基因組DNA的分離與純化

基因組DNA的分離與純化

一、酚抽提法的原理以含EDTA、SDS的裂解液裂解細(xì)胞，經(jīng)蛋白酶K消化后，用PH8.0的Tris飽和酚抽提蛋白質(zhì)，離心后取上層水相，無水乙醇沉淀DNA。一、酚抽提法的原理以含EDTA、SDS的裂解二、技術(shù)路線破膜提純沉淀、洗滌細(xì)胞膜碎片，細(xì)胞器，脂、蛋白質(zhì)，DNA，RNA去除脂、蛋白質(zhì)濃縮DNA、去鹽雜質(zhì)二、技術(shù)路線破膜提純沉淀、洗滌細(xì)胞膜碎片，細(xì)胞器，脂、蛋真核生物基因組DNA的提取（一）1.低滲去除紅細(xì)胞2.裂解白細(xì)胞真核生物基因組DNA的提?。ㄒ唬?.低滲去除紅細(xì)胞2.裂解白真核生物基因組DNA的提取（二）3.酚抽提4.無水乙醇沉淀500μl真核生物基因組DNA的提?。ǘ?.酚抽提4.無水乙醇沉淀5真核生物基因組DNA的提取（三）5.DNA沉淀的洗滌與干燥6.DNA溶解與電泳鑒定真核生物基因組DNA的提?。ㄈ?.DNA沉淀的洗滌與干燥6三結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳鑒定EB與DNA的結(jié)合EB可嵌入到堿基平面，使核酸在UV

激發(fā)下發(fā)出桔紅色熒光。三結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳鑒定EB與DNA的結(jié)合EB可嵌入三結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳鑒定三結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳鑒定TheEndTheEnd裂解液的作用裂解液EDTASDS乙二胺四乙酸(絡(luò)合物)二價(jià)金屬螯合劑，抑制DNA酶十二烷基磺酸鈉（去污劑）使細(xì)胞膜破裂；將核酸釋放出來；使蛋白質(zhì)變性Tris-HCl緩沖夜，維持穩(wěn)定的pH值（8.0）裂解液的作用裂EDTASDS乙二胺四乙酸(絡(luò)合物)十二烷基磺DNA酚抽提法示意圖酚的作用酚可以使蛋白質(zhì)變性沉淀、抑制DNA酶活性。PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA進(jìn)入水相。DNA酚抽提法示意圖酚的作用酚可以使蛋白質(zhì)變性沉淀、抑制DNDNA酚抽提法示意圖蛋白酶K的作用水解組蛋白，促進(jìn)DNA與組蛋白的分開。DNA酚抽提法示意圖蛋白酶K的作用水解組蛋白，促進(jìn)DNA與組DNA的沉淀無水乙醇沉淀沉淀前往往加入NaAc等鹽離子，作用是中和核酸分子表面的負(fù)電荷，有助于分子之間的聚集。無水乙醇可以吸收分子之間的水，使DNA沉淀析出，無水乙醇使用前冰凍，可以減少DNA沉淀析出過程釋放熱量對DNA的損傷。DNA的沉淀無水乙醇沉淀TE10mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTATE10mmol/LTris-HCl1mmol/LEDT上樣緩沖溶液（6×或10×）溴酚藍(lán)（電泳指示劑，約相當(dāng)于300bpDNA）二甲苯氰（電泳指示劑，約相當(dāng)于4000bpDNA）甘油/蔗糖（增加DNA溶液的密度）0.5~1.4%