外泌體研究策略目錄、外泌體概述二、外泌研究興起外泌體基礎(chǔ)研究技術(shù)四、外泌體研究策略基本邏輯五、外泌體研究實(shí)例外泌體概述Exosome是直徑約為30-150nm,密度在1.13-1.21日/m1的小囊泡。Exosome天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,外泌體(Eσsome)是活細(xì)胞分泌的來源于晩期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體)的膜性囊泡AK150101Rabs57RabGDISyritenin2RhoGDsRAP18TrapaniTanAAdvanceddrugdeliveryeviews,2019,65(3):357-367外泌體研究的興起15腫擅轉(zhuǎn)移血管相關(guān)(再生、損傷)藥物送免相興骨損傷、修復(fù)病毒/細(xì)菌/寄生蟲感染肌相關(guān)(肥厚、梗死及其并發(fā)癥)化療相關(guān)(抵抗、其他并發(fā)癥)一(腫)耐藥子病/妊識(shí)別/胎兒染色體異常生物標(biāo)志物榜尿病及其并發(fā)癥汁微環(huán)牙周再坐外泌體檢測技術(shù)2018外泌體中標(biāo)項(xiàng)目研究的主要癌癥種類10mIRNA/小RNAncRNA狀2018外泌體中標(biāo)項(xiàng)目機(jī)制研究涉及的主要非編碼RNA種類間充質(zhì)干癌細(xì)胞血清/血漿巨噬細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞其他干細(xì)胞尿液2018外泌體中標(biāo)項(xiàng)目的主要外泌體來源外泌體研究基礎(chǔ)技術(shù)1、外泌體分離1)超速離心2)磁珠免疫捕獲3)沉淀或過濾法,2、外泌體鑒定與定量1)鑒定:電鏡或NTA來分析其大小和形態(tài),流式細(xì)胞儀或WB檢測表面標(biāo)記蛋白esternblot和ELSA檢測TSG101、CD632)定量:NA檢測外泌體數(shù)量,BCA定量檢測蛋白濃度3、外泌體功能研究1)熒光標(biāo)記外泌體檢測外泌體進(jìn)入細(xì)胞2)常規(guī)實(shí)驗(yàn):外泌體處理細(xì)胞檢測功能3)wB/qPCR/熒光標(biāo)記技術(shù)檢測外泌體中發(fā)揮關(guān)鍵作用的生物分子在受體細(xì)胞胞核、胞質(zhì)以及外泌體中的表達(dá)外泌體研究策略基本邏輯外泌體研究的本質(zhì):供體細(xì)胞對(duì)受體細(xì)胞的功能影響,通過外泌這個(gè)介質(zhì)發(fā)揮作用aspanin(CD9,CD63,CD81CytoskeletonproteinsmRNA,MIRNA,LncRNANucleusNucleus99POaMVB④④●(c)EndocytosisJournalofHematologyOncologyDecember2019,8:83外泌體研究基本路線圖相互作用的受/供體細(xì)胞的選擇供體細(xì)胞外泌體分離和鑒定外泌體對(duì)受體細(xì)胞功能的影響外泌體能夠影響受體細(xì)胞功能的因素:細(xì)胞因子、mRNAncRNA、mRNA、circinAl以及其他外泌體研究整體研究策略1、通常來說只要是涉及到兩種不同細(xì)胞甚至同種細(xì)胞的兩種不同狀態(tài):癌與正常細(xì)胞(癌轉(zhuǎn)化與抑制)、干細(xì)胞與高分化細(xì)胞損傷與修復(fù))以及功能狀態(tài)細(xì)胞與非激活狀態(tài)細(xì)胞,就可以設(shè)計(jì)外泌體研究方案。2、外泌體研究關(guān)鍵點(diǎn)參與外泌功能的關(guān)鍵生物分子一一細(xì)胞因子mRNA、IncANA、mRNA、cirCRNA以及其他。3、外泌體設(shè)計(jì)基本