淺析痛清顆粒中芍藥苷與葛根素的提取工藝研究【摘要】目的優(yōu)選痛清顆粒中芍藥苷與葛根素的提取工藝。方法采用4因素3水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法,以芍藥苷、葛根素轉(zhuǎn)移率綜合評分為考核指標(biāo),篩選影響提取工藝的因素。結(jié)果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)三因素沒有顯著性影響。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際需要,痛清顆粒中芍藥苷與葛根素的最佳提取條件是：加入22倍量水提取3次(12,5,5),提取2h(,,)。結(jié)論此條件為痛清顆粒中芍藥苷和葛根素的最佳提取工藝。

【關(guān)鍵詞】痛清顆粒；芍藥苷；葛根素；正交試驗(yàn)；提取工藝

Abstract：ObjectiveTooptimizethetechnologyofextractingPaeoniflorinandPuerarinfromTongqingGranules.MethodsTheexperimentusedtheorthogonalexperimentaldesign(4factorsand3levels)withtheshift-rateofPaeoniflorinandPuerarinasexperimentalcriterioninscreeningthefactorsaffectingthetechnologyofextractingTongqingGranules.ResultsAllthe3factorsdesignedintheorthogonalexperimentnon-signifantlyaffectedtheextractingtechnology.Inconsiderationoftheindustrialpractice,thebestconditionofextractingtheconstituentsfromTongqingGranuleswasdecided：waterextractionfor3times,extractingwith12foldwaterfor1hoursforthefirsttime,with5foldwaterforhoursforthesecondtime,andwith5foldwaterforhourforthethirdtime.ConclusionTheconditionistheoptimizedtechnologyofextractingPaeoniflorinandPuerarinfromTongqingGranules.

Keywords：Paeoniflorin；Puerarin；orthogonalexperiment；extractingtechnology

痛清顆粒是由白芍、葛根等中藥精制而成的中藥復(fù)方制劑,臨床用于治療頭痛。白芍是毛茛科植物芍藥(PaeonialactifloraPall.)的干燥根,性微寒,味苦、酸,具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、斂陰收汗之功效[1]。葛根是豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,性涼,味甘、辛,具有解肌退熱、生津、透疹、升陽止瀉的功效[1]。本試驗(yàn)對其提取工藝進(jìn)行了研究,以芍藥苷、葛根素轉(zhuǎn)移率為考核指標(biāo),采用綜合評分的方法獲得了最佳提取工藝。現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(美國)；16G-型高速離心機(jī)；SB5200型超聲清洗機(jī)(上海Branson公司)；AEL-40SM型電子天平(日本島津)。甲醇、乙腈為色譜純,乙醇為分析純,水為重蒸水。白芍、葛根等藥材經(jīng)鑒定,符合2005版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。芍藥苷、葛根素對照品購自中國藥品生物制品檢定所,批號110736-200525、110752-200209。

2方法與結(jié)果

正交設(shè)計(jì)

在查閱大量文獻(xiàn)以及預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)用水作為提取溶劑時(shí)均能較好提取芍藥苷、葛根素等。我們選用L9(34)正交表,對加水量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)三因素進(jìn)行了考察,以芍藥苷、葛根素轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo),綜合評分,優(yōu)選最佳提取工藝。因素水平見表1。表1正交試驗(yàn)因素水平表

含量測定

芍藥苷

色譜條件：LichrospherC18色譜柱(mm×250mm,5μm),Waters515高效液相色譜儀；2487雙波長紫外檢測器；檢測波長λ=230nm；流動相為乙腈-%磷酸溶液(14∶86)；流速為mL/min；AUFS；柱溫30℃；進(jìn)樣量為5μL。分別配制不同濃度的芍藥苷對照品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)行測定,以芍藥苷進(jìn)樣量(X)對峰面積(Y)進(jìn)行線性擬合,回歸方程為：Y=6486000X+32,r=7,結(jié)果在～μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

葛根素

色譜條件：LichrospherC18色譜柱(mm×250mm,5μm),Waters515高效液相色譜儀；2487雙波長紫外檢測器；檢測波長λ=250nm；流動相為甲醇-水(25∶75)；流速為mL/min；AUFS；柱溫30℃；進(jìn)樣量為5μL。分別配制不同濃度的葛根素對照品溶液,在上述色譜條件下進(jìn)行測定,以葛根素進(jìn)樣量(X)對峰面積(Y)進(jìn)行線性擬合,回歸方程為：Y=22670000X+15,r=9,結(jié)果在～μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

水提樣品處理與測定

取水提正交設(shè)計(jì)所得樣品,分別用測定芍藥苷和葛根素的流動相稀釋不同的倍數(shù),充分振搖,高速離心處理,上清液用μm的微孔濾膜過濾,所得樣品分別在上述測定芍藥苷和葛根素的色譜條件下進(jìn)行測定。

數(shù)據(jù)分析及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

對正交試驗(yàn)測定的數(shù)據(jù)進(jìn)行極差和方差分析,結(jié)果見表2、表3。表2痛清顆粒的正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)極差分析表注：綜合評分(%)=芍藥苷轉(zhuǎn)移率×50%+葛根素轉(zhuǎn)移率×50%。表3痛清顆粒的正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)方差分析表注：F(2,2)=。

從表2極差分析結(jié)果可知,因素影響CBA,但3因素3個(gè)水平之間均無顯著性差異(由表3可知)。由極差分析得出的最佳工藝組合是A3B1C3,即加水量為藥材用量26倍,提取3次,第1次h,第2、3次每次各h,3次的加水量分別為14、6和6。而表2中最佳的實(shí)驗(yàn)組合是A2B2C3,芍藥苷和葛根素的轉(zhuǎn)移率均在90%以上,即加水量為22倍量,提取3次,分別提取、、h。對A3B1C3和A2B2C3進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,兩種有效成分的轉(zhuǎn)移率均在85%以上,考慮到生產(chǎn)實(shí)際,選擇最佳的提取工藝條件是A2B1C3。

3小結(jié)

提取時(shí)間是影響中成藥生產(chǎn)中中藥藥效成分浸出的一個(gè)重要因素,一般認(rèn)為長時(shí)間加熱會破壞有效成分。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),多次短時(shí)間連續(xù)提取對芍藥苷、葛根素的浸出有利,時(shí)