一、固定細胞的染色方法1） PI單染色法方法一收集細胞（1?5）x106個，500?1000r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。3mlPBS洗一次。離心去PBS，加入冰預冷的70%的乙醇固定，4°C,1h。離心棄去固定液，3mlPBS重懸5min。400目的篩網(wǎng)過濾1次，500?1000r/min離心5min，棄去PBS。用1mlPI染液，4C避光30min。流式細胞儀檢測：PI用氬離子激發(fā)熒光，激發(fā)光波波長為488nm，發(fā)射光波波長大于630nm，產(chǎn)生紅色熒光，可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖及PI熒光的直方圖。方法二收集細胞（1x106個），500?1000r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。1mlPBS/FCS洗一次。500?1000r/min離心5min去PBS/FCS，加入500plPBS/FCS和500pl的多聚甲醛固定液，輕輕混勻，在4C下固定4min。500?1000r/min離心5min棄去固定液，室溫加入含0.2%Tween的PBS1ml，37C孵育15min。1mlPBS/FCS洗3次，每次5min。400目的篩網(wǎng)過濾1次。500?1000r/min離心5min去PBS/FCS，用1.0mlPI染液，4C避光至少30min。染色在24h之內(nèi)皆可行，流式細胞儀分析。2） 調(diào)亡細胞的TUNEL的流式細胞儀分析離心收集細胞，PBS洗1?2次。1%多聚甲醛低溫下固定15min。3mlPBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱內(nèi)放置1?3天。PBS輕洗1次細胞與TdT標記液37C孵育，時間1?2h。PBS輕洗1次。細胞在黑暗中37C與100』的染色緩沖液孵育30min。含0.1%Triton-X100的PBS輕洗1次。500?1000r/min離心5min棄去固定液，室溫加入含0.2%Tween的PBS1ml，37C孵育15min。1mlPBS/FCS洗3次，每次5min。400目的篩網(wǎng)過濾1次。7.500?1000r/min離心5min去PBS/FCS,用1.0mlPI染液，4°C避光至少30min。染色在24h之內(nèi)皆可行，流式細胞儀分析。2） 調(diào)亡細胞的TUNEL的流式細胞儀分析離心收集細胞，PBS洗1?2次。1%多聚甲醛低溫下固定15min。3mlPBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱內(nèi)放置1?3天。PBS輕洗1次細胞與TdT標記液37C孵育，時間1?2h。PBS輕洗1次。細胞在黑暗中37C與100』的染色緩沖液孵育30min。含0.1%Triton-X100的PBS輕洗1次。1mlPBS（含5mg/mlPI,0.1%RNaseA）重懸。流式細胞儀分析紅色（PI）對綠色熒光（FITC）的地形圖。3） ISNT的流式細胞儀分析離心收集細胞，PBS洗1?2次1%多聚甲醛低溫下固定15min。3mlPBS洗1次，70%乙醇固定，冰箱內(nèi)放置1?3天。PBS輕洗1次。2x105細胞與12.5』的缺口平移緩沖液在15C共孵育6h，每過15min振動1次。PBS輕洗1次。細胞在黑暗中37C與100』的染色緩沖液孵育30min。含0.1%Triton-X100的PBS輕洗1次。1mlPBS（含5mg/mlPI,0.1%RNaseA）重懸。流式細胞儀分析紅色（PI）對綠色熒光（FITC）的地形圖。二、非固定細胞的染色方法1） Hoechst33342/PI雙染色法懸浮生長的細胞在培養(yǎng)狀態(tài)下加入Heochst33342,終濃度為和g/ml；帖壁生長的細胞用含有0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化成單細胞懸液，離心，棄上清，用1ml全培養(yǎng)液重懸細胞，加入Heochst33342，終濃度為1pg/ml，37C孵育7?10min。4C500?1000r/min離心棄去染液。加入1.0mlPI染液，4C避光染色15min。400目的篩網(wǎng)過濾1次。流式細胞儀分析。2） AnnexinV/PI雙染色法1.細胞收集：懸浮細胞直接收集10ml的離心管中，而帖壁細胞先用滴管輕輕吹打，調(diào)亡細胞一經(jīng)吹打可能脫壁，收集到10ml的離心管中，沒脫壁的細胞用0.02%的EDTA消化使之脫壁，每樣本細胞數(shù)為（1?5）x106，500?1000r/min離心5min棄去培養(yǎng)液。用孵育緩沖液洗1次，500?1000r/mi