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磁珠法_核酸提取的新篇章洛陽惠爾納米科技狄光輝136838424180:625006192核酸提取方法進展核酸抽提是下游核酸檢測、研究或產(chǎn)品開發(fā)的起點,所分離的核酸的質(zhì)量和完整性直接影響研究或診斷結(jié)果,因此核酸抽提是分子生物學(xué)最關(guān)鍵的方法之一。?成功的核酸分離純化需要四個重要步驟:組織或細(xì)胞的破碎和裂解,核蛋白復(fù)合體的變性,核酸酶的滅活以及污染物的去除。f
酚-氯仿抽提法傳統(tǒng)核酸提取方法城抽提法(1AB抽提法、纖維素膜層析法核酸固相抽提法市場上大多數(shù)商業(yè)核酸抽提試別盒采用固相抽提法。相對于傳統(tǒng)方法,固相抽提更快速和高效。它解決了許多液一液抽提存在的諸多問題,如分離不完全等。固相抽提方法的支持物主要有硅膠、玻璃顆粒、陰離子交換樹脂、嵫性顆粒。固相抽提包括細(xì)胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脫四個關(guān)鍵性的步驟。首先,基于城裂解法使細(xì)胞膜破裂,以及組蛋白變性,釋放核酸。然后,將經(jīng)裂解液處理的樣本轉(zhuǎn)移到固相支持物上,在結(jié)合液的幫助下靶核酸被吸附到支持物上。備白質(zhì)等其他化合物也可與支持物表面發(fā)生結(jié)合,但通過目的性洗滌過程可以被除掉。!最后,以TE緩沖液或蒸餾水將純凈的靶核酸從支持物上釋放下來。HjO卜OM*卜O*1*?OH*CaHonONAf>Na*0*P-O-QNu*O-P-OO^SwmQNa*O-r-OONo*0-F-06離心柱法提取DNA集液管純化柱硅膠濾膜Elute磁珠法提取DNALow1<trevirusinsamplewas4eluteSamplelysnbufferMPVAMagnebcbtads/製解11結(jié)合使核酸.加入磁珠,游離出4使核酸與1來11其結(jié)合」EiubonbuftrPureWasnbufferPDuodrI?洗滌洗去殘留雜質(zhì)統(tǒng)磁得柃酸離,高核液分珠到度容從分溶酸中到核珠出將磁離液比較(以全血為例)樣本星洗脫液星OD260/280濃度離備去200-400pl100pl1.7-L93-10pl賺法150-200pl100pl1,7-L930-70pl離心柱法產(chǎn)品效果圍磁珠法產(chǎn)品效篆困L離心柱法磁珠法i適用范圍新鮮血液或遼抗凝別(EDTA.檸樟酸)處埋同前———P▲的備泳血液操作環(huán)境室溫環(huán)境進行室溫環(huán)境進行裂解原理城裂解法改良的城裂解法吸附核酸硅膠濾嗅包被活性基團的磁珠離心需多次離心不需離心,依靠磁分離純度較高,可直接用于PCR、酶i刀、Sourtheii等下游實驗較高,可直接用于PCR、酶切、Sourthai等下游實驗產(chǎn)量較低較高提不能進行自動化提取能夠和核醆自動提合實現(xiàn)自動用時50-60min30-40xiwi價格較低略高主要廠家羅氏,百泰克,天根,生工Thenno,羅氏,ABI,gene-mag,惠爾核酸自動化抽提系統(tǒng)自動化抽提系統(tǒng)是可高通量地處理樣品、有助于簡化分離步驟的一種大型、復(fù)雜的儀器橾作系統(tǒng)。自動化提取的優(yōu)點有:減少人為工作時間,降低人力成本、增加工作者的安全性以及提高結(jié)果的可重復(fù)性和質(zhì)量。洗脫磁珠洗滌液n洗滌液n洗滌液I裂解洗脫磁珠洗滌液n洗滌液n洗滌液I裂解ABCDEFGH生物磁珠的介紹磁珠法核酸提取的核心是生物磁珠,是一種新型的功能化固體載體,其表面包被有活性基團,可與多種生物活性物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián),兼具有液體的流動性和固體磁性材料等特點a生物磁珠按功能集團分類及應(yīng)用領(lǐng)域硅基磁珠1、一種是針對含有常規(guī)童核醆的蛘本進行提取》如動植物、種子、細(xì)菌、質(zhì)粒等:2、一種是針對含有痕量核酸的樣本進什提取a如血清病毒游離、法醫(yī)樣本等。氬基廉珠經(jīng)活化以后,可以偶聯(lián)上抗體,作為兔疫磁硃使用。,-J羧基瑾珠烴活化后,可以偶聯(lián)上抗體,作為兔疫磁珠使用。此產(chǎn)品主要應(yīng)用于核酸提取免疫檢測、免疫診斷先疫檢測、兔疫診斷生物磁珠的制備方法Fe3O4^性微球畦基嵫珠氨基城基磁珠?Fe3Ou飆性微球參娃基〈硅羥基)?氬基/羧基全血試劑盒臨床疾病診斷:人類的很多疾病和基因密切相關(guān),白血病、地中海貧血、腎衰褐等都能用基因技木進行分型檢測,再尋找合適的供體進行移植治療:葉酸代謝能力基因檢測:DNA親子鑒定:胎兒性別檢測動物疾病檢測:布魯菌?。╞rucellosis,布?。?,也稱波狀熱,是布魯菌引起的急性或惰性傳染病,人畜共患病??茖W(xué)研究:醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。應(yīng)用行業(yè):各級各類醫(yī)療機構(gòu)、疾病預(yù)防控制中心、血站、大學(xué)及研究所、獸醫(yī)站等。病毒試劑盒能夠從血清、血漿等多種病毒樣品中(如HBV、HPV、HCV),
高效提取和分離病毒總DNA或RNA,也可適用于組織細(xì)胞或分泌物樣本中的病毒總核酸,提取產(chǎn)物可以直接用于下游應(yīng)用,如熒光定量PCR或定量逆轉(zhuǎn)錄PCR等。1.生物磁珠具有小尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng),可高效核酸提取,滿足微量生物樣本核酸提取的要求。i2.不使用酚、氣仿、異戊醇等有毒試劑,安全無毒,綠
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