藥品微生物限度檢查方法適用性試驗報告生產(chǎn)單位：********檢品名稱：黃連上清片檢品編號：202300479檢品批號：20230303試驗。試驗依據(jù)：中國藥典2023年版四部 1105,1106試驗方法：中國藥典2023年版四部 1105,1106試驗要求：1、需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)方法適用性試驗中，各試驗菌試驗組菌落減去供試品比照組菌落數(shù)的值與菌液比照組菌落數(shù)的0.5~2范圍內(nèi)。試驗結(jié)果：符合規(guī)定試驗結(jié)論：依據(jù)方法適用性試驗結(jié)果，本品微生物限度檢查法為：需氧菌總數(shù)承受稀釋平皿傾注法〔1：501ml/皿霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)方法承受平皿傾注法；10ml100ml胰酪大豆胨液體培育基中。11分混勻。1ml10ml腸道增菌液體培育基中。黃連上清片微生物限度檢查方法適用性試驗檢品名稱：黃連上清片檢品編號：202300479檢品批號：20230303生產(chǎn)單位：********1、方法：1.12023年版四部1105,11061.22023年版四部1105,11062、計數(shù)方法適用性試驗：2.1菌種：金黃色葡萄球菌〈CMCC(B)26003〉銅綠假單胞菌〈CMCC(B)10104〉枯草芽孢桿菌〈CMCC(B)63501〉白色念珠菌〈CMCC(B)98001〉黑曲霉〈CMCC(B)98003〉菌液制備：35℃22無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液，做活菌計數(shù)用。取經(jīng)25℃培育240.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液，做活菌計數(shù)用。5孢子懸液。10g，加PH7.0100ml，充分1:10取10g，加PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，充分混勻，再加加PH7.0400ml1：50需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)方法回收試驗試驗組：取1:1010ml0.1ml試驗菌液，混勻，使每1ml供試液100cfu1ml基或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定其菌數(shù)。結(jié)果1~3。菌液比照組：取PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液代替供試液按試驗組操作參與試驗菌液，取1ml脂培育基，每株試驗菌平行制備2個平皿。測定其菌數(shù)。結(jié)果見表1~表3。供試品比照組：取1:10供試液10ml，以PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1ml參與41~3。結(jié)果統(tǒng)計表1 平皿傾注法試驗結(jié)果〔第一次〕試驗日期：2023.5.417073122769116平均值73821412648122264616平均值26471414880122529616平均值508814160507769120276547375160平均值68527572140141405160120251415354160平均值4640.55257140菌落計數(shù)菌種名稱平皿菌落計數(shù)菌種名稱平皿比值試驗組 菌液比照組供試品比照組金黃色葡0.72萄球菌銅綠假單0.26胞菌枯草芽孢0.41桿菌菌0.720.72黑曲霉0.620.712〔其次次〕試驗日期：2023.5.91457492657611平均值55751012243042902733323840110平均值3028344110014938596690261526372110平均值55456169100菌落計數(shù)菌種名稱平皿菌落計數(shù)菌種名稱平皿比值試驗組 菌液比照組供試品比照組金黃色葡萄球菌0.60白色念珠0.50.6菌980.70.6黑曲霉453平皿傾注法試驗結(jié)果〔第三次〕13950132433811平均值414412145486673130245495269110平均值4548.55971120139415048130257495260110平均值48455154120菌落計數(shù)菌種名稱菌落計數(shù)菌種名稱平皿比值試驗組 菌液比照組供試品比照組金黃色葡萄球菌0.66菌0.560.68黑曲霉0.710.83培育基、右列沙氏葡萄糖瓊脂培育基。結(jié)論：由表1~表3結(jié)果可知，除銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌外，各試驗菌試驗組菌落數(shù)減去供試品比照組菌落數(shù)的值與菌液比照組菌落數(shù)的比值均在0.5~2數(shù)方法還需進一步試驗。驗，試驗方法和結(jié)果如下：1:5010ml0.1ml1ml供試液中含量不大于100cfu1ml或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定其菌數(shù)。結(jié)果見4~6。菌液比照組：方法同平皿傾注法。2.4.3供試品比照組：取1:50供試液10ml，以PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1ml參與24~6。4〔第一次〕試驗日期：2023.5.9平皿菌落計數(shù)比值1試驗組54菌液比照組58供試品比照組82566080.80平均值555981607782827180.85平均值71748菌種名稱胞菌桿菌菌種名稱胞菌桿菌菌落計數(shù)菌落計數(shù)菌種名稱平皿比值試驗組 菌液比照組供試品比照組17090927080100.71平均值70859.516158926564100.88平均值63619.5胞菌桿菌胞菌桿菌菌種名稱菌種名稱胞菌桿菌平皿菌落計數(shù)比值1試驗組30菌液比照組43供試品比照組62404780.62平均值354571485562647980.73平均值56677結(jié)果可知，銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌試驗組菌落數(shù)減去0.5~2品需氧菌總數(shù)計數(shù)方法可承受此方法。3、把握菌檢查方法適用性試驗3.1菌種：大腸埃希菌[CMCC(B)44102]銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]乙型副傷寒沙門菌[CMCC(B)50094]物至胰酪大豆胨液體培育基中，3522小時。上述培育物用0.9%無菌氯化1ml10~100cfu的菌懸液。10ml，加PH7.0無菌氯化鈉-100ml，1:10供試液。大腸埃希菌檢查方法適用性試驗1:1010ml1ml10~100cfu的大腸埃希菌菌懸液，參與100ml胰酪大豆胨液體培育基中，依照大腸埃希菌的檢查方法進展檢查。7~9表7 大腸埃希菌檢查方法適用性試驗〔第一次〕試驗日期：2023.5.4試驗組麥康凱液體培育基檢驗數(shù)據(jù)

大腸埃希菌加菌量71cfu

變渾濁變渾濁檢出表8 大腸埃希菌檢查方法適用性試驗〔批號：其次次〕試驗日期：2023.5.9試驗組麥康凱液體培育基檢驗數(shù)據(jù)

大腸埃希菌加菌量83cfu

變渾濁變渾濁檢出表9 大腸埃希菌檢查方法適用性試驗〔第三次〕試驗日期：2023.5.12試驗組麥康凱液體培育基檢驗數(shù)據(jù)

大腸埃希菌加菌量38cfu

變渾濁變渾濁檢出結(jié)論：由以上結(jié)果可知，試驗組 檢出試驗菌，故該供試品大腸埃希菌的檢查 可 承受此檢查法。沙門菌檢查方法的驗證11分混勻，并在培育100cfu的沙門菌菌懸液，依照沙門菌的檢查法進展檢查。表10 沙門菌檢查方法的驗證〔第一次〕試驗日期：2023.5.4試驗組TSBXLD檢驗數(shù)據(jù)

變渾濁變渾濁檢出表11 沙門菌檢查方法的驗證〔其次次〕2023.5.9試驗組TSBXLD檢驗數(shù)據(jù)

變渾濁變渾濁檢出TSB

表12 沙門菌檢查方法的驗證〔第三次〕2023.5.12試驗組變渾濁XLD檢驗數(shù)據(jù)

變渾濁檢出檢出試驗菌，故本品沙門菌的檢查方法 可 承受此檢查法。耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法的驗證1:101ml100cfu的大腸埃希菌菌懸液，參與10ml1:101ml100cfu10ml腸道增菌液體培育基中，依照依照耐膽鹽革蘭陰性菌的檢查法進展檢查；3.6.213,14,15表13 耐膽鹽革蘭陰性菌的檢查方法的驗證〔第一次〕試驗日期：2023.5.4基瓊脂平板檢驗數(shù)據(jù)

陽性菌落檢出

基瓊脂平板檢驗數(shù)據(jù)

陽性菌落檢出大腸埃希菌加菌量71cfu 銅綠假單胞菌加菌量47cfu表14 耐膽鹽革蘭陰性菌的檢查方法的驗證〔其次次〕試驗日期：2023.5.8基瓊脂平板檢驗數(shù)據(jù)

陽性菌落檢出

基瓊脂平板檢驗數(shù)據(jù)

陽性菌落檢出大腸埃希菌加菌量83cfu 銅綠假單胞菌加菌量49cfu表15 耐膽鹽革蘭陰性菌的檢查方法的驗證〔第三次〕試驗日期：2023.5.12基紫紅膽鹽葡萄糖

試驗組變渾濁

基紫紅膽鹽葡萄糖

試驗組變渾濁瓊脂平板瓊脂平板瓊脂平板檢驗數(shù)據(jù)檢出檢驗數(shù)據(jù)檢出大腸埃希菌加菌量38 cfu銅綠假單胞菌加菌