題型解讀本專題是新高考中必考的重難點(diǎn)之一，具有一定的難度?？疾樾问接羞x擇題和簡(jiǎn)答題兩種，要求學(xué)生具備科學(xué)思維能力，形成一定的社會(huì)責(zé)任感?？枷蚍治鰢@基因工程的基本工具及操作程序、基因工程的原理及應(yīng)用。其中對(duì)基因表達(dá)載體的構(gòu)建和PCR技術(shù)的考查均具有一定的難度，是高考區(qū)分度的體現(xiàn)之處。答題技巧題型解讀本專題是新高考中必考的重難點(diǎn)之一，具有一定的難度?？疾樾问接羞x擇題和簡(jiǎn)答題兩種，要求學(xué)生具備科學(xué)思維能力，形成一定的社會(huì)責(zé)任感?？枷蚍治鰢@基因工程的基本工具及操作程序、基因工程的原理及應(yīng)用。其中對(duì)基因表達(dá)載體的構(gòu)建和PCR技術(shù)的考查均具有一定的難度，是高考區(qū)分度的體現(xiàn)之處。答題技巧作答本專題時(shí)，需具備一定的推理能力，且具有清晰的邏輯思維。因而要求學(xué)生要多做題、多總結(jié)、多歸類，從而找到合適的解題方法。專題分析對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練單選題1．（2023·山東青島·高三期末）自然界中很少出現(xiàn)藍(lán)色的花，天然藍(lán)色花產(chǎn)生的主要原因是花瓣細(xì)胞液泡中花青素在堿性條件下顯藍(lán)色。我國(guó)科學(xué)家利用鏈霉菌的靛藍(lán)合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）構(gòu)建基因表達(dá)載體（如下圖），通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入白玫瑰中，在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中形成穩(wěn)定顯色的靛藍(lán)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．上述獲得藍(lán)色玫瑰的方案中需要轉(zhuǎn)入能調(diào)控液泡pH的基因B．將idgS基因插入Ti質(zhì)粒時(shí)使用的限制酶是SpeI和SacIC．sfp和idgS基因具有各自的啟動(dòng)子，前者調(diào)控后者的表達(dá)D．農(nóng)桿菌可將Ti質(zhì)粒上的T-DNA整合到白玫瑰染色體DNA上【答案】A【詳解】A、分析題意，用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將鏈霉菌的靛藍(lán)合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）導(dǎo)入白玫瑰后，在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中形成穩(wěn)定顯色的靛藍(lán)，所以無需轉(zhuǎn)入能調(diào)控pH的基因，A錯(cuò)誤；B、分析題圖可知，將idgS基因插入Ti質(zhì)粒時(shí)可用SpeI和SacI以避免產(chǎn)生的黏性末端環(huán)化，增加構(gòu)建成功的概率，B正確；C、分析題圖可知，sfp和idgS基因具有各自的啟動(dòng)子，sfp可激活idgS的表達(dá)，C正確；D、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，故農(nóng)桿菌可將Ti質(zhì)粒上的T—DNA整合到白玫瑰染色體DNA上，D正確。故選A。2．（2023春·江蘇徐州·高二統(tǒng)考期中）土壤農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞時(shí)，Ti質(zhì)粒上的T-DNA片段轉(zhuǎn)入植物的基因組。利用農(nóng)桿菌以Ti質(zhì)粒作為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因，下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．T-DNA片段有利于介導(dǎo)外源DNA整合到植物的染色體DNA上B．用Ca2+處理農(nóng)桿菌，以利于其侵染植物細(xì)胞C．Ti質(zhì)粒是一種環(huán)狀DNA分子，屬于細(xì)菌的擬核DNAD．目的基因應(yīng)插入T-DNA片段外，以防止破壞T-DNA【答案】A【詳解】A、Ti質(zhì)粒上的T-DNA片段能轉(zhuǎn)入植物的基因組中，因此T-DNA片段利于介導(dǎo)外源DNA整合到植物的染色體，A正確；B、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中不需要用Ca2+處理農(nóng)桿菌，應(yīng)直接利用土壤農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，B錯(cuò)誤；C、Ti質(zhì)粒是一種環(huán)狀DNA分子，是存在于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中的DNA，C錯(cuò)誤；D、在農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，需要將目的基因插入到T﹣DNA片段上，D錯(cuò)誤。故選A。3．（2023·全國(guó)·高二專題練習(xí)）限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)分別如下：—C↓AATTG—和—G↓AATTC—如圖表示某一目的基因片段與質(zhì)粒拼接形成重組質(zhì)粒的過程，相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．用限制酶EcoRⅠ切割目的基因，同時(shí)用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒B．兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì)C．限制酶能使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開D．將重組質(zhì)粒同時(shí)用2種限制酶切割會(huì)形成2種DNA片段【答案】D側(cè)都是限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，因此應(yīng)選用限制酶EcoRⅠ切割含有目的基因的外源DNA分子，質(zhì)粒中含有限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，但EcoRⅠ的切割位點(diǎn)位于標(biāo)記基因中，用其切割會(huì)破壞標(biāo)記基因，因此為保證重組質(zhì)粒表達(dá)載體的準(zhǔn)確構(gòu)建，應(yīng)選用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒，A正確；B、由題干信息給出的兩種酶的識(shí)別序列可知，兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補(bǔ)配對(duì)，B正確；C、限制酶的作用是使特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，并具有專一性，C正確；D、將重組質(zhì)粒同時(shí)用2種限制酶切割，標(biāo)記基因和目的基因中的EcoRⅠ酶切割位點(diǎn)能被斷開，則會(huì)形成3種DNA片段，D錯(cuò)誤。故選D。4．（2023春·江蘇徐州·高二統(tǒng)考期中）下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．本實(shí)驗(yàn)不可用豬血細(xì)胞作為提取DNA的材料B．在2mol·L-1NaC1溶液中，DNA溶解度較大C．可利用DNA溶于冷酒精的性質(zhì)進(jìn)一步純化DNAD．二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定效果【答案】C【詳解】A、該實(shí)驗(yàn)中材料選擇的原則是DNA含量多，材料易得，操作簡(jiǎn)便，因此雞血細(xì)胞是較理想的實(shí)驗(yàn)材料，豬是哺乳動(dòng)物，哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核以及眾多的細(xì)胞器，故本實(shí)驗(yàn)不可用豬血細(xì)胞作為提取DNA的材料，A正確；B、在2mol·L-1NaCl溶液中，DNA溶解度較大，B正確；C、DNA不溶于酒精，C錯(cuò)誤；D、二苯胺試劑不穩(wěn)定，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定效果，D正確。故選C。5．（2023春·高二課時(shí)練習(xí)）下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的說法，錯(cuò)誤的是（

）A．蛋白質(zhì)工程以基因工程為基礎(chǔ)，屬于第二代基因工程B．蛋白質(zhì)工程是根據(jù)蛋白質(zhì)功能的特定需求，利用酶的專一性對(duì)蛋白質(zhì)的氨基酸序列直接改造C．蛋白質(zhì)工程常用到基因的定點(diǎn)突變技術(shù)從分子水平進(jìn)行堿基的替換D．蛋白質(zhì)工程難度很大的主要原因是蛋白質(zhì)的功能必須依賴復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)【答案】B【詳解】A、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求，它可以根據(jù)人的需求來設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，又稱為第二代的基因工程，A正確；B、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，B錯(cuò)誤；C、蛋白質(zhì)工程常用到基因的定點(diǎn)突變技術(shù)從分子水平進(jìn)行堿基的替換，進(jìn)行基因修飾或基因合成，C正確；D、蛋白質(zhì)工程實(shí)施的難度很大，原因是蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，而且蛋白質(zhì)的功能也具有多樣性，D正確。故選B。6．（2022春·浙江臺(tái)州·高二統(tǒng)考期末）蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸。下列有關(guān)蛋白質(zhì)工程的敘述，正確的是（

）A．不遵循中心法則B．在分子水平上直接對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造C．生產(chǎn)的蛋白質(zhì)能在自然界中找到D．需要限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶【答案】D【詳解】A、蛋白質(zhì)工程最終也是基因控制蛋白質(zhì)的合成，遵循中心法則，A錯(cuò)誤；B、在分子水平上對(duì)基因進(jìn)行改造，從而獲得特定的蛋白質(zhì)，B錯(cuò)誤；C、生產(chǎn)的蛋白質(zhì)能在自然界中找不到，因此才采用蛋白質(zhì)工程進(jìn)行合成，C錯(cuò)誤；D、蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，需要構(gòu)建表達(dá)載體，需要限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶，D正確。故選D。7．（2022·江蘇南通·統(tǒng)考二模）在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中如實(shí)記錄并分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象是十分重要的。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．驗(yàn)證酵母菌無氧呼吸產(chǎn)物實(shí)驗(yàn)中，加入酸性重鉻酸鉀后溶液呈灰綠色，最可能是葡萄糖未耗盡B．觀察紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)中，視野中出現(xiàn)無色細(xì)胞，可能是細(xì)胞被破壞C．蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中，加入雙縮脲試劑后溶液呈藍(lán)色，可能是加入的CuSO4，溶液過量引起的D．DNA鑒定實(shí)驗(yàn)中，向溶有絲狀物的NaCl溶液中加入二苯胺試劑未變藍(lán)色，可能是未沸水浴【答案】A【詳解】A、酒精與酸性重鉻酸鉀溶液反應(yīng)呈灰綠色，酵母菌在無氧條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，將酸性重鉻酸鉀溶液注入培養(yǎng)液中，呈灰綠色，說明酵母菌無氧呼吸會(huì)產(chǎn)生酒精，A錯(cuò)誤；B、觀察紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)中，視野中出現(xiàn)無色細(xì)胞，可能是細(xì)胞被破壞，液泡中的色素被釋放出來，細(xì)胞無色，B正確；C、蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中，若加入的CuSO4過多，溶液會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，C正確；D、DNA鑒定實(shí)驗(yàn)中，向溶有絲狀物的NaCl溶液中加入二苯胺試劑，需要沸水浴才能呈現(xiàn)藍(lán)色，D正確。故選A。8．（2022春·江蘇徐州·高二統(tǒng)考期中）基因疫苗是將編碼外源性抗原的基因插入到質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。下列敘述正確的是（

）A．接種基因疫苗只能預(yù)防特定微生物的感染B．疫苗經(jīng)注射進(jìn)入人體后，可被人體的漿細(xì)胞識(shí)別C．利用蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)的蛋白質(zhì)疫苗就是基因疫苗D．基因疫苗是指機(jī)體能識(shí)別特定的基因，從而引起機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)【答案】A【詳解】A、基因疫苗發(fā)揮作用是促使機(jī)體產(chǎn)生抗體，作用于相應(yīng)的抗原，這是屬于特異性免疫，因此接種基因疫苗只能預(yù)防特定微生物的感染，A正確；B、漿細(xì)胞無識(shí)別抗原的功能，B錯(cuò)誤；C、結(jié)合題意“基因疫苗是將編碼外源性抗原的基因插入到質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白”可知，基因疫苗是通過基因工程生產(chǎn)的，利用蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)的蛋白質(zhì)疫苗不是基因疫苗，C錯(cuò)誤；D、基因疫苗是將編碼外源性抗原的基因插入到質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，D錯(cuò)誤。故選A。9．（2022春·山東日照·高二校聯(lián)考期中）菊花是一種雙子葉植物，易感桃蚜。雪花蓮凝集素基因GNA的表達(dá)產(chǎn)物能有效抑制桃蚜生長(zhǎng)。下圖為利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法培育轉(zhuǎn)GNA基因菊花的示意圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．過程①需將GNA基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA中B．過程②用Ca2+處理農(nóng)桿菌使其處于能吸收GNA基因的生理狀態(tài)C．若PCR檢測(cè)到圖示植株含有GNA基因，說明其已具有桃蚜抗性D．圖示Ti質(zhì)粒都是經(jīng)過改造的，其標(biāo)記基因可用于重組Ti質(zhì)粒的篩選【答案】C【詳解】A、過程①是構(gòu)建基因表達(dá)載體，需要將GNA基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA中，A正確；B、過程②用Ca2+處理農(nóng)桿菌使其處于能吸收GNA基因的生理狀態(tài)，即感受態(tài)，B正確；C、若PCR檢測(cè)到圖示植株含有GNA基因，但不能確定該基因是否能成功表達(dá)，所以不能說明其已具有桃蚜抗性，C錯(cuò)誤；D、Ti質(zhì)粒都是經(jīng)過改造的，其標(biāo)記基因（通常是抗生素抗性基因）可用于重組Ti質(zhì)粒的篩選，D正確。故選C。10．（2021春·新疆巴音郭楞·高二校聯(lián)考期中）PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA，需要的條件是（

）①目的基因

②引物

③四種脫氧核苷酸

④熱穩(wěn)定DNA聚合酶

⑤mRNA

⑥核糖體A．①②③④ B．②③④⑤ C．①③④⑤ D．①②③⑥【答案】A【詳解】①PCR技術(shù)需要以目的基因?yàn)槟０?，①正確；②PCR技術(shù)需要一對(duì)引物，②正確；③四種脫氧核苷酸作為合成DNA的原料，③正確；④PCR技術(shù)是在高溫條件下進(jìn)行的，因此需要耐高溫的DNA聚合酶（即熱穩(wěn)定DNA聚合酶）等，④正確；⑤PCR技術(shù)是體外擴(kuò)增DNA的，不需要mRNA，⑤錯(cuò)誤；⑥PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，不需要核糖體，核糖體是翻譯的場(chǎng)所，⑥錯(cuò)誤。故選A。多選題1．（2023·高二課時(shí)練習(xí)）下列與“分子手術(shù)刀”有關(guān)的敘述正確的是（

）A．形成的黏性末端讀取的順序是從5’往3’讀B．一個(gè)限制酶切割一次斷兩個(gè)磷酸二酯鍵形成2個(gè)黏性末端或平末端C．同一種限制酶切割形成的黏性末端不同D．兩個(gè)黏性末端有1個(gè)游離的磷酸基團(tuán)【答案】AB【詳解】A、限制酶切割后在DNA切口處產(chǎn)生黏性末端，限制酶識(shí)別堿基序列是從5′往3′讀，形成的黏性末端讀取的順序也是從5′往3′讀，A正確；B、一個(gè)限制酶切割一次，使DNA雙鏈斷開，會(huì)有兩個(gè)磷酸二酯鍵斷裂，形成2個(gè)黏性末端或平末端，B正確；C、同一種限制酶切割形成的黏性末端相同，C錯(cuò)誤；D、兩個(gè)黏性末端有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，D錯(cuò)誤。故選AB。2．（2022秋·山東濟(jì)南·高三統(tǒng)考開學(xué)考試）金黃色葡萄球菌具有對(duì)磺胺類藥物敏感性低，對(duì)青霉素，紅霉素等敏感度高和高度耐鹽化等特性。菌株可在血瓊脂平板（完全培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長(zhǎng)，并能產(chǎn)生溶血毒素（可使紅細(xì)胞完全溶解），血漿凝固酶（可使血液中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固）等物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因可編碼新的青霉素結(jié)合蛋白2a（PBP2a），該蛋白對(duì)青霉素類抗菌藥物親和力低，繼而對(duì)青霉素產(chǎn)生了一定的抗藥性。下列說法正確的是（

）A．在金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)過程中，須在選擇培養(yǎng)基中加入10%-15%的NaCl、青霉素B．培養(yǎng)在血瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色的溶血圈C．當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體后，其產(chǎn)生的血漿凝固酶可能會(huì)阻礙部分免疫細(xì)胞的吞噬作用D．可利用DNA分子雜交技術(shù)或PCR技術(shù)檢測(cè)mecA基因，從而檢測(cè)篩選出MRSA【答案】CD【詳解】A、金黃色葡萄球菌具有對(duì)磺胺類藥物敏感性低，對(duì)青霉素、紅霉素等敏感度高和高度耐鹽化等特性，故在金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)過程中，須在選擇培養(yǎng)基中加入10%-15%的NaCl、磺胺類藥物，不能加青霉素、紅霉素等，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)在血瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明的溶血圈，B錯(cuò)誤；C、血漿凝固酶可使血液中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體后，其產(chǎn)生的血漿凝固酶可能會(huì)阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用，C正確；D、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因可編碼新的青霉素結(jié)合蛋白2a，故可利用DNA分子雜交技術(shù)或PCR技術(shù)檢測(cè)mecA基因，從而檢測(cè)篩選出MRSA，D正確。故選CD。綜合題1．（2023·山西·校聯(lián)考模擬預(yù)測(cè)）研究表明來源于大腸桿菌的蘇氨酸輸出蛋白（由rhtA基因編碼）能夠識(shí)別5-氨基乙酰丙酸，并將其輸出至細(xì)胞外。為探究蘇氨酸輸出蛋白對(duì)5-氨基丙酸合成的影響，研究人員從大腸桿菌的基因組DNA中擴(kuò)增出rhtA基因，并構(gòu)建出相應(yīng)的重組質(zhì)粒，獲得轉(zhuǎn)rhtA基因的工程菌，其基本操作流程如圖所示，已知引物A、B的序列分別是：5'AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG3'、5'GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC3'?；卮鹣铝袉栴}：(1)由圖可知，獲取大量rhtA基因要經(jīng)PCR技術(shù)擴(kuò)增，若要擴(kuò)增出N個(gè)rhtA基因，需要引物A、B各___________個(gè)，對(duì)引物A的設(shè)計(jì)要求是__________（答出2點(diǎn)即可）﹔通過過程①得到重組質(zhì)粒，需選用的兩種限制酶是__________，兩者起作用部位的化學(xué)鍵是____________。(2)過程②⑤在操作時(shí)，一般需用鈣離子處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種____________的生理狀態(tài)。過程③將大腸桿菌體內(nèi)的質(zhì)粒提取出來進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，以EeoRI切割pEC-XK99E質(zhì)粒為對(duì)照，分別對(duì)重組質(zhì)粒用EcoRⅠ單酶切、以（1）選用的雙酶對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，然后用電泳技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示，若2是對(duì)照，則3、4分別是單酶切、雙酶切的結(jié)果，做出此推測(cè)的依據(jù)是__________。(3)將正確的質(zhì)粒導(dǎo)入A19后，后續(xù)的步驟是___________。本技術(shù)選用微生物大腸桿菌作為受體細(xì)胞，而不選用動(dòng)物細(xì)胞，理由是___________（答出一點(diǎn)即可）?！敬鸢浮?1)N-1不能自身成環(huán)、不能與引物B互補(bǔ)配對(duì)、長(zhǎng)度要適中EcoRⅠ和HindI磷酸二酯鍵(2)感受態(tài)細(xì)胞用EcoRⅠ單酶切對(duì)照和重組質(zhì)粒，均使質(zhì)粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因?yàn)?多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個(gè)DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同(3)目的基因的檢測(cè)與鑒定微生物繁殖速度快，可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量基因表達(dá)的產(chǎn)物（或rhtA基因取自大腸桿菌，該基因在真核細(xì)胞中可能難以表達(dá)）【詳解】（1）由圖可知，獲取大量rhtA基因要經(jīng)PCR技術(shù)擴(kuò)增，若要擴(kuò)增出N個(gè)rhtA基因，需要引物A、B各N-1個(gè)，理由是經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得N個(gè)rhtA基因，其中只有最初的兩條模板鏈不需要引物，則引物的數(shù)量是2N-2個(gè)，引物有A、B兩種，因此各需要N-1個(gè)。引物A要與rhtA基因的相應(yīng)的部位互補(bǔ)配對(duì)，因而其自身不能成環(huán)，也不能與引物B互補(bǔ)配對(duì)，為了防止出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增片段，其長(zhǎng)度不能過短。通過過程①得到重組質(zhì)粒，需選用的兩種限制酶是EcoRI和HindI，理由是引物A含EcoRI的識(shí)別序列，引物B含HindI的識(shí)別序列，經(jīng)PCR擴(kuò)增后形成的rhtA基因的兩端分別可被EcoRI和HindI切割，而pEC-XK99E質(zhì)粒上也有相應(yīng)的識(shí)別序列。限制酶起作用部位是相鄰核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（2）過程②⑤在操作時(shí)，需將大腸桿菌處理成感受態(tài)細(xì)胞。若2是對(duì)照，則3、4分別是單酶切、雙酶切的結(jié)果，理由是用EcoRI單酶切對(duì)照和重組質(zhì)粒，均使質(zhì)粒成為線形，2的DNA條帶略比3小，是因?yàn)?多了一段rhtA基因序列，4被雙酶切后形成兩個(gè)DNA片段，此兩段DNA的大小相加剛好與3基本相同。（3）將正確的質(zhì)粒導(dǎo)入Al9后，后續(xù)的步驟是目的基因的檢測(cè)與鑒定。本技術(shù)選用微生物大腸桿菌作為受體細(xì)胞，而不選用動(dòng)物細(xì)胞，理由是微生物繁殖速度快，可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量基因表達(dá)的產(chǎn)物（或rhtA基因取自大腸桿菌，該基因在真核細(xì)胞中可能難以表達(dá)）。2．（2023·廣西·三模）某研究團(tuán)隊(duì)從沙漠野生檉柳中克隆出了一個(gè)耐鹽堿基因TcSR1。該團(tuán)隊(duì)用限制酶BalⅡ切割目的基因TcSR1，用限制酶BamHⅠ切割質(zhì)粒載體V3，兩種限制酶的識(shí)