五眼果水提物對(duì)小鼠泌尿系結(jié)石的影響

第五眼果實(shí)是雕刻植物（roxb.）betrtand山區(qū)的干燥果核。據(jù)《中華本草》記載:其味甘、酸,性平,具有行氣活血、養(yǎng)心安神、消積解毒功效,主治氣泄血瘀,胸痛,心悸氣短,神經(jīng)衰弱,失眠,支氣管炎,食滯腹?jié)M,腹瀉,疝氣,燙火傷等。民間使用五眼果入藥治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石具有良好臨床效果,但關(guān)于其治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥理作用研究目前尚無報(bào)道。本文復(fù)制泌尿系統(tǒng)結(jié)石動(dòng)物模型,通過檢測(cè)小鼠的尿液及腎臟中草酸和鈣的含量,初步研究五眼果對(duì)泌尿系統(tǒng)結(jié)石的作用。1實(shí)驗(yàn)材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠,體重18～22g,由廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)桂醫(yī)動(dòng)字第11004號(hào)。1.1.2儀器、試劑與儀器722型可見分光光度計(jì)(上海醫(yī)用儀表廠);QL-901震蕩儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司);蕩石片(吉林省大峻藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)20080102);阿法骨化醇軟膠囊(1α(OH)VitD3,南通華山藥業(yè)有限公司,批號(hào)070528);其他化學(xué)試劑均為分析純。1.1.3眼果高、中、低劑量的配制提物制備:取500g藥材粗粉,加入5L蒸餾水,加熱提取1h,過濾,藥渣加入4L蒸餾水,加熱提取0.5h,過濾,合并濾液,濃縮至500mL,為褐色溶液,4℃冰箱保存?zhèn)溆?五眼果高、中、低劑量:用蒸餾水配成100%、50%、25%的濃度。溴麝香草酚藍(lán)指示劑:0.1g麝香溴酚蘭溶于20mL100%乙醇中徐徐加入蒸餾水80mL不斷振蕩直至完全溶解。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1藥物對(duì)尿液結(jié)構(gòu)模型的影響1.2.1.小鼠的或加量生藥處理取78只健康小白鼠,♀♂各半,18～22g,隨機(jī)分成6組,每組13只,即空白對(duì)照組(蒸餾水),模型對(duì)照組(蒸餾水),陽性對(duì)照組(蕩石片,2g/kg),五眼果高、中、低劑量組(20g生藥/kg、10g生藥/kg、5g生藥/kg),除空白對(duì)照組外,其余各組小鼠上、下午分別i.g給予1%乙二醇0.5mL/只,間隔1h后,再分別給予飲用水1mL/只,于每天下午固定時(shí)間i.g給予1α(OH)VitD30.5μg/只1次,每周給予處理6d。于每天下午固定時(shí)間i.g給予相應(yīng)藥物和蒸餾水,給藥容量20mL/kg。連續(xù)進(jìn)行4周,每周第7天給予相應(yīng)藥物或蒸餾水后,收集24h尿液測(cè)定尿草酸和尿鈣含量。末次收集24h尿液后,處死小鼠,取右側(cè)腎臟,勻漿,測(cè)定腎草酸、腎鈣含量。1.2.1.尿尿酸含量及腎物指標(biāo)測(cè)定尿草酸測(cè)定:應(yīng)用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測(cè)定尿草酸排泄量:以超純水作參比,在515nm處測(cè)吸光度。按下列公式計(jì)算尿草酸含量:C(mmol/L)=(空白管-樣品管)/(空白管-標(biāo)準(zhǔn)管)×0.01腎草酸測(cè)定:用變色酸比色法測(cè)定草酸含量,以空白管作參比,在570nm處測(cè)其余管吸光度,按下列公式計(jì)算。C(mmol/L)=樣品管/標(biāo)準(zhǔn)管×0.57。尿鈣、腎鈣檢測(cè):應(yīng)用EDTA絡(luò)合滴定法測(cè)定。1.3統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS11.0軟件進(jìn)行處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x珋±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有顯著性。2結(jié)果2.1高p>0.05結(jié)果表明模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較,造模期間尿草酸明顯升高(P<0.05)。與模型組比較,高、中、劑量組的尿草酸在實(shí)驗(yàn)期間均有明顯降低(P<0.05),低劑量組的尿草酸在給藥后第3、4周有明顯降低(P<0.05),結(jié)果見表1。2.2升降p>0.05結(jié)果表明模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較,造模期間尿鈣明顯升高(P<0.05)。高、中、低劑量組與模型組比較,在實(shí)驗(yàn)期間均明顯降低(P<0.05),低劑量組的尿鈣在給藥后第3、4周有明顯降低(P<0.05),結(jié)果見表2。2.3組大鼠p>0.05明顯升溫結(jié)果表明模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較,造模期間腎鈣,腎草酸明顯升高(P<0.05)。與模型組比較,高、中、低劑量組的腎鈣、腎草酸在實(shí)驗(yàn)期間均明顯降低(P<0.05),各劑量對(duì)腎鈣,腎草酸均有明顯降低作用(P<0.05),結(jié)果見表3。3腎物合成對(duì)小鼠尿苯用量的影響誘石劑乙二醇是草酸的前體,進(jìn)入體內(nèi)代謝最終轉(zhuǎn)變?yōu)椴菟?從腎分泌排泄。1α(OH)VitD3可促進(jìn)小腸黏膜上皮和小管上皮細(xì)胞對(duì)鈣的吸收,促進(jìn)骨鈣的釋放。長(zhǎng)期用1α(OH)VitD3可使小鼠的尿鈣濃度升高,尿鈣草酸結(jié)合成為草酸鈣,在腎組織內(nèi)形成晶體,晶體漸生長(zhǎng)、聚集形成結(jié)石。臨床上許多結(jié)石患者對(duì)鈣吸收主要是通過對(duì)維生素D3依賴機(jī)制,故1α(OH)VitD3是草酸鈣結(jié)石形成的重要危險(xiǎn)因素。本實(shí)驗(yàn)采用乙二醇和1α(OH)VitD3等作為誘石液進(jìn)行動(dòng)物模型的條件研究。與空白組比較,尿草酸明顯升高(P<0.05),而且造模后無小鼠死亡,表明造模成功。五眼果高、中劑量在實(shí)驗(yàn)期間明顯降低尿草酸,尿鈣水平(P<0.05),低劑量則在給藥后