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Elisa原理及應(yīng)用簡(jiǎn)介(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)

啟因生物日期：2017-08-18上海啟因生物科技有限公司Elisa原理及應(yīng)用簡(jiǎn)介1上海啟因生物科技有限公司

Elisa發(fā)展Elisa原理常用檢測(cè)方法應(yīng)用前景上海啟因生物科技有限公司Elisa發(fā)展Elisa原理常用檢測(cè)2上海啟因生物科技有限公司

ELISA的發(fā)展ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。其是繼免疫熒光（IFA）和放射性免疫（RIA）分析技術(shù)之后，建立起來的用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。自上世紀(jì)70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。上海啟因生物科技有限公司ELISA的發(fā)展ELISA是酶聯(lián)接免3上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理定義：以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種檢測(cè)未知抗體或抗原的敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。反應(yīng)的基礎(chǔ)：抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記（結(jié)合在固相載體的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，而酶標(biāo)記的抗原或抗體既保持其免疫學(xué)活性又保留酶的活性）；加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理定義：以免疫學(xué)反應(yīng)為4上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理抗原定義：抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖M(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體引起細(xì)胞免疫和產(chǎn)生抗體。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)，例如完整的病毒粒子、細(xì)菌等；小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原；例如某些激素、藥物等?？乖姆磻?yīng)性取決于抗原決定簇，或稱為表位。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇，例如細(xì)菌的莢膜多糖、類脂中可帶有多個(gè)抗原決定簇。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理抗原定義：抗原是能在5上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理抗體定義：抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Ig)，Ig分五類即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。Ig由兩個(gè)輕鏈L和兩個(gè)重鏈H的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ和λ兩種型別，五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。特點(diǎn):可逆性：抗原抗體的結(jié)合是動(dòng)態(tài)平衡過程；特異性：抗原抗體化學(xué)結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，高度特異；最適比例；抗原抗體的含量應(yīng)保持最適合的比例；敏感性：標(biāo)記的免疫敏感度可達(dá)ng/ml上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理抗體定義：抗體是能與6上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理ELISA方法中三個(gè)必要的試劑固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；酶反應(yīng)的底物。

可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理ELISA方法中三個(gè)7上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型固相載體具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。聚苯乙烯ELISA反應(yīng)中最常用的固相載體，具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能。在ELISA測(cè)定過程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)?？乖⒖贵w和其它生物分子通過多種機(jī)制吸附至載體表面，這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。聚氯乙烯。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。固相載體上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型固相載體具有較強(qiáng)8上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型

概念：將抗原或抗體固定在固相載體的過程稱為包被(coating)。

蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。包被的方式上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型概念：將抗原或9上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型ELISA常用酶上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型ELISA常用酶10上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型包被目的抗體加受檢標(biāo)本（抗原）形成固相抗體－抗原復(fù)合物洗滌除去未結(jié)合的其他物質(zhì)加酶標(biāo)抗體生成抗體-待測(cè)抗原-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體加底物進(jìn)行酶催化反應(yīng)根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行抗原的定性或定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)基本流程圖上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型包被目的抗體加受11上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型雙抗夾心法：雙抗體夾心法測(cè)抗原和雙抗原夾心法測(cè)抗體間接法測(cè)抗體（常用）競(jìng)爭(zhēng)法：競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原與競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體捕獲包被法測(cè)抗體親和素—生物素ELISA法上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型雙抗夾心法：雙抗12上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型雙抗體夾心法測(cè)抗原特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合成固相抗原復(fù)合物；加酶標(biāo)記抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正相關(guān)。加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型雙抗體夾心法測(cè)抗13上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型雙抗原夾心法測(cè)抗體

用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型雙抗原夾心法測(cè)抗14上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型間接法測(cè)抗體酶標(biāo)二抗底物間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的二抗（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。其檢測(cè)方法：固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)二抗Ab*→Ag-Ab-抗Ab*+底物(TMB)→顯色上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型間接法測(cè)抗體酶標(biāo)15上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測(cè)類型競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體原理:標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)：固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ag-Ab+底物(TMB)→不顯色(+)固相(包被)抗原Ag+樣品(無抗體Ab)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ag-Ab*+底物(TMB)→顯色(-)上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測(cè)類型競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體原理16上海啟因生物科技有限公司

ABS-ELISA法ELISA的檢測(cè)類型①：固相支持物；②：樣品；③：特異性IgG；④：生物素化抗小鼠IgG（Biotin）；⑤：辣根過氧化物酶HRP-酶標(biāo)鏈親和素（Avidin）；⑥：DAB顯色液；⑦：顯色；ABS:親和素（avidin）生物素（biotin）系統(tǒng)（system）親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬于免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，能夠形成一種極為穩(wěn)定的復(fù)合體。把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，可以大大提高ELISA的敏感度。上海啟因生物科技有限公司ABS-ELISA法ELISA的檢測(cè)17上海啟因生物科技有限公司

ELISA檢測(cè)ELISA特點(diǎn)：

靈敏度高：ELISA測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告基團(tuán)的酶。由于酶的催化效率很高，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。特異性強(qiáng)：ELISA的特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。準(zhǔn)確性高、檢測(cè)時(shí)間短、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)，適合于大批標(biāo)本的檢測(cè)，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)、醫(yī)療檢測(cè)以及免疫實(shí)驗(yàn)分析等領(lǐng)域。上海啟因生物科技有限公司ELISA檢測(cè)ELISA特點(diǎn)：靈敏度18上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位研究抗酶抗體的合成顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份ELISA在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍四個(gè)方面：

上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景免疫酶染色各種細(xì)胞19上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測(cè)抗原方面：

在實(shí)際應(yīng)用方面：可作疾病的臨床診斷、疾病監(jiān)察、疾病普查、法醫(yī)檢查、獸醫(yī)及農(nóng)業(yè)上的植物病害的診斷檢定等。檢查抗原和半抗原方面：在內(nèi)分泌方面用于檢測(cè)雌性激素、絨毛膜促性腺激素、黃體素、胰島素、皮質(zhì)醇、促甲狀腺素和孕酮等在血液學(xué)方面：可用于檢查凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、紅細(xì)胞抗原及結(jié)合球蛋白（HaptoGlobin）等在腫瘤方面：試用檢查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），對(duì)前者的敏感性已達(dá)到與放射免疫試驗(yàn)相當(dāng)?shù)乃?，但?duì)CEA檢查的敏感性較低，目前尚不能用于常規(guī)診斷在傳染病的診斷方面：用于檢查乙型肝炎表面抗原。其他方面：尚有用于檢查霍亂弧菌、大腸肝菌、綠膿桿菌和破傷風(fēng)梭菌毒素；腦膜炎球菌及淋球菌抗原；檢查免疫抑制病人中常見的白色念殊菌抗原，檢查病人或病獸的糞便中的輪狀病毒，自病人標(biāo)本中檢查甲肝病毒、皰疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨細(xì)胞病毒等上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測(cè)抗20上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測(cè)抗體方面：

寄生蟲病方面：用于對(duì)瘧原蟲、阿米巴、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學(xué)診斷，這對(duì)人醫(yī)和獸醫(yī)都很重要。病原微生物方面：已用于檢查鏈球菌、沙門氏菌、布氏桿菌、結(jié)核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體，還可用于破傷風(fēng)抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測(cè)定以及檢測(cè)斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體，可作診斷。試用于病毒抗體檢查報(bào)告的有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢查方法。衛(wèi)生學(xué)方面：可用于檢測(cè)食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測(cè)抗21上海啟因生物科技有限公司

樣品類型：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。種屬：人檢測(cè)周期：收到樣品起一周內(nèi)。公司檢測(cè)類型

費(fèi)用：ELISA檢測(cè)25元/樣；實(shí)驗(yàn)方法：只需提供樣品，數(shù)量不