臨床磁酶免疫學(xué)定量檢驗(yàn)Ⅰ可調(diào)式移液器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕實(shí)驗(yàn)室名稱項目編號制定日期分泌檢驗(yàn)室可調(diào)式移液器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序00000105年01月03日【目的】規(guī)儀器設(shè)備的操作程序，保證加樣器的正常狀態(tài)。【適用圍】本實(shí)驗(yàn)室加樣器的操作?！静僮魅藛T】本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員?！静僮鞑襟E】1．設(shè)定容量值：轉(zhuǎn)動加樣器的調(diào)節(jié)旋鈕，反時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可提高設(shè)定移液量。順時針方向轉(zhuǎn)動旋鈕，可降低設(shè)定移液量。在調(diào)整設(shè)定移液量的旋鈕時，不要用力過猛，并應(yīng)注意使移液器顯示的數(shù)值不超過其可調(diào)圍。2．預(yù)洗：當(dāng)裝上一個新吸頭時應(yīng)預(yù)洗吸頭，先吸入一次液體并將之排回原容器中。3．吸液：[1]選擇適宜的吸頭安放在移液套筒上，稍加扭轉(zhuǎn)壓緊吸嘴使之與套筒之間無空氣間隙。[2]取液之前，所取液體應(yīng)在室溫〔15℃－25℃〕平衡。[3]把按鈕壓至第一停點(diǎn)，垂直握持加樣器,使吸頭浸入液面下2~3毫米處,然后緩慢平穩(wěn)地松開按鈕,吸入液體，等一秒鐘，然后將吸頭提離液面，貼壁停留2-3秒，使管尖外側(cè)的液滴滑落。4．放液:[1]將吸頭口貼到容器壁底部并保持100~40°傾斜。[2]平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn),等一秒鐘后再把按鈕壓到第二停點(diǎn)以排出剩余液體。[3]壓住按鈕,同時提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過。[4]松開按鈕。[5]按吸頭彈射器除去吸頭。5．加樣器吸嘴為一次性使用。【加樣器的維護(hù)保養(yǎng)程序】加樣器應(yīng)根據(jù)使用頻率進(jìn)展維護(hù)，但至少應(yīng)每3個月進(jìn)展一次，具體方法如下：1.一般維護(hù)可用中性洗滌劑清潔，或者用60﹪的異丙醇，然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇，晾干。清潔后活塞處可使用一定量的潤滑劑。2.如果有液體進(jìn)入加樣器的嚴(yán)重污染，可將加樣器拆開后進(jìn)展清潔，具體拆開步驟參照加樣器說明書。3.高壓消毒，有的加樣器的吸管局部可高壓消毒，但需注意的是消毒時不可超溫超時，也不能擠壓放置，以免造成變形。4.可調(diào)式移液器在不使用時應(yīng)妥善地豎立放于支架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。5.在移液操作過程中為防止液體進(jìn)入加樣器套筒，必須注意：壓放按鈕時保持平穩(wěn)；加樣器不得倒轉(zhuǎn)；吸頭中有液體時不可將加樣器平放。6.每天開場工作之前應(yīng)檢查移液器的外外表是否有灰塵或污物，假設(shè)有則小心抹去。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人晉紅王雅萍晉紅日期05年01月03日Ⅱ洗板機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕實(shí)驗(yàn)室名稱項目編號制定日期******洗板機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔BI0-RAD〕********年**月**日【目的】規(guī)洗板機(jī)的操作程序，保證洗板機(jī)的正常狀態(tài)。【適用圍】本實(shí)驗(yàn)室洗板機(jī)的操作?！静僮魅藛T】本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員?！静僮鞑襟E】1.拔掉廢液瓶口的塞子〔接有與洗板機(jī)相連的廢液管〕，倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰勁，以保證廢液管的通暢。2.擰開洗液瓶的蓋子〔接有與洗板機(jī)相連的洗液管〕，倒掉前一天洗液瓶里剩余的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰勁，以保證洗液管的通暢。3.保證待洗反響板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機(jī)的吸液針。4.插上電源，翻開電源開關(guān)〔按后面板POWER鍵〕，出現(xiàn)如下界面：SELECT:RUN↑↓INYESOUT5.按“OUT〞鍵，載板臺彈出。將待洗反響板放在載板臺上。6.按“YES〞鍵后再按↑或↓鍵以選擇相應(yīng)程序，然后按再“YES〞鍵，此時屏幕顯示“LASTSTRIP12〞。LASTSTRIP12↑↓YESESC7.再按↑或↓鍵以選擇待洗板條的數(shù)目。然后按“YES〞鍵即可。RUN：P01STRIP12YESESC8.清洗完成后，重新出現(xiàn)4的界面。拿下已洗好的反響板，按“IN〞鍵，載板架彈進(jìn)。再按后面板POWER鍵關(guān)閉電源。9.假設(shè)中途退出，按“ESC〞鍵?！鞠窗鍣C(jī)的維護(hù)保養(yǎng)】1.平常不用時，拔掉電源插頭。2.每天洗板機(jī)工作完畢時，要對外其進(jìn)展清潔，用濕抹布擦洗洗板機(jī)的外壁及載物臺，以保證其干凈。用蒸餾水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。3.及時倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機(jī)的故障。4.保證待洗的反響板的孔邊緣不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。5.定期將洗液及廢液管道拆卸下來進(jìn)展沖洗，以保證管道的通暢。【編制洗滌程序】1.插上電源，翻開電源開關(guān)〔按后面板POWER鍵〕，出現(xiàn)如下界面：SELECT:RUN↑↓INYESOUT按“↑〞“↓〞鍵使RUN變成EDIT后按“YES〞鍵進(jìn)入如下界面：SELECT:EDIT↑↓INYESOUT然后，根據(jù)自己的需要選擇適合的洗滌方式，一般選擇整板洗滌且8孔模式，每一洗滌循環(huán)包括吸液〔根據(jù)自己的需要設(shè)定吸液的速度〕、注水〔根據(jù)自己的需要設(shè)定注水量〕、再吸液〔根據(jù)自己的需要設(shè)定吸液的速度〕三步，設(shè)定5或6個循環(huán)即可。編程完成后，按E*IT回到1的界面。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人******************日期**年**月**日Ⅲ酶標(biāo)儀的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕實(shí)驗(yàn)室名稱項目編號制定日期******酶標(biāo)儀的標(biāo)準(zhǔn)操作程序********年**月**日【目的】規(guī)儀器設(shè)備的操作程序，保證酶標(biāo)儀的正常狀態(tài)?！具m用圍】本實(shí)驗(yàn)室加樣器的操作?！静僮魅藛T】：本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員?！静僮鞑襟E】：插上電源，翻開電源開關(guān)〔按后面板POWER鍵〕，出現(xiàn)如下界面：Th01Jan00：00﹤Measure﹥此時按“﹤〞或“﹥〞鍵可選擇Measure或quick及其它操作〔如編程、查找前面的測試結(jié)果等〕。假設(shè)通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)展定量檢測的工程用Measure；假設(shè)只是需要反響的光密度值，則用quick。2.在1的界面時，按面板上的“∨〞鍵彈出載物臺。3.將待測板放置于載物臺上4.按“ENTER〞鍵后再按“﹤〞或“﹥〞鍵以選擇待測工程的相應(yīng)程序〔每個通道存放的程序已由本室人員根據(jù)試劑盒的要求事先輸入〕。SelectTest1"工程名稱"5.連按“ENTER〞鍵3次即可。6.翻開打印機(jī)電源，放上A4紙，打印出測試結(jié)果。7.測試完畢后，假設(shè)Measure測試則酶標(biāo)儀自動彈出載物臺；假設(shè)quick測試則需按面板上的“∨〞鍵彈出載物臺。拿下測試完的反響板，再按“∧〞鍵將載物臺彈進(jìn)酶標(biāo)儀。8.關(guān)閉酶標(biāo)儀及打印機(jī)電源?！久笜?biāo)儀的維護(hù)保養(yǎng)】1.平常不用時，拔掉電源插頭。2.使用完畢，一定要拿下測試完的反響板，千萬不要將反響板留在載物臺上，并且要把載物臺彈進(jìn)酶標(biāo)儀。3.假設(shè)有液體濺到載物臺或酶標(biāo)儀外壁，應(yīng)用濕抹布及時擦去。4.每次使用完畢用濕抹布擦拭酶標(biāo)儀，以保持其干凈?！揪幹茰y試程序】1.插上電源，翻開電源開關(guān)〔按后面板POWER鍵〕，出現(xiàn)如下界面：Th01Jan00：00﹤Measure﹥2.此時按“﹤〞或“﹥〞鍵可進(jìn)入如下界面Th01Jan00：00﹤testdata﹥3.按ENTER確認(rèn)這個選擇，再按“﹤〞或“﹥〞鍵可進(jìn)入如下界面testdata﹤define﹥4.按ENTER確認(rèn)這個選擇，再按“﹤〞或“﹥〞鍵選擇程序號，并按。ENTER確認(rèn)。Selecttest﹤ⅩⅩⅩ﹥definetest﹤testname﹥輸入實(shí)驗(yàn)名稱，利用﹤〞或“﹥〞鍵選擇所需參數(shù)。definetest﹤filter﹥此指令用于進(jìn)入測試濾光片和參比濾光片的波長。確定所虛波長后，按E*IT鍵返回此界面，再利用﹤〞或“﹥〞鍵進(jìn)入如下界面：definetest﹤shanking﹥此指令用于選擇振搖時間、方式和位置。確定需求后，按E*IT鍵返回此界面，再利用﹤〞或“﹥〞鍵進(jìn)入如下界面：definetest﹤layout﹥此指令用于定義盤孔分布及輸入各標(biāo)準(zhǔn)品相應(yīng)濃度。本室一般把標(biāo)準(zhǔn)品定義在反響板的第一列。確定需求后，按E*IT鍵返回此界面，再利用﹤〞或“﹥〞鍵進(jìn)入如下界面：definetest﹤evalmode﹥此指令用于選擇被執(zhí)行的報告方式，定性、定量或其他報告方式。確定需求后，按E*IT鍵返回此界面，再利用﹤〞或“﹥〞鍵進(jìn)入如下界面：definetest﹤validations﹥校驗(yàn)公式，此指令用于檢查結(jié)果是否正確。確定需求后，按E*IT鍵返回此界面，再利用﹤〞或“﹥〞鍵進(jìn)入如下界面：definetest﹤e*ict﹥按此鍵退出,編程完畢。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人******************日期**年**月**日ⅣHBsAg檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱工程編號制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠.【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！緲?biāo)本的采取和保存】隨機(jī)靜脈血2ml，別離血清備用。也可使用血漿標(biāo)本進(jìn)展檢測。標(biāo)本宜新鮮，無污染，防止無溶血，防止反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐?！静僮鞒绦颉?．實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將濃縮洗滌液作1:20稀釋。2．加待測標(biāo)本：參加待測標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)HBsAg陽性對照2孔，HBsAg陰性對照2孔，空白對照1孔。3．加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對照孔不加，充分混勻，置37℃孵育30分鐘。4．洗板：1)手工洗板：棄去反響板條孔液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5—10秒，棄去孔洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。2)洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5．加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37℃避光孵育15分鐘。6．終止反響：每孔參加終止液0.05毫升，混勻。7．測定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇唯波長450nm(以空白孔校零)或雙波長450／630nm，讀取各孔OD值?！窘Y(jié)果判斷】Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值×2.1標(biāo)本OD值>COV為陽性，標(biāo)本OD值<COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實(shí)際OD值計算?！究记绊氈?．試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去1-2滴后垂直滴加，注意均勻用力。2．從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)展測試，余者應(yīng)及時封存，置冰箱貯藏備用。3．洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。4．不同批號試劑請勿通用。5．結(jié)果判斷須在10分鐘完成。6．封片不能重復(fù)使用。7．用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人******************日期**年**月**日Ⅴ免疫學(xué)檢驗(yàn)室質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱工程編號制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)?！驹揝OP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！痉椒ā俊痉治銮百|(zhì)控】人員培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)是人操作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：[1]檢驗(yàn)工程的根本原理〔ELISA原理〕；[2]臨床意義；[3]熟悉檢測技巧，了解易出過失的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；[4]熟悉檢測試劑性能〔包括試劑盒組成，包被片段及其組成〕；[5]熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。[6]*些特殊工程的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。2.室質(zhì)控血清的制備：[1]收集陽性血清(無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清,到一定量〔夠本室使用3-6個月的量〕；[2]傳染性病毒陽性需經(jīng)56℃、10小時滅活后使用；[3]過濾，除纖維沉淀物；[4]稀釋，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋；[5]測定值，與定值參考品進(jìn)展比照、求值，一般定在CutOff值附近的陽性值；[6]分裝小瓶〔每日用量〕，加蓋、貼簽，-20℃凍存?zhèn)溆谩驹噭┖羞x擇】衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品?！驹噭┖性u價】試劑評價需要有權(quán)威的血清考核盤〔Panel〕進(jìn)展檢測，價格昂貴，操作繁瑣，一般實(shí)驗(yàn)室不易開展，可以通過以下信息，了解試劑質(zhì)量。1.根據(jù)該試劑生物制品鑒定所的批批檢定報告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量方案選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；2.通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源〔基因工程或合成多肽〕，片段的組合〔按比例混合或化學(xué)合成〕，片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣；3.參考室間質(zhì)評報告中對試劑的評價結(jié)果，了解不同試劑的質(zhì)控成績。4.根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣?！緝x器質(zhì)控】為使儀器保持最正確工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOP〕，所要控制的儀器包括移液器〔加樣槍〕，水浴箱〔溫箱〕，洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。1.移液器：ELISA加樣量小〔5-100ｕl〕，其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在±10%以；2.水浴箱：經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中〔或溫箱〕實(shí)測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；3.洗板機(jī)：每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul，人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；4.酶標(biāo)儀：經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)局部，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、準(zhǔn)確度和可測圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可準(zhǔn)確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀的可測圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測圍與線性圍的不同，線性圍常小于可測圍，比方*一酶標(biāo)儀的可測圍為0.000~2.900，而其線性圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意。【酶標(biāo)儀校正程序】1.濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計〔波長精度±0.3nm〕于可見光區(qū)對每個濾光片進(jìn)展掃描，其檢測值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。一般酶標(biāo)儀無585nm濾光片，可選用550nm或630nm濾光片。450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液〔校正波長為630nm〕。2.通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯〔杯底須光滑，透明，無污染以酶標(biāo)板架作載體，將其〔含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右〕置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示?？组g差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標(biāo)2板條〔8條共96孔〕分別參加200ul甲基橙溶液〔吸光度調(diào)至0.100A左右〕先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。3.零點(diǎn)飄移〔穩(wěn)定性觀察〕：取8只小孔杯分別置于8個通道的相應(yīng)位置，均參加200ul蒸餾水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道4小時吸光度的變化。4.精細(xì)度評價：每個通道3只小杯分別參加200ul高中低3種不同濃度的甲基橙溶解，蒸餾水調(diào)零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次〔上下午各一次〕，連續(xù)測定20天。分別計算其批精細(xì)度，日批精細(xì)度,日間精細(xì)度和總精細(xì)度及相應(yīng)的CV值。5.線性測定：用電子天平準(zhǔn)確稱取甲基橙配制5個系列的溶液，于490nm平行測8次，取其均值。計算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計誤差s，并用±1.96s表示樣品測量的誤差圍.雙波長測定評價：取一分甲基橙溶液，分別參加3種不同濃度的溶血液〔測定波長為490nm，校正波長為585nm〕，先后于8個通道檢測，每個通道測3次，比擬各組之間是否具有統(tǒng)計學(xué)差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果?！緲?biāo)本的采集和保存】1.標(biāo)本采集時應(yīng)盡量防止溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本會增加非特異性顯色造成假陽性。2.長菌的標(biāo)本同樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有源性HRP也會產(chǎn)生假陽性反響。3.抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是不使用用肝素抗凝劑。4.標(biāo)本在冰箱中保存時間過長易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天完成測試。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，融解時應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時防止氣泡?？缮舷骂嵉够旌停灰诨靹蚱魃蠌?qiáng)烈振蕩。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，如需保存作屢次檢測，宜少量分裝冰存。5.ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標(biāo)本間的污染要盡量防止，尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本?！痉治鲋匈|(zhì)控】ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果受操作影響很大，每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏，強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)工程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。1.加樣[1]加樣應(yīng)用微量移液器〔加樣槍〕按規(guī)定的量參加微孔板底部，防止加在孔壁上部，不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。[2]每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生穿插污染;干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。[3]樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反響，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時注意防止液體溢出。如后面操作步驟中加二種以上試劑時均需振蕩混勻。[4]如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。2.溫育[1]抗原抗體反響需要在一定溫度下〔37°C〕，經(jīng)過一定的時間才能到達(dá)反響的平衡點(diǎn)[2]ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。所以溫育一般采用能使反響液溫度迅速到達(dá)平衡的水浴法。水要浸至板條的1/3處。[3]反響板不宜疊放，注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定控制，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。3.洗滌[1]手工洗滌一般采用浸泡方法：1〕甩去孔反響液；2〕用洗滌液過洗一遍〔即注滿孔后即甩去〕；3〕微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動；4〕甩去孔液體，拍板，用紙吸干。重復(fù)以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。[2]洗板機(jī)洗板一定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔液體全部吸干，同時要設(shè)置一定的浸泡時間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道，防止堵孔。4.顯色[1]HRP催化底物的一步呈色反響，同樣需要一定的時間和溫度，[2]一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度〔一般為37°C，10-15分鐘〕恒定反響后終止[3]或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時間而恒定反響時間.5.酶標(biāo)儀判讀結(jié)果1.顯色反響終止后應(yīng)立刻比色〔30分鐘〕。2.常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm；TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm，二種底物的校正波長均用630nm。3.使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反響板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反響板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片?！痉治龊筚|(zhì)控】【報告方式】1.定性試驗(yàn)：國外為便于統(tǒng)一計算，一律按S/COV方式報告，S為標(biāo)本A值，COV即CutOff值〔或COV〕[1]夾心法和間接法以S/COV≥1為陽性；競爭法與中和法以S/COV﹤1為陽性[2]COV的計算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：A〕COV=2.1×N〔當(dāng)N缺乏0.05時按0.05計〕，此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。B〕COV=0.5×N，從抑止率公式換算而來，常用于競爭，中和法。C〕COV=N+C〔C為常數(shù)〕，用于間接法。D)COV=C×P+N〔C為常數(shù)〕，用于間接法。此公式最客觀，但對廠家要求很高，陰陽性對照測定值要根本恒定。2.定量分析：嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。[1]用量的系列標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以絕對量或單位表示。ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上。[2]現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度圍成直線，要得到準(zhǔn)確的結(jié)果實(shí)屬不易?！居涗洝縖1]所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)登記在冊；原始登記表應(yīng)記錄試劑來源、批號；質(zhì)控血清的來源及測定值并注明是否在控；簽上實(shí)驗(yàn)者及審核者。[2]如試驗(yàn)結(jié)果對臨床診斷有決定意義，其樣本應(yīng)保存，至少與病歷保存期一致【定性試驗(yàn)】ELISA定性試驗(yàn)的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關(guān)，因此QC要保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。生化的質(zhì)控圖方法僅能觀察靈敏度而無法監(jiān)控特異性。建議使用臨界值血清界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽性對照作為對照指示反響；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控血清，正常人血清作為外對照，與標(biāo)本同時檢測，臨界值S/C.O≥1，高值質(zhì)控血清S/C.O≥10，正常人血清A值在0.05~0.07之間。陽性質(zhì)控血清失控〔臨界值為靈敏度，高值為"HOOK"效應(yīng)監(jiān)控〕應(yīng)重做陰性標(biāo)本；陰性對照失控應(yīng)重做陽性標(biāo)本。以表格式記錄每塊板的外對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作為QC資料存檔?！径吭囼?yàn)】ELISA定量試驗(yàn)常見于腫瘤因子〔如AFP，CEA，CA系列〕，激素類，免疫球蛋白類，這些物質(zhì)在體有一定的量〔正常圍〕，超出這個量才呈病理情況，故需定量測定。定量試驗(yàn)的質(zhì)控方法可參考生化方式?！?即刻性"質(zhì)控】在開場進(jìn)展質(zhì)控時，只需要有3個質(zhì)控血清測定值即可進(jìn)展質(zhì)控。當(dāng)這組數(shù)據(jù)擴(kuò)大到20次有效值時就可以計算RCV的*，s。方法：1.先將測定值從小到大排列，*1最小，*n最大；2.計算*和s；3.計算SI上限值和下限值。SI上=〔*最小-*〕/S，SI下=〔*最大-*〕/S4.對照SI表，檢查是否出控，SI上、下限≤規(guī)定值，在控；SI上或下限>規(guī)定值，失控。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人******************日期**年**月**日Ⅵ免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)量評價的標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔EQA〕實(shí)驗(yàn)室名稱工程編號制定日期******ELISA方法********年**月**日【目的】采用一系列的方法連續(xù)地、客觀地評價各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性。?！驹揝OP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！靖靖拍睢俊举|(zhì)量控制】是監(jiān)視ELISA操作全過程，排除誤差，維持標(biāo)準(zhǔn)化操作的一個管理過程。這一過程是通過一個反響環(huán)路進(jìn)展的：1.確定控制的對象；2.規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)〔預(yù)期值〕；3.制定或選擇控制方法和手段；4.測量實(shí)際數(shù)據(jù)；5.比擬或較對實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明原因。超出預(yù)定誤差圍，報警系發(fā)出信號，反響通道中斷。6.采取行動，解決差異。恢復(fù)原狀〔原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)〕的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)展。質(zhì)控圖是把*一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計算出來的預(yù)期的"控制限"進(jìn)展比擬的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進(jìn)展時，按時間順序而抽選出來的，其目的是檢測檢驗(yàn)過程中變異的可追查性原因。可追逆性的誤差原因，是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。在GLP概念里QC即指IQC，其定義為：由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精細(xì)度，提高批批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定檢驗(yàn)報告是否可靠或可否發(fā)出的一項工作。免疫測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式?！净覅^(qū)概念】把定量分析的正常值圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將COV值上下的一段區(qū)域定為陽性可疑，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測以確定其陰陽性，如仍落在灰區(qū)圍則報告+〔陽性〕?；覅^(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要?；覅^(qū)的設(shè)置有二種：1.COV×〔1±CV〕，CV為該試劑的批CV(一般在15-20%間)；2.COV±2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室質(zhì)控ROC的s?！靖咧点^鐮效應(yīng)〔HD-HOOK〕】在二位點(diǎn)夾心ELISA中，其劑量反響曲線的高劑量〔HIGHDOSE，HD〕區(qū)段，線性走向不是呈平臺狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀〔HOOK〕，MILES〔1974〕根據(jù)此現(xiàn)象寫實(shí)性地稱之為"HD-HOOK"效應(yīng)。產(chǎn)生該現(xiàn)象的分子機(jī)理有"分子變構(gòu)說"和"濃度效應(yīng)"等推論。一步法和二步法均存在"HD-HOOK"效應(yīng)，只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰性結(jié)果?！举|(zhì)量控制血清】質(zhì)控血清是已有靶值的血清，在每次的常規(guī)檢驗(yàn)中參加一份或數(shù)份，通過所得結(jié)果來了解本次檢驗(yàn)的情況。質(zhì)控血清檢驗(yàn)的結(jié)果如能控制其誤差在一定圍，就說明該檢驗(yàn)沒有發(fā)生不允許的誤差。如果出現(xiàn)超過允許誤差圍的異常結(jié)果，提示該檢驗(yàn)不合格，應(yīng)尋找原因，糾正后，重檢待測標(biāo)本。因此質(zhì)控血清在質(zhì)控工作中起重要作用。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完局部可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開展*項檢驗(yàn)的室質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長期效價不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測作用。質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點(diǎn)上，定性測定時處于弱陽性水平，稱為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定，應(yīng)按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽性的標(biāo)準(zhǔn)。臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽性對照品和陰性對照品以外的第三個對照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽性反響的標(biāo)本不漏檢。質(zhì)控血清的制備，每個實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清〔以乙肝質(zhì)控血清為例〕。1.收集新鮮的無溶血、無黃疸、無細(xì)菌污染的陽性血清。2.56℃加熱10小時滅活。3.離心或過濾除去沉淀。4.用10%的小牛血清或正常人血清〔PBS緩沖液〕將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測標(biāo)本。5.抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆?。不可反?fù)凍融。被檢物要求檢出的水平常被認(rèn)為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗(yàn)還有其它要求，則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。6.標(biāo)定含量。20-30次測定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與定值血清比照測定。【室間質(zhì)評的方法】1.發(fā)質(zhì)控物進(jìn)展調(diào)查，這是目前國外常見的形式，采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)展檢驗(yàn)，并將結(jié)果報至組織者〔部、省臨檢中心〕。組織者通過統(tǒng)計分析，再將評價結(jié)果寄回實(shí)驗(yàn)室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打修改結(jié)果而達(dá)不到真正評價作用。這是國外室間質(zhì)評的常用形式。部臨檢中心對乙肝標(biāo)志物ELISA檢驗(yàn)的室間質(zhì)評采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)展檢驗(yàn)，并將檢驗(yàn)結(jié)果報至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計分析，將評價結(jié)果寄回各實(shí)驗(yàn)室。通過評價，各實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改良，以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種評價方式有一定缺點(diǎn)，即各實(shí)驗(yàn)室常對質(zhì)控物特殊對待，在檢驗(yàn)時選用特殊試劑盒，選派特別的技術(shù)員進(jìn)展檢驗(yàn)，有的實(shí)驗(yàn)室互相和對結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實(shí)驗(yàn)室日常工作水平。2.現(xiàn)場調(diào)查，事先不通知，臨時派出人員到各實(shí)驗(yàn)室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測一組標(biāo)本，進(jìn)展評價。這種方法可以解決實(shí)際問題，進(jìn)展現(xiàn)場指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進(jìn)展。派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展試劑調(diào)查，這種調(diào)查事先不通知，臨時派觀察員到實(shí)驗(yàn)室，指定采用常規(guī)方法，檢驗(yàn)規(guī)定的一組標(biāo)本，進(jìn)展評價?！境煽冇嬎惴椒ā?.定性試驗(yàn)：檢驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，得100分，錯誤不得分，總計實(shí)驗(yàn)室的得分。從全部參評單位的得分中求出該批質(zhì)控物平均分〔*〕和標(biāo)準(zhǔn)差〔s〕，再通過公式計算出每一個實(shí)驗(yàn)室的得分比值〔SI〕SI=〔實(shí)驗(yàn)室得分-平均分*〕/平均標(biāo)準(zhǔn)差〔s〕，SI在0.0-0.9間為良好,1.0-1.9間為優(yōu)秀,SI為負(fù)值時數(shù)值越大成績越差。2.定量試驗(yàn)：SI=〔實(shí)驗(yàn)室測定值-預(yù)期值*〕/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差s，SI越小，說明越靠近靶值，成績越好。0-1.0為優(yōu)秀,1.1-2.0為良好,>2.0為差。SI無正負(fù)之分?！举|(zhì)量改良〔QualityImprovement，QI〕】質(zhì)量改良的建議來源于三方面：1.室質(zhì)控：提示實(shí)驗(yàn)的精細(xì)度差，應(yīng)規(guī)各項操作；2.室間質(zhì)評：提示實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性差，應(yīng)改良設(shè)備的準(zhǔn)備或更換試劑；3.病人或醫(yī)生的報怨：提示實(shí)驗(yàn)的偶然誤差，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控過程是否達(dá)標(biāo)。操作人員部門主管質(zhì)量負(fù)責(zé)人******************日期**年**月**日Ⅶ免疫金標(biāo)記檢測方法標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室名稱工程編號制定日期********************年**月**日【目的】保證免疫金標(biāo)技術(shù)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性【本SOP適用圍】免疫金標(biāo)技術(shù)【該SOP變動程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。【原理】氯化金分子在復(fù)原劑作用下聚合形成金顆粒，顆粒與顆粒之間因靜電作用而相互排斥，使其保持一個比擬穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱作膠體金。利用膠體金顆粒的高電子密度及其外表能結(jié)合生物大分子(如抗體、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A等)以及具有一定顏色等特性，可用光鏡和電鏡對細(xì)胞抗原進(jìn)展定位、定性的研究?！痉椒▽W(xué)分類】1.班點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)固相膜免疫測定中液體在微孔膜中穿過流出呈穿流形式，為斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)(dotimmunogoldfiltrationassay，DIGFA)，亦有稱免疫金溶膠斑點(diǎn)法、滴金免疫測定法等。試驗(yàn)單位為三層反響盒，第一層為過濾器(濾紙層)，第二層為反響膜(NC膜或MC膜)上點(diǎn)加有特異性抗原或抗體，第三層為吸水墊料，有稱此滲濾裝置為滴金反響板。以雙抗體夾心法測dsDNA為例：試驗(yàn)中將標(biāo)本加在反響盒上，血清(標(biāo)本)透過過濾層進(jìn)入反響層，反響層上點(diǎn)有“一〞字形抗IgG(或*種人血清蛋白作為試驗(yàn)陽性對照)及“．〞形被測物相應(yīng)抗體，血清中抗原與反響層中抗體結(jié)合，其余無關(guān)蛋白等濾出膜片，參加金標(biāo)記抗體試劑，反響膜上“一〞字形及“．〞形均顯紅色為試驗(yàn)陽性，僅“一〞形顯紅色為試驗(yàn)陰性(試劑盒狀態(tài)良好)，“一〞不顯色提示試劑盒質(zhì)量不合格，需另取反響盒重做試驗(yàn)。試劑盒根本試劑成分有滴金反響板、金標(biāo)記試劑及洗滌液。2.斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)固相膜免疫測定中液體通過毛細(xì)管作用在膜上向前移行呈橫流形式，為斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)(dotimmunogoldchromatographyassay，DIGCA)。試驗(yàn)單位為一濾膜條，自上而下分有多個層次。如單克隆雙抗體法測HCG，濾膜條各區(qū)域分別為：吸水濾紙—固定有金標(biāo)二抗的MC膜—固定有抗β-HCG抗體的MC膜—金標(biāo)記抗。α-HCG玻璃纖維—吸尿玻璃纖維。試驗(yàn)中將濾膜條浸入被測尿液或滴加尿液，尿液在毛細(xì)管作用下向試紙條上端緩緩移行，尿液將金標(biāo)抗。α-HCG溶解并帶動它向前移動，結(jié)合尿中HCG至抗β-HCG抗體處形成復(fù)合物，并在抗β-HCG抗體固定處顯示膠體金特有紅色，提示試驗(yàn)陽性。尿中無HCG時，溶解的抗α-HCG至固定有金標(biāo)二抗的MC膜處顯示膠體金特有紅色(質(zhì)控線條)，提示試驗(yàn)陰性。試劑盒根本單位僅有一濾膜條，只有一步操作。3.膠體金顆粒的制備在氯化金溶液中參加不同的復(fù)原劑，可制備出不同大小的金顆粒。常采用檸檬酸、抗壞血酸和白磷。用這三種復(fù)原劑可分別制備出大、中、小三種主要膠體金顆粒。目前，有更多的實(shí)驗(yàn)室僅以檸檬酸為復(fù)原劑，在檸檬酸復(fù)原氯化金時，參加不同量的單寧酸即可獲得大小不同的金顆粒，所制備金顆粒的大小非常一致。[1]以抗壞血酸為復(fù)原劑制備10～15nm直徑的膠體金(Aul5)在一個洗凈烤干的250ml容量的三角燒瓶中，參加20ml三蒸去離子水(3DW)、lml0.1mol/LK2CO3和lml％氯化金水溶液于冰浴中混勻，立即參加lml0.7％抗壞血酸，并充分搖動至溶液呈紫紅色，加3DW至100ml，100℃水浴5min后，溶液變成紅色，放室溫冷卻待用。[2]以檸檬酸為復(fù)原劑制備8～10nm直徑的膠體金(Aul0)125ml3DW煮沸后參加1％檸檬酸7.5ml，再煮沸5min，迅速參加1.25ml％氯化金溶液，100℃水浴15min，溶液置室溫待用。[3]以檸檬酸為復(fù)原劑制備5—6nm直徑膠體金(Au6)將lml氯化金參加100ml3DW中煮沸，快速加進(jìn)2．45ml檸檬酸—單寧酸的混合液(2ml1％檸檬酸三鈉、0.45ml1％單寧酸)，繼續(xù)煮沸5min，放室溫待用。[4]白磷為復(fù)原劑制備5nm直徑的膠體金(Au5)將120ml3DW、1.5ml％氯化金和2.7ml1mol/LK2CO3，混合，緩慢攪拌中快速加進(jìn)lml白磷一乙醚溶液，室溫輕攪拌15min，100℃水浴30min后放室溫待用。膠體金制備一般需在中性pH(7.2左右)條件下進(jìn)展，也可在稍偏酸或稍偏堿的環(huán)境中進(jìn)展。制備的膠體金其大小和形狀可在電鏡下觀察確定。一般膠體金溶液呈紅葡萄酒顏色，大顆粒膠體金是紫紅色。正常情況下，膠體金溶液應(yīng)清澈而不含任何可見的沉淀或漂浮物，如溶液、試劑、瓶皿等不干凈。將造成如下結(jié)果：第一不能獲得預(yù)期大小的膠體金顆粒，第二將影響到下一步生物大分子的吸附過程和包被后膠體金的穩(wěn)定性。因此，為了獲得滿意的膠體金，應(yīng)選擇最純潔的各有關(guān)試劑和液體。如有條件，所有試劑最好經(jīng)過超過濾處理，以除去其中的分子聚合體和可能混入的雜質(zhì)塊。制備過程中所用的水以三蒸去離子水最適宜，各類器皿均應(yīng)嚴(yán)格清洗，盛膠體金的瓶皿先經(jīng)過硅化則更為理想。膠體金顆粒在吸附生物大分子之前具有一定的穩(wěn)定性，4℃可存放一周左右，如果經(jīng)超過濾和透析處理后加0.002％疊氮鈉，能保存5個月左右。4.膠體金和生物大分子的結(jié)合任何蛋白質(zhì)都能結(jié)合到膠體金顆粒外表，膠體金和蛋白質(zhì)結(jié)合后，并不影響蛋白質(zhì)的反響性。[1]生物大分子的準(zhǔn)備鹽類成分能影響膠體金的吸附能力，并使膠體金顆粒發(fā)生聚集，因此，生物大分子在包被金顆粒前，常需透析，使溶液無鹽或鹽的濃度極低，常用的透析液為0.003ml/LNaCI。[2]膠體金顆粒的包被以生物大分子包被膠體金顆粒時，首先需要確定其準(zhǔn)確用量，即蛋白質(zhì)完全包被膠體金所需蛋白質(zhì)的最小劑量。因?yàn)檫^多或過少地結(jié)合生物大分子均可使膠體金呈不穩(wěn)定狀態(tài)，它們的最正確濃度可通過如下方法獲得。制備好的膠體金以0.1mol/LK2CO3，調(diào)pH至6.2(SPA的等電點(diǎn))待與SPA結(jié)合。用一個滴定盤或一排小試管，以0.005mol/LNaCl連續(xù)稀釋50μlSPA(1mg／m1)至第十孔或第十管為止。然后，分別于每孔中參加250μ1的膠體金，5min后再參加250μ110％NaCl，lmin后震蕩試管，這時SPA濃度較低的孔中，膠體金由紅色變?yōu)樽仙?，說明SPA的量缺乏以包被膠體金。以膠體金未改變顏色，且SPA濃度最