高效液相色譜法測定洗發(fā)類化妝品中四種去屑劑的含量

據(jù)中國保險部統(tǒng)計，中國約60%的成年人受到不同程度的上肢崇拜的影響，其中15%的人非常嚴(yán)重。頭皮屑的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確,但其產(chǎn)生的主要原因與頭皮表面馬拉色菌屬真菌的繁殖密切相關(guān)。目前,市場上常見的去屑洗發(fā)水多添加各種抑制真菌生長的化學(xué)成分,包括水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽等,其中酮康唑是一種治療頭皮屑效果較好的藥物,但這些去屑劑同時又具有一定的安全性問題。據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)的要求,酮康唑為不得在化妝品中添加的禁用組分,而其他三種成分則是可以添加到化妝品中的限用組分。因此,建立洗發(fā)液中去屑劑的測定方法對于產(chǎn)品監(jiān)管及維護(hù)消費者的健康權(quán)益具有重要意義。而在對化妝品中各種禁限用去屑劑進(jìn)行市場監(jiān)管的過程中,能夠一次性的對這四種常見成分進(jìn)行鑒定、分離和定量是最快速、便捷、省時、節(jié)約的方案。本研究以市售去屑洗發(fā)水為樣品,采用反相高效液相色潽法,對標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的四種禁限用物質(zhì)進(jìn)行分離,確立了實驗室條件下四種物質(zhì)的分析定量方法。1設(shè)備和材料1.1超聲波粉碎機(jī)法Waters2695高效液相色譜儀及二極管陣列檢測器(沃特世中國有限公司);B5500S-MT型超聲波清洗機(jī)(必能信(上海)有限公司);PB-21型pH計(德國Sartorius公司);CP225D型電子天平(德國Sartorius公司)。1.2測試劑磷酸二氫鉀、EDTA、磷酸均為分析純;甲醇、乙腈均為色譜純。1.3藥品微生物指標(biāo)檢驗對照品:水楊酸,購自中國藥品生物制品檢驗檢定院,批號200303;酮康唑,購自中國藥品生物制品檢驗檢定院,批號200602;氯咪巴唑,購自Dr.Ehrenstorfer,批號00208;吡啰克酮乙醇胺鹽,購自Fluka,批號001437800;供試樣品:去屑洗發(fā)露,廠家X,批號BK200B。2測試方法2.1對照品溶液的制備0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液的配制:稱取磷酸二氫鉀1.36g,加EDTA0.19g(終濃度為0.5mmol/L),用水稀釋至1000ml,用磷酸調(diào)節(jié)水溶液的pH至4.0。對照品稀釋溶液:乙腈:甲醇=95:5。流動相:乙腈:甲醇:0.01mol/L磷酸二氫鉀緩沖液=50:10:40。2.2對照品溶液的制備對照品儲備溶液的制備:分別稱取水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽對照品24.42mg、25.05mg、49.81mg和52.84mg,用對照品稀釋溶液定容至50ml容量瓶中。對照品系列溶液的制備:分別量取四種對照品儲備液1.00,2.00,4.00,8.00,10.00ml,用流動相A稀釋至10ml。相應(yīng)對照品溶液含量見表1。2.3提取液的制備稱取樣品約0.5g,置于50ml容量瓶中,加對照品稀釋液定容至刻度,振搖,超聲提取40min,經(jīng)0.45μm濾膜過濾,濾液做為待測溶液。2.4色度分析色譜柱:C18;柱溫:室溫;流速:0.8ml/min;進(jìn)樣量:5μl;檢測波長:230nm。2.5化合物終濃度的測定量取標(biāo)準(zhǔn)曲線第一點40μl,用對照品稀釋溶液定容至10ml,使水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的終濃度分別為0.2μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml和0.4μg/ml。2.6復(fù)配鹽終濃度的測定量取標(biāo)準(zhǔn)曲線第一點100μl,用對照品稀釋溶液定容至10ml,使水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的終濃度分別為0.5μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml和1.0μg/ml。2.7加樣回收率測定分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.00和10.00ml各三份,置于10ml容量瓶中,分別稱取樣品6份(約0.05g),精密稱定于上述容量瓶中,按樣品溶液制備方法制備回收率測定溶液,按上述色譜條件測定,計算回收率。3結(jié)果3.1種去屑劑的色譜分離按照本文的色譜條件試驗,分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進(jìn)樣,對照溶液中四種去屑劑組分的色譜分離圖見圖1。理論板數(shù)按水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽計分別為9385、8155、14087和17548,分離度均大于1.5。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以峰面積積分值為縱坐標(biāo),以表1中的系列濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo),繪制四種去屑劑組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別計算回歸方程如下:水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的線性范圍分別為48.84~488.40μg/ml、50.10~501.00μg/ml、99.62~996.20μg/ml和105.68~1056.80μg/ml,該范圍內(nèi)四種組分的進(jìn)樣濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。3.3進(jìn)樣的精密度取標(biāo)準(zhǔn)曲線第一點,按方法色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次,測定四種去屑劑組分峰面積,組分水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的RSD分別為0.7%、0.5%、0.4%和0.7%,四種組分重復(fù)進(jìn)樣結(jié)果表明該色譜條件下測定結(jié)果的精密度良好,如圖2所示。3.4胺鹽的檢測限和定量限按方法2.5制備的檢出限溶液,按上述色譜條件測定,進(jìn)樣量5μl,水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的信噪比分別為37、56、39和1.7,如圖3所示,確定檢出濃度為0.2μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml和0.4μg/ml,按照稀釋體積50ml,稱樣量0.5g,計算水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的方法檢出限依次為20.0μg/g、20.0μg/g、40.0μg/g和40.0μg/g。3.5測定酮乙醇胺鹽的定量按方法2.6制備的定量限溶液,按上述色譜條件測定,進(jìn)樣量5μl,水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的信噪比分別為182、68、46和4,如圖4所示,確定定量濃度為0.5μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml和1.0μg/ml,按照稀釋體積50ml,稱樣量0.5g,計算水楊酸、酮康唑、氯咪巴唑和吡啰克酮乙醇胺鹽的方法定量依次為50.0μg/g、50.0μg/g、100.0μ3.6加樣回收率計算經(jīng)過測定,供試樣品中四種組分的含量均小于檢出限,通過對照品加入量和對照品測得量計算四種組分的平均回收率分別為99.86%、100.65%、99.67%和103.76%,回收率計算結(jié)果及RSD(%)見表2。4高效液相色譜分離水楊酸具有一定的抑菌作用,是一種常用于化妝品中的防腐劑,目前常用的檢測方法也很多,由于其具有紫外吸收,而可以通過液相系統(tǒng)分離后經(jīng)紫外檢測器檢測。酮康唑的含量測定通常采用電位滴定的方法,但也有研究報道以甲醇和磷酸鹽緩沖液作為流動相進(jìn)行高效液相色譜分離的方法。據(jù)化妝品國家標(biāo)準(zhǔn)QB/T4128-2010和QB/T4127-2010中規(guī)定的方法,