成績(jī)：1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.1熟悉對(duì)禽的病理解剖1.2掌握對(duì)病變的觀察1.3雞胚的病毒液接種1.4掌握HA和HI實(shí)驗(yàn)操作過程和技術(shù)2家禽解剖2.1放血、宰殺后，用消毒藥進(jìn)行浸泡。2.2腿內(nèi)側(cè)剪開，用力將股骨外翻，將雞平放在解剖托盤內(nèi)。2.3病雞精神沉郁，鼻有分泌液，常甩頭，無下痢。腹腔，肝臟出血腫脹，腸道出血，胰腺、腎臟、法氏囊、盲腸扁桃體等有無病變或異常，剪開腺胃和肌胃，觀察腺胃乳頭和肌胃角質(zhì)膜下無出血。將龍骨突用力上翻，觀察肺臟、支氣管等，外觀沒有病變，沿食道、氣管剪開，發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)有大量出血點(diǎn)。3實(shí)驗(yàn)原診療3.1接種物準(zhǔn)備3.1.1將肺臟、脾臟、腎臟、肝臟、心臟、支氣管等臟器物小許，放入滅菌缽中。加入少量石英砂，進(jìn)行研磨，邊研磨邊加入PBS進(jìn)行稀釋。3.1.2抽取組織液裝入離心管3000r/min，離心53.1.3用注射器抽取離心上清液，裝上細(xì)菌過濾器，將組織液過濾到滅菌離心管中。3.2胚蛋接種3.2.1將胚蛋在經(jīng)照蛋器照蛋，避開氣室和血管，用鉛筆進(jìn)行標(biāo)注。3.2.2打孔。3.2.3每個(gè)雞胚接種0.2mL組織液。3.2.4用蠟燭進(jìn)行封口。寄存2天。3.3雞胚接種成果兩天后打開雞胚氣室和尿囊膜，胚內(nèi)液體清亮。4血凝（HA）實(shí)驗(yàn)4.1材料準(zhǔn)備4.1.196孔V型微量反映板、微量移液器（配有滴頭）4.1.2阿氏液、1%雞紅細(xì)胞懸液。4.1.34.2血凝（HA）實(shí)驗(yàn)4.2.1在微量反映板的1孔~12孔均加入0.025mlPBS，換滴頭。4.2.2吸取0.025ml病毒懸液加入第1孔，混勻。4.2.3從第1孔吸取0.025ml病毒液加入第2孔，混勻后吸取0.025ml病毒液加入第3孔，如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第11孔，從第11孔吸取0.025ml棄之，換滴頭。4.2.4每孔加入0.025ml體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充足搖勻后加入）4.2.5震蕩混勻，在室溫（20℃~25℃）下靜置40min后觀察成果（如果溫度太高，可置4.3成果鑒定將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌，完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)代表一種血凝單位（HAU）.4.4實(shí)驗(yàn)成果孔號(hào)123456789101112血清稀釋度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:10241:2048對(duì)照成果------------從成果能夠看出，該病毒的不能血凝。5實(shí)驗(yàn)成果通過血凝實(shí)驗(yàn)和血凝克制實(shí)驗(yàn)的血凝價(jià)等因素能夠鑒定該雞感染的病毒沒有血凝效應(yīng)，懷疑傳染性支氣管炎。6.PCR實(shí)驗(yàn)：6.1PCR試劑準(zhǔn)備DNA模板、對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物、10*PCRBuffer、Tap酶、2mMdNTPmix:dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM6.2操作環(huán)節(jié)在冰浴中，按下列次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。10*PCRbuffer5μLdNTPmix（2mM）4μL引物1（10pM）2μL引物2（10pM）2μLTap酶（2U/μL）1μLDNA模板(50ng-μg/μl)1μL加ddH2O至50μL視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。調(diào)節(jié)好反映程序。將上述混合液稍加離心，立刻置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。普通：在93°C預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93°C40s→58°C30s→72°C60s，循環(huán)30-35次，最后在72°C保溫7min。結(jié)束反映，PCR產(chǎn)物放置于4°C待電泳檢測(cè)或-20°C長久保存。PCR的電泳檢測(cè)：如在反映管中加有石蠟油，需要100μL氯仿進(jìn)行抽提反映混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μL電泳檢測(cè)。6.3PCR成果PCR成果顯示該病毒為傳染性支氣管炎病毒。7體會(huì)1．通過本次實(shí)驗(yàn)，更進(jìn)一步熟悉并掌握了血凝實(shí)驗(yàn)和血凝克制實(shí)驗(yàn)的基本原理和具體操作環(huán)節(jié)，以及對(duì)血凝和血凝克制實(shí)驗(yàn)成果的鑒定，同時(shí)大致掌握了如何對(duì)病死雞所感染病毒的鑒定。2.通過該綜合實(shí)習(xí)，我們從攻毒到病雞的剖檢，再根據(jù)剖檢癥狀基本上鑒定是什么病毒或細(xì)菌的感染，繼而選擇多個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)辦法，鑒定病原。熟悉了禽病學(xué)常見的病理檢查和常見的血清學(xué)檢測(cè)辦法，在操作過程中的實(shí)際操作讓自己更加的聯(lián)系到了課本理論知識(shí)，達(dá)成了真正的學(xué)以致用之目的。3.在實(shí)驗(yàn)過程中進(jìn)一步熟悉了對(duì)禽類的病理解剖和觀察鑒別以及實(shí)驗(yàn)室常見的診療辦法要領(lǐng)，在實(shí)驗(yàn)中更緊密的聯(lián)系到了理論知識(shí)，使自己在掌握實(shí)踐操作的同時(shí)更進(jìn)一步理解了其理論知識(shí)。4.在本次實(shí)驗(yàn)中還是發(fā)現(xiàn)了自己存在某些局限性，操作能力和操作辦法不夠恰當(dāng)和純熟，在后來的實(shí)踐操作中藥更加的重視動(dòng)手能力和分析實(shí)際問題，從而解決實(shí)際問題。指導(dǎo)老師評(píng)語及成績(jī)：