第1講細(xì)胞工程課標(biāo)考情——知考向核心素養(yǎng)——提考能課標(biāo)要求1.簡(jiǎn)述植物的組織培養(yǎng)2.利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育菊花或其他植物幼苗，并進(jìn)行栽培3.簡(jiǎn)述動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆4.收集單克隆抗體在臨床上實(shí)際應(yīng)用的資料，并進(jìn)行交流分享5.舉例說(shuō)出細(xì)胞融合與單克隆抗體制備科學(xué)思維建立植物細(xì)胞工程和單克隆抗體制備基本流程模型科學(xué)探究能圍繞細(xì)胞工程的最新發(fā)展與生活實(shí)際的聯(lián)系收集材料、處理信息社會(huì)責(zé)任通過(guò)克隆技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用，關(guān)注生產(chǎn)和生活自主學(xué)習(xí)·鞏固基礎(chǔ)知識(shí)點(diǎn)一植物細(xì)胞工程[自主學(xué)習(xí)]1.植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)愈傷組織全能性流動(dòng)性原生質(zhì)體雜種細(xì)胞雜種植株

2.植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用細(xì)胞產(chǎn)物[自主檢測(cè)]1.思考判斷(1)有關(guān)細(xì)胞全能性與組織培養(yǎng)的判斷。①棉花根尖細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)形成幼苗能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性。(

)②在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過(guò)程中，不會(huì)發(fā)生細(xì)胞的增殖和分化。(

)③愈傷組織是外植體通過(guò)脫分化和再分化后形成的。(

)√××(2)有關(guān)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的判斷。①用纖維素酶和果膠酶水解法獲得的植物原生質(zhì)體失去了全能性。(

)②再生出細(xì)胞壁是原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志。(

)③培養(yǎng)草莓脫毒苗所采用的主要技術(shù)是細(xì)胞雜交。(

)××√2.深挖教材植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基的組成：____________________(包括水分、無(wú)機(jī)鹽)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分(包括小分子糖類、氨基酸、核苷酸)、激素、________四部分。

無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂3.熱圖導(dǎo)析據(jù)圖分析植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程，回答下列問(wèn)題。(1)植物體細(xì)胞雜交依據(jù)的生物學(xué)原理：___________________________________________________。

(2)如何根據(jù)細(xì)胞膜表面的熒光判斷該原生質(zhì)體是由番茄和馬鈴薯融合而成的?_______________________________________________________。

(3)若番茄細(xì)胞內(nèi)有m條染色體，馬鈴薯細(xì)胞內(nèi)有n條染色體，則“番茄—馬鈴薯”細(xì)胞在有絲分裂后期含有多少條染色體?__________________。

提示：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性提示：融合的細(xì)胞表面既有紅色熒光又有綠色熒光提示：2(m+n)條知識(shí)點(diǎn)二動(dòng)物細(xì)胞工程[自主學(xué)習(xí)]1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞原代培養(yǎng)無(wú)毒CO2

氨基酸血清36.5℃±0.5℃

7.2~7.42.動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)

全能性體細(xì)胞核核移植重組胚胎

3.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

滅活病毒誘導(dǎo)法有性雜交特異性強(qiáng)靈敏度高診斷試劑運(yùn)載藥物雜交瘤細(xì)胞[自主檢測(cè)]1.思考判斷(1)有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的判斷。①制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。(

)②在25℃的實(shí)驗(yàn)條件下可順利完成大鼠神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)。(

)③培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞。(

)×

×

×

(2)有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞核移植的判斷。①動(dòng)物細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞必須是卵細(xì)胞。(

)②克隆動(dòng)物的性狀與供體動(dòng)物幾乎完全相同。(

)③與“多莉”羊等克隆哺乳動(dòng)物相關(guān)的技術(shù)有胚胎移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和體細(xì)胞核移植。(

)(3)動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備。①植物原生質(zhì)體融合與動(dòng)物細(xì)胞融合原理是相同的。(

)②體細(xì)胞雜交技術(shù)可用于克隆動(dòng)物和制備單克隆抗體。(

)③B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞融合后有三種細(xì)胞類型(若僅考慮兩兩融合的情況)。(

)×

×

√√√√2.熱圖導(dǎo)析下圖為制備單克隆抗體和多克隆抗體的示意圖，據(jù)圖分析，回答下列問(wèn)題。(1)與多克隆抗體相比，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)有哪些?____________________________________________________________。

(2)圖中第一次篩選和第二次篩選的目的有何不同?___________________________________________________________________________________________________________________________。

提示：?jiǎn)慰寺】贵w的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備提示：(2)第一次篩選的目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選的目的是篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞重難探究·素養(yǎng)達(dá)標(biāo)重點(diǎn)一

植物細(xì)胞工程[深度講解]1.植物組織培養(yǎng)與植物體細(xì)胞雜交的區(qū)別與聯(lián)系名稱植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性名稱植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交過(guò)程離體的植物器官、組織或細(xì)胞

↓脫分化愈傷組織

↓再分化根、芽或胚狀體

↓發(fā)育植物體

名稱植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交選材選取根尖、莖尖、形成層部位最容易誘導(dǎo)脫分化不同種的植物體細(xì)胞融合后形成雜種細(xì)胞技術(shù)操作脫分化、再分化等除脫分化、再分化外，還要用酶解法去除細(xì)胞壁，用一定的方法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合關(guān)系植物組織培養(yǎng)是植物體細(xì)胞雜交的基礎(chǔ)，植物體細(xì)胞雜交所用的技術(shù)更復(fù)雜2.植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中雜種細(xì)胞類型的分析(1)誘導(dǎo)產(chǎn)物(假設(shè)用于雜交的兩種植物細(xì)胞分別為A、B)：①未融合的細(xì)胞：A和B。②兩兩融合的細(xì)胞：AA、BB和AB。③多細(xì)胞融合體。(2)檢測(cè)方法：對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)物中的細(xì)胞進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，然后根據(jù)得到的植物性狀進(jìn)行判斷。①若只表現(xiàn)出一種植物的性狀，說(shuō)明是未融合細(xì)胞。②若得到的是具有兩種親本性狀的植物，說(shuō)明是雜種植株。③若得到的是兩種親本性狀的植物，且一種植物的性狀得到加強(qiáng)，則是多細(xì)胞融合體。④若得到的是一種植物的性狀，但是效果得到加強(qiáng)，則是同種細(xì)胞融合的結(jié)果。3.激素比例與細(xì)胞分裂分化的關(guān)系(1)適當(dāng)提高生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例容易生根。(2)適當(dāng)提高細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例容易生芽。(3)比例適中誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。如圖所示。[考向預(yù)測(cè)](一)考查植物組織培養(yǎng)的過(guò)程、原理及應(yīng)用(素養(yǎng)目標(biāo)：科學(xué)探究)1.(2022年河北滄州二模)葡萄扇葉病毒會(huì)使葡萄減產(chǎn)10%~50%，國(guó)內(nèi)某團(tuán)隊(duì)利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得葡萄脫毒苗，基本過(guò)程如下圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)外植體往往選擇葡萄植株的__________部位，理由是_____________——————————————————————。(2)脫分化是指______________________________________________________________________________________，影響該過(guò)程的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有____________________________________________________(答出兩種即可)。

頂端分生區(qū)

植物分生區(qū)附近(如莖尖)的病毒極少，甚至無(wú)病毒

讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程生長(zhǎng)素類、細(xì)胞分裂素類、赤霉素類、脫落酸、多效唑(3)若要獲得原生質(zhì)體，可先用__________________酶處理X，其中酶混合液中常含有一定濃度的甘露醇，目的是________________________；若要獲得突變體，一般用誘變劑處理X而非外植體，理由是____________________________________________________________________________________________________________________________。纖維素酶和果膠防止獲得的原生質(zhì)體吸水漲破X(愈傷組織)是具有分生能力的薄壁細(xì)胞，處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生突變【解析】(1)植物分生區(qū)附近(如莖尖)的病毒極少，甚至無(wú)病毒，因此以其為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)可以獲得脫毒苗。(2)細(xì)胞脫分化就是讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程。培養(yǎng)基中常用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑一般為生長(zhǎng)素類、細(xì)胞分裂素類和赤霉素類。此外，脫落酸和多效唑也可以用于植物的組織培養(yǎng)。(3)植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素和果膠，因此可用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。為了防止獲得的原生質(zhì)體吸水漲破，酶混合液中常含有一定濃度的甘露醇。在植物的組織培養(yǎng)過(guò)程中，由于培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是愈傷組織，一直處于不斷的分生狀態(tài)，因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生突變。(二)考查植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程及原理(素養(yǎng)目標(biāo)：科學(xué)探究)2.如圖所示為科學(xué)家利用番茄葉細(xì)胞和馬鈴薯葉細(xì)胞雜交培育“番茄—馬鈴薯”植株的過(guò)程，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)過(guò)程①②使用了____________________酶，以使植物原生質(zhì)體相互分離，此處使用的溶液濃度較大，以保證植物細(xì)胞會(huì)發(fā)生____________，以保護(hù)原生質(zhì)體不被破壞；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，使細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)的酶是______________。

(2)過(guò)程③在化學(xué)藥劑____________的作用下會(huì)發(fā)生細(xì)胞融合；動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物細(xì)胞不相同的是___________________。

(3)過(guò)程____屬于脫分化，過(guò)程____屬于再分化，細(xì)胞發(fā)生分化的根本原因是___________________。

纖維素酶和果膠質(zhì)壁分離胰蛋白酶聚乙二醇滅活病毒誘導(dǎo)法⑤

⑥

基因的選擇性表達(dá)(4)過(guò)程⑤⑥⑦的細(xì)胞工程技術(shù)是______________，其培養(yǎng)時(shí)選用的材料通常是分生組織，原因是___________________________________________________________。

(5)植物體細(xì)胞雜交的研究在_________________________________方面，取得了巨大突破。植物組織培養(yǎng)

分化程度低，易培養(yǎng)形成愈傷組織(或含毒素少，甚至無(wú)毒)

克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙重點(diǎn)二

動(dòng)物細(xì)胞工程[深度講解]1.植物組織培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物體細(xì)胞核移植(1)三者比較。項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞核移植原理植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞核的全能性關(guān)鍵環(huán)節(jié)細(xì)胞的脫分化和再分化細(xì)胞增殖細(xì)胞核融合、細(xì)胞分化結(jié)果與外植體相同的個(gè)體相同分化程度的細(xì)胞群獲得克隆動(dòng)物項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞核移植應(yīng)用①高效快速繁殖；②脫毒作物苗的培養(yǎng)；③作物新品種的培育；④細(xì)胞產(chǎn)物工廠化生產(chǎn)①生產(chǎn)生物制品；②醫(yī)學(xué)研究；③檢測(cè)有毒物質(zhì)①加速良種繁育；②保護(hù)瀕危物種；③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；④作為異種移植的供體；⑤用于組織器官的移植(2)動(dòng)物細(xì)胞核移植的疑難點(diǎn)。①卵母細(xì)胞選擇時(shí)期及原因：減數(shù)分裂Ⅱ中期的卵母細(xì)胞具備受精能力，細(xì)胞質(zhì)中合成與分裂、分化有關(guān)的物質(zhì)能刺激融合后重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化，形成重組胚胎。②選卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因：a.卵細(xì)胞大，易于操作；b.卵黃多，營(yíng)養(yǎng)豐富，為發(fā)育提供充足的營(yíng)養(yǎng)；c.能激發(fā)重組細(xì)胞分裂分化。(3)供體細(xì)胞：取供體動(dòng)物的體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，一般選用培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型，保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。(4)動(dòng)物體細(xì)胞不能經(jīng)培養(yǎng)直接發(fā)育成完整個(gè)體的原因：動(dòng)物體細(xì)胞的全能性受到限制。(5)該過(guò)程用到的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。2.動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體(1)植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較。項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的增殖融合前處理去除細(xì)胞壁使細(xì)胞分散開(kāi)使用的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶誘導(dǎo)手段物理法：電融合法、離心法等；化學(xué)法：聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+—高pH融合法等除物理法和化學(xué)法外，也可用滅活病毒誘導(dǎo)法項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合結(jié)果雜種植株雜交細(xì)胞應(yīng)用培育植物新品種制備單克隆抗體意義突破遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，打破了生殖隔離，擴(kuò)展了雜交的親本組合相同點(diǎn)原生質(zhì)體融合原理相同，原生質(zhì)體融合的方法相似(2)單克隆抗體的制備過(guò)程。

注：?jiǎn)慰寺】贵w的制備過(guò)程中有兩次篩選，第一次是用選擇性培養(yǎng)基選出雜交瘤細(xì)胞；第二次是用抗原—抗體雜交技術(shù)選出能產(chǎn)生人們所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞。[考向預(yù)測(cè)](一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程及條件、干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用(素養(yǎng)目標(biāo)：科學(xué)探究)1.(2022年天津耀華中學(xué)二模)科學(xué)家將小鼠多能干細(xì)胞的4種基因Oct3/4、Sox2、c－Myc和Klf4，同時(shí)導(dǎo)入已分化的小鼠成纖維細(xì)胞中，結(jié)果后者被誘導(dǎo)成為多能干細(xì)胞，稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)，此類細(xì)胞能分裂并產(chǎn)生皮膚細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及可以搏動(dòng)的心肌細(xì)胞等。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：(1)人體干細(xì)胞可以分為_(kāi)_______________________兩大類。

(2)④過(guò)程表示細(xì)胞發(fā)生了分化，原因是D、E和F細(xì)胞中的________________(填2種化合物名稱)種類不完全相同。請(qǐng)用箭頭和文字簡(jiǎn)要表明該過(guò)程中遺傳信息的流動(dòng)途徑：________________________。

(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需通入CO2氣體，其作用是________________________。

胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞mRNA、蛋白質(zhì)維持培養(yǎng)液的酸堿度DNAmRNA蛋白質(zhì)(4)艾弗里在證明DNA是遺傳物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)分別向不同實(shí)驗(yàn)組加入各類酶來(lái)確認(rèn)“轉(zhuǎn)化因子”的化學(xué)本質(zhì)，利用了自變量控制的________原理。參考此方法，如果要了解Oct3/4、Sox2、c－Myc和Klf4基因在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞時(shí)，每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，該如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?請(qǐng)你給出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路。______________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________________________________。減法依次去掉1個(gè)基因，將其他3個(gè)基因轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中，通過(guò)與轉(zhuǎn)入4個(gè)基因的小鼠成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)情況進(jìn)行比較，來(lái)推測(cè)缺失的基因?qū)φT導(dǎo)iPS細(xì)胞的影響，進(jìn)而判斷每個(gè)基因作用的相對(duì)大小(其他合理答案均可)【解析】(1)按照發(fā)育狀態(tài)，干細(xì)胞可以分為成體干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞兩大類。(2)④表示細(xì)胞分化過(guò)程，分化是由于基因的選擇性表達(dá)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄出的mRNA和翻譯出的蛋白質(zhì)不完全相同。分化過(guò)程中遺傳信息由DNA經(jīng)轉(zhuǎn)錄流向mRNA，再經(jīng)翻譯流向蛋白質(zhì)。(3)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液中必須通入O2和CO2，通入CO2的目的是維持培養(yǎng)液的pH。(4)艾弗里通過(guò)加入酶水解某類特定的物質(zhì)，屬于減法原理。若用減法原理驗(yàn)證Oct3/4、Sox2、c－Myc和Klf4基因在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞時(shí)，每個(gè)基因作用的相對(duì)大小，在導(dǎo)入基因時(shí)，依次去掉某個(gè)特定的基因，只導(dǎo)入其他3個(gè)基因到小鼠成纖維細(xì)胞中，通過(guò)與轉(zhuǎn)入4個(gè)基因的小鼠成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)情況進(jìn)行比較，來(lái)推測(cè)缺失的基因?qū)φT導(dǎo)iPS細(xì)胞的影響，進(jìn)而判斷每個(gè)基因作用的相對(duì)大小。(二)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)及單克隆抗體的制備(素養(yǎng)目標(biāo)：科學(xué)探究)2.(2022年廣東名校質(zhì)檢)新冠病毒(RNA病毒)表面的S刺突蛋白上的受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(S－RBD)能夠與人細(xì)胞表面受體ACE2結(jié)合，介導(dǎo)病毒入侵宿主細(xì)胞?？蒲腥藛T進(jìn)行了抗S－RBD蛋白單克隆抗體的制備及研究。(1)從新冠患者體內(nèi)提取到S蛋白的RBD片段，多次注射到小鼠體內(nèi)，目的是__________________________________________。一段時(shí)間后將獲取的脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，利用_____________篩選出雜交瘤細(xì)胞。

刺激小鼠產(chǎn)生更多已免疫的B細(xì)胞(漿細(xì)胞)

選擇培養(yǎng)基(2)將得到的4種雜交瘤細(xì)胞分別進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，分別取其上清液進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)，從中選出產(chǎn)生“最優(yōu)抗體”的雜交瘤細(xì)胞。檢測(cè)的流程如圖1，檢測(cè)的結(jié)果如圖2。圖1實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，將S－RBD固定，將上述4種雜交瘤細(xì)胞的上清液和未免疫小鼠的血清加到反應(yīng)體系，然后加入酶標(biāo)抗體。由圖可知酶標(biāo)抗體與待測(cè)抗體結(jié)合，將待測(cè)抗體作為_(kāi)_______，酶標(biāo)抗體攜帶的酶再使底物顯色，底物顯色越深吸光值越大。據(jù)圖2結(jié)果分析，研究人員認(rèn)為雜交瘤細(xì)胞______(填序號(hào))產(chǎn)生的抗體為“最優(yōu)抗體”，依據(jù)是_______________________________________________________________________________________________________。

抗原①

不同稀釋倍數(shù)下，①的吸光值最大，說(shuō)明酶標(biāo)抗體與①產(chǎn)生的抗體結(jié)合最多，①產(chǎn)生的抗體與抗原結(jié)合能力最強(qiáng)【解析】(1)單克隆抗體制備過(guò)程中的第一步是獲取已免疫的B淋巴細(xì)胞，所以從新冠患者體內(nèi)提取到S蛋白的RBD片段，多次注射到小鼠體內(nèi)，目的是刺激小鼠產(chǎn)生更多已免疫的B細(xì)胞(漿細(xì)胞)，一段時(shí)間后將獲取的脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，融合后進(jìn)行篩選，第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞用的是選擇培養(yǎng)基，未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。(2)第二次篩選的目的是篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，方法原理是抗原—抗體雜交，因此用酶標(biāo)抗體與待測(cè)抗體結(jié)合，將待測(cè)抗體作為抗原，酶標(biāo)抗體攜帶的酶再使底物顯色，底物顯色越深吸光值越大。據(jù)圖2結(jié)果分析，①產(chǎn)生的抗體為“最優(yōu)抗體”，依據(jù)是不同稀釋倍數(shù)下，①的吸光值最大，說(shuō)明酶標(biāo)抗體與①產(chǎn)生的抗體結(jié)合最多，①產(chǎn)生的抗體與抗原結(jié)合能力最強(qiáng)。典題演練·破解高考1.(2021年湖南卷)M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過(guò)核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是____________，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的____________斷開(kāi)。

(2)在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是______________________________

____________________________________________________。

限制酶磷酸二酯鍵

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，同時(shí)給細(xì)胞提供足夠的營(yíng)養(yǎng)(3)與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是_______________________________________________________________________________________________________________。

從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為_(kāi)_____________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)，功能上具有________________。

動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯(任選兩點(diǎn)作答)

發(fā)育的全能性(4)鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的______淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備抗M蛋白的單克隆抗體。簡(jiǎn)要寫出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路：_________________________________________________________________________________________________________。B

取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交【解析】(1)基因工程中切割DNA的工具酶是限制酶，故在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是限制酶。限制酶是作用于其所識(shí)別序列中兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏性末端和平末端。(2)在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。(3)由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難，故與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率低。胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。(4)先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，制備抗M蛋白的單克隆抗體；若要利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活，如果M基因已經(jīng)失活，則克隆動(dòng)物A中無(wú)法產(chǎn)生M蛋白，無(wú)法與抗M蛋白的單克隆抗體形成抗原—抗體復(fù)合物，則可利用抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。故實(shí)驗(yàn)思路為：取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交。命題探源本題結(jié)合圖示考查基因工程、核移植、胚胎移植、單克隆抗體的相關(guān)知識(shí)，