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蛋白質(zhì)分離與純化技術(shù)蛋白質(zhì)(protein)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ),沒(méi)有蛋白質(zhì)就沒(méi)有生命。因此,它是與生命及與各種形式的生命活動(dòng)緊密聯(lián)系在一起的物質(zhì)。機(jī)體中的每一個(gè)細(xì)胞和所有重要組成部分都有蛋白質(zhì)參與。蛋白質(zhì)分離純化是用生物工程下游技術(shù)從混合物當(dāng)中分離純化出所需要的目的蛋白質(zhì)的方法。由于深入研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能需要用到高純度的蛋白質(zhì),因此蛋白質(zhì)分離與純化技術(shù)是生物產(chǎn)業(yè)中的核心技術(shù)。一般程序預(yù)處理蛋白質(zhì)的抽提蛋白質(zhì)粗分級(jí)蛋白質(zhì)純化預(yù)處理分離提純某一蛋白質(zhì),首先要求把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái),并保持原有的天然狀態(tài),不喪失生物活性。常用的破碎方法有:機(jī)械方法:如均漿噴射、研磨或超聲波化學(xué)法:如去污劑、有機(jī)溶劑處理酶學(xué)方法:如溶菌酶處理
蛋白質(zhì)的抽提一般的蛋白質(zhì)通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_溶液把蛋白質(zhì)提取出來(lái),再用離心法除去不溶物得到含有目的物的粗抽提液。抽提所用緩沖溶液的PH值、離子強(qiáng)度、組成成分等應(yīng)根據(jù)目的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。蛋白質(zhì)粗分級(jí)采用分級(jí)鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法將目標(biāo)蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。蛋白質(zhì)純化在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中,從細(xì)胞破碎一步開(kāi)始蛋白質(zhì)就脫離了天然的環(huán)境,受到各種不同試劑的干擾,其結(jié)構(gòu)和功能會(huì)受到不同程度的可逆或不可逆的損害。因此,在蛋白質(zhì)純化的各步驟都要小心地控制所采用的提純條件,以避免蛋白質(zhì)變性。在提純蛋白質(zhì)過(guò)程中需要在每一步檢測(cè)蛋白質(zhì)(酶)的存在及提純的情況,即建立蛋白質(zhì)定量檢測(cè)方法。蛋白質(zhì)純化的常用方法采用分離和提純蛋白質(zhì)的各種方法,主要是利用蛋白質(zhì)之間的各種特性差異:根據(jù)分子大小不同的分離方法利用溶解度差別的分離方法根據(jù)蛋白質(zhì)的吸附性質(zhì)分離根據(jù)對(duì)配基的生物學(xué)特異性根據(jù)蛋白質(zhì)分離根據(jù)分子大小不同的分離方法透析和超濾:利用蛋白質(zhì)分子不能通過(guò)半透膜的性質(zhì),使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)如無(wú)機(jī)鹽、單糖、水等分開(kāi)。離心分離:蛋白質(zhì)和雜質(zhì)的溶解度不同時(shí)可以利用離心的方法將它們分開(kāi),經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一
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