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文檔簡(jiǎn)介

核酸分子雜交（DNA/DNAorDNA/RNA）技術(shù)核酸分子雜交技術(shù)，是在1968年由華盛頓卡內(nèi)基學(xué)院（CavnegieInstituteofWashington）的RoyBritten及其同事發(fā)明的。所依據(jù)的原理是，帶有互補(bǔ)的特定核苷酸序列的單鏈DNA或RNA，當(dāng)它們混合在一起時(shí)，其相應(yīng)的同源區(qū)段將會(huì)退火形成雙鏈的結(jié)構(gòu)。

雜種核酸分子：彼此退火的核酸來(lái)自不同的生物有機(jī)體，而形成的雙鏈分子。

DNA/DNA的雜交作用，檢測(cè)特定生物有機(jī)體之間的親源關(guān)系。

DND/DNA或RNA/DNA的能力，揭示核酸片斷中某種特定基因的位置。核酸雜交常用幾種膜的性能比較硝酸纖維素膜不能滯留小于150bp的DNA片斷，不能同RNA結(jié)合。應(yīng)用1mol/L醋酸銨和0.2mol/L的NaOH緩沖液代替SSC緩沖液可改善對(duì)小片斷DNA的滯留能力。RNA變性后也能十分容易的結(jié)合到膜上。

尼龍膜或硝酸纖維素膜雜交的步驟：1.核酸印跡轉(zhuǎn)移：將核酸樣品轉(zhuǎn)移到固體支持膜上，利用的是毛細(xì)管作用。2.印跡雜交：將具有核酸印跡的濾膜同帶有標(biāo)記的DNA/RNA進(jìn)行雜交。1、薩瑟恩DNA印跡雜交根據(jù)毛細(xì)管作用的原理，使在電泳凝膠中分離的DNA片段轉(zhuǎn)移并結(jié)合在適當(dāng)?shù)臑V膜上，然后通過(guò)同標(biāo)記的單鏈DNA或RNA探針的雜交作用檢測(cè)這些被轉(zhuǎn)移的DNA片段，這種實(shí)驗(yàn)方法叫做DNA印跡雜交技術(shù)。由于它是由E.Southern于1975年首先設(shè)計(jì)出來(lái)的，故又叫SouthernDNA印跡轉(zhuǎn)移技術(shù)。

印跡轉(zhuǎn)移前的凝膠處理：分子量不同所需轉(zhuǎn)移的時(shí)間不同；浸泡在0.25M的HCL溶液中脫嘌呤，再進(jìn)行堿變性堿水解，DNA鏈斷裂單鏈（a）（b）（c）（d）（e）基因組DNADNA限制片段

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