連錢(qián)草藥材中總黃酮含量的測(cè)定

又名紅景天和銅草，被稱為活血草和銅草科。這是嘴唇科植物的活血丹龍ii（nakai）kubar干燥部位的干燥部位。具有潤(rùn)濕可洗、清熱解毒、祛瘀消腫的功效，主要治療尿、尿結(jié)石、胃、十二指腸潰瘍、黃疸性肝炎、肝結(jié)石等癥狀，以及治療膽石、跌倒、受損和四肢重建。我國(guó)連錢(qián)草資源極為豐富,除新疆、甘肅、青海、西藏以外其它各省均有連錢(qián)草分布。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了10種不同來(lái)源連錢(qián)草藥材(7種湖北產(chǎn)地連錢(qián)草,3種連錢(qián)草的混淆品種)中總黃酮的含量,并進(jìn)行了比較分析,為連錢(qián)草藥材的質(zhì)量控制提供了評(píng)價(jià)依據(jù)。1材料表面1.1儀器UV-2101PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津);CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。1.2權(quán)不是倉(cāng)化工二廠蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)0080-9705);亞硝酸鈉(分析純,太倉(cāng)化工二廠,批號(hào)20001201);三氯化鋁(分析純,中國(guó)金山區(qū)興塔美興化工廠,批號(hào)990829);氫氧化鈉(分析純,威爾昆化學(xué)試劑有限公司上海華美藥房經(jīng)銷(xiāo),批號(hào)20020130);連錢(qián)草樣品見(jiàn)表1。2方法2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.0110g,置于100mL容量瓶中,用60mL60%乙醇超聲溶解(容量瓶密塞),放冷,用60%乙醇定容,得到0.11mg·mL-1蘆丁對(duì)照品溶液。2.2超聲提取法精密稱取經(jīng)干燥的連錢(qián)草粉末約0.5g,置100mL具塞容器中,精密加60mL60%乙醇,密塞,稱重,超聲提取30min。放冷,密塞,再稱重,用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,取續(xù)濾液即得供試品溶液。3結(jié)果與討論3.1最大吸收峰的確定精密稱取蘆丁對(duì)照品5mg,置于25mL容量瓶中,加60%乙醇約15mL,超聲使其溶解,放冷,加60%乙醇至刻度,搖勻,得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2mg·mL-1)。精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液8mL,置于25mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉溶液1mL,搖勻,放置6min,加三氯化鋁試液1mL,搖勻,放置6min,再加5%的氫氧化鈉10mL,加水至刻度,搖勻,于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描,發(fā)現(xiàn)在510nm處有一最大吸收峰。精密稱取2g連錢(qián)草粗粉,置于具塞錐形瓶中,加50mL60%乙醇,超聲50min,過(guò)濾,取續(xù)濾液,不顯色,直接于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描;再取續(xù)濾液1mL,照對(duì)照品蘆丁一樣顯色后,于波長(zhǎng)200～800nm范圍內(nèi)掃描,發(fā)現(xiàn)在504nm處有一最大吸收峰。見(jiàn)圖1。3.2測(cè)定方法4。cmgml-1精密量取蘆丁對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL,置于10mL容量瓶中,分別加入60%乙醇使成7mL,精密加入5%亞硝酸鈉0.3mL,搖勻,放置6min;精密加入10%三氯化鋁0.3mL,搖勻,放置6min;加入1mol/L的氫氧化鈉2mL,用60%乙醇定容,搖勻,以不加蘆丁對(duì)照品溶液其它同法操作得到的溶液作為空白對(duì)照,在504nm處測(cè)定吸光度。求得回歸方程為:C(mg·mL-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996,n=6);蘆丁對(duì)照品在0.01～0.07mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。3.3測(cè)定吸收度的測(cè)定取蘆丁對(duì)照品溶液適量,配成高、中、低三個(gè)濃度,每個(gè)濃度3份,分別顯色后測(cè)定吸收度。結(jié)果表明,測(cè)定方法的精密度良好(表2)。3.4總黃酮及總黃酮含量的測(cè)定取對(duì)照品溶液3.0mL,進(jìn)行顯色,每隔5min測(cè)定一次吸收度,共測(cè)定至40min,計(jì)算總黃酮的平均含量為0.0297mg·mL-1,RSD=0.96%(n=9),結(jié)果表明顯色后的溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。3.5供試品溶液的制備取同一產(chǎn)地(湖北武漢)的連錢(qián)草粉末5份,每份約0.5g,精密稱定,按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5mL,顯色后測(cè)定吸收度,測(cè)得總黃酮的平均含量為56.67mg·g-1,RSD=0.68%(n=5),結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。3.6總黃酮含量測(cè)定取3批已知總黃酮含量的連錢(qián)草粉末(恩施)約0.1g,加入蘆丁對(duì)照品適量,精密稱定,按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密量取供試品溶液1mL,按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量,結(jié)果見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該測(cè)定方法準(zhǔn)確性高。3.7總黃酮含量的比較取不同產(chǎn)地的連錢(qián)草約5g,按“2.2供試品溶液配制”項(xiàng)下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5mL,按“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定不同產(chǎn)地連錢(qián)草中總黃酮的含量,結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可知,除荊州2外,湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量均高于連錢(qián)草混淆品種的總黃酮含量;7個(gè)湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量平均為64.78mg·g-1,三個(gè)混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg·g-1?？傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢(qián)草和其混淆品。兩種湖北荊州連錢(qián)草的產(chǎn)地相同,栽培方式和采收時(shí)間不同(家種,5月;野生,8月),但在7個(gè)湖北產(chǎn)地連錢(qián)草中,荊州1(92.85mg·g-1)總黃酮含量最高,而荊州2(36.35mg·g-1)最低。兩個(gè)采收時(shí)間不同(5月,9月)的湖北恩施野生連錢(qián)草中總黃酮含量也有較大差異。除武漢和丹江產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量比較接近外,其它湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量都有一定差異。這說(shuō)明栽培方式、采收時(shí)間和湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長(zhǎng)環(huán)境均影響連錢(qián)草的總黃酮含量。4合理選擇產(chǎn)地,保持總黃酮含量七種湖北產(chǎn)地連錢(qián)草的總黃酮含量差異較大。連錢(qián)草的總黃酮含量不僅與栽培方式、采收時(shí)間密切相關(guān),而且湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)連錢(qián)草的總黃酮含量也有影響。因此在選用連錢(qián)草時(shí)一