試劑盒種類很多，不僅能用于各種食品和多種環(huán)境樣品中的殺蟲劑、殺菌劑、除草劑分析，而且也能檢測多種環(huán)境污染物，如多氯聯(lián)苯、多環(huán)芳烴，以及黃曲霉素等多種天然毒素。ELISA一次只能檢測單一農(nóng)藥或結構近似的少數(shù)幾種農(nóng)藥，不能解決農(nóng)藥多殘留分析問題。而且抗體制備難度較大。用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；已商品化的篩8目前抗體數(shù)量還較少；分析會受到特異性或非特異性的干擾；如果在不能肯定試樣中農(nóng)藥品種的情況下，檢測具有一定的盲目性；此外有可能出現(xiàn)假陽性或假陰性現(xiàn)象等等。隨著技術的日趨成熟，ELISA在農(nóng)藥殘留速測中的應用會得到新的發(fā)展。目前抗體數(shù)量還較少；分析會受到特異性或非特異性的干擾；如果在91.基本原理將抗原或抗體固定于合適的載體上，并保持其生物活性．使抗原或抗體與某種酶連接．這種酶標抗原或抗體同時其有免疫活性和酶的活性；待測樣品和酶標抗原或抗體與包被的抗原或抗體經(jīng)過一系列反應；用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；加入酶反應的底物，復合物上的酶催化底物使其水解，氧化或還原成有色產(chǎn)物，一定條件下，產(chǎn)物的色澤與待測物的含量直接相關，根據(jù)顏色反應的深淺對待測物進行定性或定量分析。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。1.基本原理10底物顯色定性或定量的分析原理包被反應加入待測抗體或抗原和酶標抗原或抗體洗滌使結合在固相上的抗原抗體復合物與未結合的分離1234底物顯色原理包被反應洗滌123411在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）②酶標記的抗原或抗體（標記物）③酶作用的底物（顯色劑）在這種測定方法中有3種必要的試劑：12

測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活13其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。

這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。

其方法簡單，方便訊速，特異性強。其所生成的顏色深淺與欲測的抗原（抗體）含量成正比。14

酶結合物是酶與抗體或抗原、半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結的產(chǎn)物。是ELISA成敗的關鍵試劑，它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應，還具有酶促反應，顯示出生物放大作用，但不同的酶選用不同的底物，將得到不同的顏色反應.酶結合物是酶與抗體或抗原、半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結的產(chǎn)15酶底物顯色反應

測定波長

辣根過氧化物酶鄰苯二胺

四甲替聯(lián)苯胺

氨基水楊酸

鄰聯(lián)苯甲胺

2,2‘-連胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)銨鹽

橘紅色

黃色

棕色

蘭色

藍綠色492460449

425

642

堿性磷酸酯酶

4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽黃色

紅色400

500葡萄糖氧化酶

ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭黃色

深藍色405420β-Ｄ－半乳糖苷酶

甲基傘酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)熒光

黃色

360,450

420

酶底物顯色反應測定波長辣根過氧化物酶鄰苯二胺

四甲16殘留農(nóng)藥檢測方法免疫分析法課件17三、ELISA應用實例測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。西維因（Carbaryl）、已商品化的篩選農(nóng)藥殘留的EIASA試劑盒種類很多，不僅能用于各種食品和多種環(huán)境樣品中的殺蟲劑、殺菌劑、除草劑分析，而且也能檢測多種環(huán)境污染物，如多氯聯(lián)苯、多環(huán)芳烴，以及黃曲霉素等多種天然毒素。1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。②抗原性（antigenicity)，指與抗體反應的性質(zhì)，這種結合反應具有特異性。在這種測定方法中有3種必要的試劑：ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測已商品化的篩選農(nóng)藥殘留的EIASA試劑盒種類很多，不僅能用于各種食品和多種環(huán)境樣品中的殺蟲劑、殺菌劑、除草劑分析，而且也能檢測多種環(huán)境污染物，如多氯聯(lián)苯、多環(huán)芳烴，以及黃曲霉素等多種天然毒素?？乖c抗體相互作用是免疫學的基礎，二者通過大量非共價鍵連接，包括靜電力、氫鍵、疏水作用和范德華力等。飼料中有害微生物的快速篩檢（如沙門氏菌）飼料中毒素的測定（主要包括黃曲霉毒素，簡曲霉毒素）測定的對象可以是抗體也可以是抗原?？乖涂贵w在體內(nèi)進行的反應稱為免疫反應，在體外進行的反應稱為血清學反應。ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測三、ELISA應用實例18殘留農(nóng)藥檢測方法免疫分析法課件19具有上述兩種特性的物質(zhì)稱為完全抗原，只具有抗原性的物質(zhì)稱為半抗原，它能與抗體結合但不能誘導機體產(chǎn)生免疫應答.4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽甲氟磷酸異已酶（SOMAN）、加入酶反應的底物，復合物上的酶催化底物使其水解，氧化或還原成有色產(chǎn)物，一定條件下，產(chǎn)物的色澤與待測物的含量直接相關，根據(jù)顏色反應的深淺對待測物進行定性或定量分析。用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；甲基傘酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)④陰性和陽性對照品（定性測定），參考標準品和控制血清（定量測定）；酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗體反應的高靈敏性和強特異性于一體，表現(xiàn)出簡單、快速、靈敏和選擇性高等優(yōu)勢，在20世紀80年代得到了快速發(fā)展，尤其在農(nóng)藥殘留測定方面表現(xiàn)最為活躍。ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）飼料中鹽酸克倫特羅的測定分析會受到特異性或非特異性的干擾；ELISA在飼料安全檢測中的應用1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測3.ELISA方法的建立

ELISA方法的建立包括待測農(nóng)藥、滴定板和酶的選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備和樣品前處理方法及質(zhì)量控制等。具有上述兩種特性的物質(zhì)稱為完全抗原，只具有抗原性的物質(zhì)稱為半20殘留農(nóng)藥檢測方法免疫分析法課件21三、ELISA應用實例

飼料中鹽酸克倫特羅的測定飼料中毒素的測定（主要包括黃曲霉毒素，簡曲霉毒素）飼料中有害微生物的快速篩檢（如沙門氏菌）ELISA在飼料安全檢測中的應用三、ELISA應用實例飼料中鹽酸克倫特羅的測定ELISA22

甲胺磷殘留分析甲基對硫磷殘留分析呋喃丹殘留分析ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測甲胺磷殘留分析ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測23

主要有除草劑與殺蟲劑兩大類例如殺暝松（FN）、甲氟磷酸異已酶（SOMAN）、草不綠（Alachor）、西維因（Carbaryl）、多菌靈及克菌丹（Captan）等。農(nóng)藥的檢測：主要有除草劑與殺蟲劑兩大類農(nóng)藥的檢測：24三、ELISA應用實例甲基對硫磷殘留分析抗原和抗體在體內(nèi)進行的反應稱為免疫反應，在體外進行的反應稱為血清學反應。⑤結合物及標本的稀釋液；免疫分析是基于抗原抗體之間的特異性相互作用從而實現(xiàn)對抗原、抗體或相關物質(zhì)進行分析檢測的方法。測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。具有上述兩種特性的物質(zhì)稱為完全抗原，只具有抗原性的物質(zhì)稱為半抗原，它能與抗體結合但不能誘導機體產(chǎn)生免疫應答.如果在不能肯定試樣中農(nóng)藥品種的情況下，檢測具有一定的盲目性；飼料中鹽酸克倫特羅的測定飼料中毒素的測定（主要包括黃曲霉毒素，簡曲霉毒素）ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭磺胺二甲嘧啶及磺胺二甲氧嘧啶檢測試劑盒；飼料中鹽酸克倫特羅的測定加入酶反應的底物，復合物上的酶催化底物使其水解，氧化或還原成有色產(chǎn)物，一定條件下，產(chǎn)物的色澤與待測物的含量直接相關，根據(jù)顏色反應的深淺對待測物進行定性或定量分析。ELISA用于農(nóng)藥殘留的檢測快速ELISA試劑盒ELISA試劑盒目前在食品檢測、水產(chǎn)品檢測、動物檢疫檢測和農(nóng)藥殘留檢測等方面已得到了廣泛的應用。它具有快速、靈敏度高、測定步驟簡便、成本低、操作安全等特點，完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：①包被抗原或抗體的固相載體；②酶標抗原或抗體；③酶的底物；④陰性和陽性對照品（定性測定），參考標準品和控制血清（定量測定）；⑤結合物及標本的稀釋液；⑥洗滌液；⑦酶反應終止液。三、ELISA應用實例快速ELISA試劑盒ELISA試劑盒25商品化產(chǎn)品：非典型肺炎冠狀病毒抗體酶聯(lián)免疫試劑盒克倫特羅檢測試劑盒；磺胺二甲嘧啶及磺胺二甲氧嘧啶檢測試劑盒；氯霉素檢測試劑盒；商品化產(chǎn)品：26酶免疫分析儀器酶免疫分析儀器27抗原和抗體在體內(nèi)進行的反應稱為免疫反應，在體外進行的反應稱為血清學反應。用洗滌的方法將固相載體上的復合物與其他物質(zhì)分離；測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。飼料中有害微生物的快速篩檢（如沙門氏菌）4-硝基酚磷酸鹽(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽非典型肺炎冠狀病毒抗體酶聯(lián)免疫試劑盒克倫特羅檢測試劑盒；這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。例如殺暝松（FN）、ELISA方法的建立它具有快速、靈敏度高、測定步驟簡便、成本低、操作安全等特點，完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：①包被抗原或抗體的固相載體；1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。主要有除草劑與殺蟲劑兩大類將抗原或抗體固定于合適的載體上，并保持其生物活性．使抗原或抗體與某種酶連接．這種酶標抗原或抗體同時其有免疫活性和酶的活性；飼料中有害微生物的快速篩檢（如沙門氏菌）飼料中毒素的測定（主要包括黃曲霉毒素，簡曲霉毒素）4.抗原抗體反應抗原與抗體相互作用是免疫學的基礎，二者通過大量非共價鍵連接，包括靜電力、氫鍵、疏水作用和范德華力等。