高效液相色譜法測定苯磺酸氨氯地平片中的有關(guān)物質(zhì)

苯磺酸銨-2-二級(jí)二羥吡啶鈣抗劑。它的化學(xué)名字是3-1甲基二羥丁基二-氨基二甲酯（2-氨基二甲酯）-4-（2-氯仿二羧基）-1，4-二羥基二甲酯-3，5-吡啶二羧酸酯苯磺酸鹽，第一代抗劑。苯磺酸氨氯地平片LC~lOAtvp型高效液相色譜儀(日本島津公司);N2000色譜工作站(浙江大學(xué)).苯磺酸氨氯地平(中國藥品生物制品檢定所100374-200301);苯磺酸氨氯地平片(成都雄飛利通制藥工業(yè)有限公司,批號(hào):080101、080102、080103);乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純.2方法和結(jié)果2.1在鉻條件下進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱:LunaC2.2空白輔料溶液和對(duì)照溶液的制備對(duì)照品溶液的制備:精密稱取苯磺酸氨氯地平適量,加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含苯磺酸氨氯地平3μg的溶液,作為對(duì)照品溶液.供試品溶液、空白輔料溶液的制備:取本品10片,精密稱定,研細(xì),精密量取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),置50ml量瓶中,加流動(dòng)相約40ml溶解,超聲處理30min,取出,放冷至室溫,加流動(dòng)相至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液.另取本品處方制劑的空白輔料適量,按上述方法制備成空白輔料溶液.對(duì)照溶液的制備:精密量取供試品溶液適量,加流動(dòng)相稀釋成每1ml中含苯磺酸氨氯地平3μg的溶液,作為對(duì)照溶液.2.3供試品溶液色譜圖檢測取對(duì)照溶液10μl注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測靈敏度,使主成分峰高約為滿量程的10-20%;再取供試品溶液、對(duì)照溶液各10μl分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍.供試品溶液色譜圖中如顯示雜質(zhì)峰,單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積(1.0%),各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.5倍(1.5%).2.4關(guān)于專屬性研究2.4.1空白輔料及流動(dòng)相峰取空白輔料溶液10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍.在4.5min之前出現(xiàn)空白輔料及流動(dòng)相峰,但其峰面積占對(duì)照溶液主峰面積比例很小,不予以扣除,一并按照雜質(zhì)計(jì).2.4.2降解物的檢測為了考察該方法能否有效檢測出本品在生產(chǎn)及貯存過程中可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物,根據(jù)藥物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、制劑處方工藝及貯存條件等,進(jìn)行了適度的強(qiáng)制降解試驗(yàn)(加速破壞試驗(yàn)),以驗(yàn)證分析方法對(duì)相關(guān)降解產(chǎn)物檢查的專屬性.酸解實(shí)驗(yàn)取本品(批號(hào):080101)10片,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),加20ml0.1mol/L鹽酸溶解,室溫放置2h后,用0.1mol/L氫氧化鈉中和至中性,濾過,照2.3項(xiàng)下實(shí)驗(yàn),結(jié)果在1.632、4.185、5.065min等處出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰,在1.928、4.632min處的雜質(zhì)有明顯增加.堿解實(shí)驗(yàn)取本品(批號(hào):080101)10片,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),加20ml0.1mol/L氫氧化鈉溶解,室溫放置2h后,用0.1mol/L鹽酸中和至中性,照2.3項(xiàng)下實(shí)驗(yàn),結(jié)果在1.957、5.515、4.003處出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰,結(jié)果在1.638min處的雜質(zhì)有明顯增加.高溫實(shí)驗(yàn)取本品(批號(hào):080101)10片,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),在80°C時(shí)加熱120分鐘,照2.3項(xiàng)下實(shí)驗(yàn),結(jié)果在3.363、5.932min等處出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰,在1.167、1.695min處的雜質(zhì)有所增加.高濕實(shí)驗(yàn)取本品(批號(hào):080101)10片,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),RH75%的濕度下放置5天,照2.3項(xiàng)下實(shí)驗(yàn),結(jié)果在1.930、3.880、5.368min處出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰,在1.638min處的雜質(zhì)有明顯增加.強(qiáng)光實(shí)驗(yàn)取本品(批號(hào):080101)10片,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于苯磺酸氨氯地平15mg),在強(qiáng)光(照射度為4500±500LX)下,照射3天,照2.3項(xiàng)下實(shí)驗(yàn),結(jié)果在1.637、4.288、6.008min處出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰.結(jié)果該方法能有效檢測出各破壞性試驗(yàn)產(chǎn)生的降解物,且各雜質(zhì)峰間及雜質(zhì)峰與主峰間均能達(dá)到基線分離,所建方法專屬性較好,色譜圖見圖1.2.5測定每相層中含苯磺酸氨氯地平0.3.5.5%.對(duì)照溶液進(jìn)樣精密度取苯磺酸氨氯地平對(duì)照品溶液,分別重復(fù)進(jìn)樣6次,照2.3項(xiàng)下進(jìn)行測定,以對(duì)照品溶液的主峰面積考察進(jìn)樣精密度,結(jié)果RSD=2.3%.日內(nèi)精密度取本品(批號(hào):080101)10片,精密稱定,制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平0.3mg的供試品溶液6份,按2.3項(xiàng)下方法,以供試品溶液中雜質(zhì)含量考察方法精密度.結(jié)果見表1.中間精密度取本品(批號(hào):080101)10片,精密稱定,制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平0.3mg的供試品溶液5份.在不同日期由不同分析人員按2.3項(xiàng)下方法試驗(yàn),以供試品溶液中雜質(zhì)含量考察中間精密度.結(jié)果見表1.2.6試驗(yàn)檢測限制2.7色譜柱的選擇取本品(批號(hào):080101)10片,精密稱定,研細(xì),分別精密稱取適量,使用不同品牌的色譜柱Shim-packVP-ODScolumn(5μm,150mm×4.6mmi.d.)和HypersilC3相關(guān)材料的測定用所建立的方法,對(duì)三批苯磺酸氨氯地平片進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查,結(jié)果見表2.4胺濃度0.7%本研究對(duì)流動(dòng)相的組成、流動(dòng)相的PH值、流動(dòng)相的鹽濃度以及三乙胺濃度均進(jìn)行了考察,結(jié)果表明,流動(dòng)相強(qiáng)度對(duì)雜質(zhì)檢出影響較大,當(dāng)流動(dòng)相強(qiáng)度為0.7%三乙胺溶液(磷酸調(diào)pH4.0±0.1)-乙腈(70:30)時(shí),能檢測到較多的雜質(zhì)峰且主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離較好;三乙胺的濃度影響峰保留時(shí)間、峰形及分離度,三乙胺濃度低時(shí),保留時(shí)間延后,峰展寬,故本試驗(yàn)選擇流動(dòng)相的三乙胺濃度為0.7%,此時(shí)峰形較好,主峰保留時(shí)間較為合適且與主峰與相鄰雜質(zhì)峰能達(dá)到完全分離;鹽濃度和pH對(duì)本品的保留時(shí)間及峰形影響不大.因此,最終確定:0.010mol/L磷酸氫二鉀溶液(含0.7%三乙胺、磷酸調(diào)pH4.0±0.1)-乙腈(70:30)為本品有關(guān)物質(zhì)檢查的流動(dòng)相.本研究也對(duì)測定波長進(jìn)行了選擇.取本品適量,用流動(dòng)相溶解制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平5μg的溶液,進(jìn)行紫外掃描(200~400nm).苯磺酸氨氯地平在237nm波長處有最大吸收,空白輔料無干擾,故選用237nm進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測的波長.本研究對(duì)樣品的進(jìn)樣濃度、色譜圖記錄時(shí)間進(jìn)行了選擇,精密稱取自制小樣(按處方篩選制備)適量,照2.3項(xiàng)下方法,用流動(dòng)相配制成分別制成0.06、0.12、0.3、0.48、0.60mg/ml,進(jìn)行HPLC分析,結(jié)果當(dāng)進(jìn)樣濃度至0.3mg/ml后,增加進(jìn)樣濃度不再出現(xiàn)新的雜質(zhì)峰,故可將