膠體金技術(shù)的研究進(jìn)展及展望目錄膠體金的概念特征性質(zhì)膠體金-制備方法與貯存實(shí)際應(yīng)用研究進(jìn)展與展望膠體金的概念膠體金（colloidalgold），又稱(chēng)金溶膠（gold

solution），是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)，近10多年來(lái)膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。溶液中的金原子越來(lái)越多，達(dá)到了飽和就會(huì)析出納米級(jí)的小金粒子（種子），其余的金原子依附于金種子上而使其長(zhǎng)大。用不同種類(lèi)、不同劑量的還原劑，可以控制所產(chǎn)生的金顆粒的大小。膠體金免疫分析在藥物檢測(cè)、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展，并越來(lái)越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

參考文獻(xiàn)：[1]劉艷，李君蓮.免疫膠體金檢驗(yàn)技術(shù)在應(yīng)用中存在的問(wèn)題[J].新疆醫(yī)學(xué)2011,41,47~49.特征性質(zhì)膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱(chēng)膠體金膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。膠體金原因

前提機(jī)理光吸收性膠體金在可見(jiàn)光范圍內(nèi)有一單一光吸收峰，這個(gè)光吸收峰的波長(zhǎng)（λ）在510～550nm范圍內(nèi)，隨膠體金顆粒大小而變化，大顆粒膠體金的λmax偏向長(zhǎng)波長(zhǎng)，反之，小顆粒膠體金的λmin則偏于短波長(zhǎng)免疫金標(biāo)記技術(shù)膠體金標(biāo)記吸附機(jī)理還原法蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱(chēng)之為免疫金銀染色這種球形的粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的工具。(Immunogoldlabellingtechnique)膠體金-制備方法與貯存還原制備金溶膠主要還原材料：氯金酸（HAuCl4）常用還原劑：檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。因此對(duì)每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無(wú)凝集顆粒等采用化學(xué)還原法制備膠體金時(shí)，通過(guò)改變反應(yīng)體系中氯金酸與還原劑的比例（增加或減少還原劑的量）可得到所需不同直徑的金顆粒。參考文獻(xiàn)：楊玉新，葉陽(yáng)，周有祥，王小紅.四種化學(xué)還原法制備膠體金的比較研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(3)：476~482比較采用4種不同化學(xué)還原法制備出單分散性好的膠體金樣品結(jié)果表明，不同方法制備得到的膠體金的光學(xué)性質(zhì)、貯存穩(wěn)定性及其對(duì)蛋白質(zhì)的標(biāo)記能力不同。不同方法制備的膠體金樣品其外觀(guān)色澤均呈現(xiàn)紅色略帶紫色或葡萄酒紅色，可見(jiàn)光譜圖最大吸收峰波長(zhǎng)為510~525nm，膠體金粒徑在5~20之間，不同貯存條件對(duì)膠體金穩(wěn)定性有影響，其中以4℃條件下貯存的膠體金最穩(wěn)定，不同方法制備得到的膠體金對(duì)蛋白質(zhì)的最佳標(biāo)記量有影響。檸檬酸三鈉硼氫化鈉鞣酸抗壞血酸免疫膠體金技術(shù)的應(yīng)用電鏡水平的應(yīng)用膠體金免疫層析法(CIA)斑點(diǎn)金免疫滲濾法(又名滴金法)(DotimmuogofiltrationassayDIGFA)光鏡水平的應(yīng)用2.膠體金用于光鏡水平的研究,可彌補(bǔ)其他標(biāo)記物不可避免的本底過(guò)高和內(nèi)部酶活性干擾等缺點(diǎn)3.斑點(diǎn)金免疫滲濾法的基本原理仍是間接法或夾心法。試驗(yàn)方法是以硝

酸纖維素膜為載體,將試劑、標(biāo)本滴加在膜上,使抗原抗體反應(yīng)和洗滌在一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過(guò)膜的方式迅速完成1.金顆粒具有高電子密度,在電鏡下清晰可辨。金標(biāo)記技術(shù)能較好地保持組織和細(xì)胞原有細(xì)微結(jié)構(gòu),并對(duì)被測(cè)抗原或抗體進(jìn)行組織或細(xì)胞的定位觀(guān)察4.其原理是將配體(抗體或抗原)先固定于硝酸纖維素膜等微孔濾膜的某一區(qū)帶,膠體金標(biāo)記另一配體,吸附于玻璃纖維上,然后固定于硝酸纖維素膜的某一特定位置,當(dāng)干燥的硝酸纖維素膜一端浸到樣品后,由于毛細(xì)作用,樣品將沿著膜向上移動(dòng),當(dāng)移動(dòng)至膠體金標(biāo)記物處時(shí),如樣品中含有帶檢受體,則發(fā)生第一步高度特異性的免疫反應(yīng),形成的免疫復(fù)合物繼續(xù)移動(dòng)至線(xiàn)狀包被區(qū)時(shí),發(fā)生第二步高度特異性的免疫反應(yīng),形成的免疫復(fù)合物被截留在包被的線(xiàn)狀區(qū),通過(guò)標(biāo)記的膠體金而顯紅色(檢測(cè)帶),而游離標(biāo)記物則越過(guò)檢測(cè)帶,與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離。應(yīng)用：膠體金技術(shù)目前主要用于快速篩查檢測(cè)，對(duì)可疑結(jié)果要做更進(jìn)一步的檢查Colloidalgoldbasedelectrochemicalimmunoassaysforthediagnosisofacutemyocardialinfarction（基于膠體金的電化學(xué)免疫診斷為急性心肌梗死）Theperformedimmunoassays（免疫測(cè)定）aredirectedtothedeterminationofproteinmarkersforacutemyocardialinfarction（急性心肌梗死）.Thedeterminationassaysforhumanmyoglobin（肌紅蛋白）,cardiactroponincomplex（肌鈣蛋白復(fù)合物）andtheMBisoformoftheenzymecreatinekinaseare

presented.Cyclicvoltammetrymeasurementsareadoptedforthedeterminationofcolloidalgoldusedasalabelintheimmunuassays.Themeasurementsareperformedwithascreen-printedgraphiteelectrodeinasamplevolumeof50μl.Theinfluenceofdifferentdiametercolloidalgoldparticlesontheassaysensitivityisalsoinvestigated.Colloidalgoldnanoparticlemodifiedcarbonpasteinterfaceforstudiesoftumorcelladhesionandviability（膠體金納米改性碳對(duì)腫瘤細(xì)胞粘附和可行性研究的粘貼界面）Anon-toxicbiomimeticinterfaceforimmobilizationoflivingcellsandelectrochemicalexogenouseffectstudyofcellviabilitywasconstructedbymixingcolloidalgoldnanoparticlesincarbonpaste.Anewapproachtostudytheeffectsofanti-tumordrugandotherexogenousfactorsoncellviabilitywasproposed.Thenanoparticleswereefficientforpreservingtheactivityofimmobilizedlivingcellsandpreventingtheirleakagefromtheelectrodesurface.TheimmobilizedlivingAsPC-1cells(pancreaticadenocarcinomacellsderivedfromascites)exhibitedanirreversiblevoltammetricresponserelatedtotheoxidationofguanine.Thepresenceofguaninewasverifiedbyliquidchromatography–massspectrometry.ThecontentsofguanineincytoplasmofeachAsPC-1andnormalpancreaticcellweredetectedtobe370and22amol,respectively.Thecytotoxiceffectofadriamycinresultedinadecreaseinpeakcurrentofguanine.Theoptimalexogenousfactorsthataffectedcellviability,includingpH,temperatureandsaltconcentrationofelectrolyte,werejustconsistentwithcellgrowthconditionsinculture.Thissimpleandrapidmethodcouldbeappliedfortheelectrochemicalinvestigationofexogenouseffectandcharacterizationoftheviabilityoflivingcells.LevA.Dykman,VladimirA.Bogatyrev,BorisN.Khlebtsov,NikolaiG.Khlebtsov,Aproteinassaybasedon

colloidalgoldconjugateswithtrypsin,AnalyticalBiochemistry341(2005)16–21）Aproteinassaybasedoncolloidalgoldconjugateswithtrypsin（基于膠體金偶聯(lián)胰蛋白酶A蛋白檢測(cè)）

Thestandardsolparticleimmunoassay(SPIA)isbasedonabiospecificaggregationofgoldnanoparticleconjugates,followedbyconventionalspectrophotometry.HereweproposeanovelSPIAformatthatusesmicrotitrationimmunologicalplatesandanenzyme-linkedimmunosorbentassayreader.ThenovelandstandardassaysareexemplifiedbydeterminationofimmunoglobulinGbyusing15-nmcolloidalgold-proteinAconjugates.Wealsodescribeanovelsolparticle-trypsinassayusingconjugatesofgoldnanoparticleswithtrypsin.Themethodisbasedonmeasuringspectralextinctionchangescausedbytheadditionofproteintoaconjugatesolution.Thechangesintheextinctionspectraarepresumedtoberelatedtoaggrega