一培訓(xùn)目的二培訓(xùn)準(zhǔn)備1一培訓(xùn)目的二培訓(xùn)準(zhǔn)備1、儀器設(shè)備 Agilent7820進樣口填充柱進樣口(PPIP)；毛細柱進樣口檢測器：FID；TCD；uECD;色譜柱：P/N19091J-HP-5毛細柱（ALS）進樣體積：1ul。２、氣體準(zhǔn)備FID，NPDH2(99.9995%)，干燥無油壓縮空氣。N2(99.9995%)He(99.9995%)或高載氣,N2(99.9995%)He(99.9995%) 化學(xué)工作基本操 化學(xué)工作基本操作步驟(一)、開2WindowsXP37820GC(二)配置EZChrom軟1、雙擊桌面的“EZChromElite”圖標(biāo)（或點擊屏幕左下角“開始”，選擇“程序”，選擇“色譜”，選擇“EZChromElite”，進入軟件2、從“文件”菜單選擇“新建”“儀器在工作站內(nèi)配置一臺新的儀器3、界面會跳出一個窗口，寫入合適的名稱，如GC7820-1，然后選擇配置4、配置界面，點4、配置界面，點擊選項5、雙擊右側(cè)已配置的模6、輸入GC名稱，如7820-1；IP地址，72，再點擊獲GC配置，直到顯示已成功連接到GC-配置可用7、點擊配置，先設(shè)7、點擊配置，先設(shè)定其它，選擇壓力單位：psi；輸入柱子的最大耐高溫：如325℃（19091J- 柱。若閥用于進樣，在閥類型區(qū)域選擇閥號，并選擇類型“（儀器上有幾個閥就選幾個與時間表配合使用進行閥進樣。點擊“確定”退出配置錄選擇色譜1畫面，點擊“向目錄添加色譜柱”19091J-413。然后點擊確定”鈕，則該柱被加到目錄中，并選中它，點擊“確定”。19091J-413。然后點擊確定”鈕，則該柱被加到目錄中，并選中它，點擊“確定”。的10、自動進樣器設(shè)定，輸入注射器的體積，如“10ul”；若無ALS,則無此內(nèi)容選擇溶劑清洗模式：如A，B。（三）數(shù)據(jù)（三）數(shù)據(jù)采集方法編輯在EZChromElite軟件安裝和操作系統(tǒng)重新啟動之前，不要將USB許可證密鑰插入電腦。1、進入EZChromElite工作站，選中GC78202、點擊儀器設(shè)置進入儀器2、點擊儀器設(shè)置進入儀器采集參數(shù)界3、進樣器設(shè)置器進樣前---進樣前洗針次數(shù)，進樣后---進樣后洗針次數(shù)；體積（ul）—清洗的體積；樣品清次數(shù)—A清洗—溶劑A洗針的次數(shù)；B清洗—B4、填充柱柱模式設(shè)定如下圖,點擊”圖標(biāo)，進入柱模式設(shè)定畫面，在畫面中點擊鼠標(biāo)右鍵，先選擇“下載再用同樣方法選擇“上傳”；點擊“1”1設(shè)定，然后選中“打開”左邊方框；選擇控制模5、毛細柱柱模式設(shè)定如下圖,點擊”5、毛細柱柱模式設(shè)定如下圖,點擊”圖標(biāo)，進入柱模式設(shè)定畫面，在畫面中點擊鼠標(biāo)右鍵，先選擇“下載再用同樣方法選擇“上傳”；點擊“2”2設(shè)定，然后選中“打開”式，“流速”或“壓力”。如壓力psi；或流速，3ml/min6、閥參數(shù)設(shè)定點擊若閥用于進樣，在Type區(qū)域選擇類型為“開關(guān)閥幾個,與時間表配合使用進行閥進樣初始狀態(tài)：關(guān)（儀器上有幾個閥就7、填充柱進樣口參數(shù)設(shè)定7、填充柱進樣口參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入進樣口設(shè)定畫面。點擊“PP-前”或“PP-后 只能在CFT里設(shè)定。8、分流不分流進樣口參數(shù)設(shè)定”圖標(biāo)，進入進樣口設(shè)定畫面。點擊“SSL-前”或“SSL-”定畫面。點擊“模式”右方的下拉式箭頭,“不分流”（分流方式，分流。在空白框內(nèi)輸入進樣口的溫度，（如250。在“分流出口吹掃流量”下邊空白框內(nèi)輸入吹掃流量（如0.75min后60ml/min。選擇分流方式,則要輸入分流比或分流流量。9、柱溫9、柱溫箱溫度參數(shù)設(shè)定 方框；℃/min—升溫速率；輸入柱子的平衡時間（如1min；下圖為一程序升溫的例子： 10、FID檢測器參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入檢測器參數(shù)設(shè)定。擊“FID-前”或“FID-后”按鈕進入FID10、FID檢測器參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入檢測器參數(shù)設(shè)定。擊“FID-前”或“FID-后”按鈕進入FID300℃；助氣（如25ml/min）或輔助氣及柱流量的和為恒定值（如 當(dāng)程序升溫時,11、TCD檢測器參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入檢測器參數(shù)設(shè)定。擊“TCD-前”或“TCD-”TCD定畫面。在空白框內(nèi)輸入：檢測器溫度（如250℃；輔助氣為5ml/min(或輔助氣及柱流量的和為恒定值（如 當(dāng)程序升溫時,柱流量變化,儀器會相應(yīng)調(diào)整輔助氣的流量,使 1.52.212、u-ECD檢測器參數(shù)1.52.212、u-ECD檢測器參數(shù)設(shè)定”圖標(biāo)，進入檢測器參數(shù)設(shè)定。擊“uECD-后”或“uECD-點擊測器設(shè)定畫面。在空白框內(nèi)輸入：檢測器溫度（如300℃；輔助氣柱流量的和為恒定值（ 流量,使到達檢測器的總流量不變13、NPD檢測器參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入檢測器參數(shù)設(shè)定。擊“NPD-前”或“NPD-”NPD定畫面。在空白框內(nèi)輸入：檢測器溫度（如325；輔助氣為4ml/min(或輔助氣及柱流量 當(dāng)程序升溫時,柱流量變化,儀器會相應(yīng)調(diào)整輔助氣的流量,使 當(dāng)程序升溫時,柱流量變化,儀器會相應(yīng)調(diào)整輔助氣的流量,使達檢測器的總流量不變；H2—3ml/min；air—選中“銣珠”及“電位計”等左邊的所有空白框 注意：預(yù)處理銣鹽（Bead）非常重要,見附頁3、關(guān)閉auto Adjust4、緩慢提高檢測器的溫度，先升至150oC，保持20分鐘，再將溫度提至200oC，保持15分鐘，再將溫度提至250oC，保持10分鐘，300oC（10分鐘），340oC（20分鐘6、緩慢提高銣珠電壓，2.5V----,2.7V----,2.8V----,2.85V----,（接近激發(fā)時，請以低于0.02V的速度增加銣珠電壓），如果發(fā)現(xiàn)輸出信號瞬間提高至50pA以上，停止增加銣珠電壓（一般而言，新銣珠的激發(fā)電壓在2.8V~3.1V之間）；7、保持銣珠的激發(fā)電壓，老化銣珠10小時以上（老化過夜左右，這時可以進樣分析。一般情況下，銣珠在運行72小時后可以、氮磷檢測器的使用溫度保持在檢測器的污染程度，還有利于銣珠在較低的電壓下激發(fā)；4、定期（約2~3個月）清洗或更換進樣器中的內(nèi)襯管（推薦內(nèi)襯管4、定期（約2~3個月）清洗或更換進樣器中的內(nèi)襯管（推薦內(nèi)襯管定要用低流失、高惰性的Agilent進口柱來獲得滿意的分析結(jié)果。14、AUX參數(shù)設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進行輔助參數(shù)設(shè)定。點擊“Type”下方的選項，選擇輔助類型如”號，并輸入設(shè)定值（100℃，選中該參數(shù)15、時間表設(shè)定點擊”圖標(biāo)，進入時間表參數(shù)設(shè)定，在“時間”下方的空白處輸入時間（如點擊“事件類型”下方的下拉式箭頭,選中事件(如，閥)；點擊“位置”下方的下拉式箭頭,選中事16、信號參數(shù)設(shè)定點擊”16、信號參數(shù)設(shè)定點擊””本例中為FID；點擊“數(shù)據(jù)采集頻率/最小峰寬”下方的下拉式箭頭，選擇數(shù)據(jù)采集數(shù)率5HZ選擇“保存17、點擊(四)、運行單個(四)、運行單個樣1、預(yù)覽運行：由于EZChrom沒有像Chemstation有onlineplot觀察在線信號的功能，所以在待基線穩(wěn)定后，可以結(jié)束預(yù)覽運行，開始分析樣品。需要從控制菜單選擇停止運行，或者單入。但建議輸入樣品的名稱或編號。并且下面數(shù)據(jù)文件命名時也包含樣品ID在內(nèi)。入。但建議輸入樣品的名稱或編號。并且下面數(shù)據(jù)文件命名時也包含樣品ID在內(nèi)。方法：需要選擇合適的方數(shù)據(jù)路徑：選擇合適的數(shù)據(jù)路加入日期和時間，那么，將來得到的文件的格式就是SampleTest-2008032713:46:52.DAT這加入日期和時間，那么，將來得到的文件的格式就是SampleTest-2008032713:46:52.DAT這3、提前結(jié)束運行和延長運行時(五)、建立和編輯序可以通過菜單文件>序列>序列向?qū)нM入序列編輯功2、序列向2、序列向?qū)А叫枰x擇序列運行或者重新處理需要調(diào)用的方法。完成該對話框時，點擊下一步以繼3、序列向?qū)А粗獢?shù)據(jù)路徑：輸入數(shù)據(jù)文件存儲的路徑每次運行重復(fù)次數(shù)：輸入每個未知樣被重復(fù)或重進樣的次數(shù)完成該對話框時，點擊下一步以繼4、序列向?qū)А詣舆M樣遞增量：如果是1，X5、序列向?qū)?、序列向?qū)АDID，IDID的基礎(chǔ)。有八種校準(zhǔn)ID的選擇。校正級別數(shù)：輸入序列中運行的校準(zhǔn)級別總數(shù)每個級別的重復(fù)次數(shù)：輸入每個校準(zhǔn)級別的重復(fù)或重進樣的次數(shù)多個校正集：如果計劃多次運行每個校準(zhǔn)級別，選擇此框完成該對話框時，點擊下一步以繼續(xù)6、序列向?qū)А獔罂偨Y(jié)：這些總結(jié)：這些選項讓你指定序列的摘要運行參數(shù)（不一定需要設(shè)置系統(tǒng)適應(yīng)性：這些選項讓你指定系統(tǒng)適應(yīng)性運行序列創(chuàng)建編輯結(jié)束，點擊完成7、編輯和保存序列新序列將以未標(biāo)題/Untitled文件序列另存為命令并輸入新重復(fù)：輸入每個樣品瓶的重復(fù)次數(shù)樣品瓶：輸入要用于進樣的自動進樣器樣品瓶號進樣量，或者手動輸入任意的0-100μL之間的進樣量。法：這是用于數(shù)據(jù)采集和處理的方法名稱。如果不知道方法的名稱，則單擊該按鈕可從磁盤上Rep1、Rep2等為數(shù)據(jù)文件命名。8、序列屬性(六)、運行序1、開始運行序列從控制菜單選擇序列運行，或者點擊序列運行的快捷按鈕，可以開始運行序列全部：單擊該處以執(zhí)行序列中的所有運行2、運行過程中的操3、提前停止序列當(dāng)前運行完成后停止序列：該選項將在當(dāng)前正在進行的運行完成后中斷序列4、運行隊列EZChrom工作站支持強大的運行隊列功能。也就是說幾個序列或單針樣品可以排成隊列依次可以單擊查看運行隊列按(七)、色譜(七)、色譜圖的操作和積1、打開色譜在打開數(shù)據(jù)的對話框，可以通過點擊說明按鈕來查看關(guān)于該數(shù)據(jù)文件的各種說明信通過點擊預(yù)覽按鈕則可以在數(shù)據(jù)文件打開窗口中查看色譜圖的預(yù)同時，如果對于不確定文件名或由于同一目錄內(nèi)文件太多而難以找到正確的文件時，EZChrom還支持通過多種條件來搜索文件并打開?？梢允褂妹麨椤安檎覞M足以下條件的文件”同時，如果對于不確定文件名或由于同一目錄內(nèi)文件太多而難以找到正確的文件時，EZChrom還支持通過多種條件來搜索文件并打開?？梢允褂妹麨椤安檎覞M足以下條件的文件”指定的分析者采集的文件。您可以查找在特定時間框架采集7EZChrom2、色譜2、色譜圖的修飾標(biāo)注釋允許注釋允許選擇在色譜圖中選擇哪些條目進行標(biāo)注實用程序允許打印，復(fù)制到記事本，或者將選定的軌跡線保存為新的數(shù)據(jù)文件3、積分事寬度事件用于計算出一個值，在應(yīng)用積分算法之前用該值使數(shù)據(jù)點集束或平滑。當(dāng)一個峰中20個點時，積分效果最好。如果峰采樣過度（即采樣頻率過高，將使用“寬度”參數(shù)平均數(shù)點少于20個）的數(shù)據(jù)。或者或者通過在色譜區(qū)域點擊右鍵，選擇圖形化編程來方便的進行所有的積分事件4、應(yīng)用積分參數(shù)分析4、應(yīng)用積分參數(shù)分析當(dāng)前數(shù)(八)、定EZChrom......1、定義將色譜峰面積或色譜峰高轉(zhuǎn)化成化合物濃度(或量)。有不同的校準(zhǔn)方法(ESTD,Elite\Enterprise\Projects\Default\Data\multicalibrationlevel1.dat。然后調(diào)整積分定義單峰可以把一個或多個峰逐步添加到峰相對保留時間窗基于一個組分期望保留時間的百分比。缺省情況下，相對保留時間窗設(shè)為2.5%單位輸入在使用校正峰標(biāo)記濃度結(jié)果中所用的單位將峰定量于選擇面積或高度用作響應(yīng)因子計算的基礎(chǔ)。注意：如果要使用內(nèi)標(biāo)進行峰和組的量，峰和組必須使用相同的定量測量類型（面積或高度量，峰和組必須使用相同的定量測量類型（面積或高度將所有峰添加到選擇此按鈕以將當(dāng)前已定義的峰范圍中的峰添加到校正表中的現(xiàn)有峰。替換代表一個校準(zhǔn)成分。一旦你以圖表形式輸入色譜峰到色譜峰表格當(dāng)中，你必須完成該色譜峰表2、色譜峰表格中各欄的意義名稱6.587分鐘處的峰這樣的名字，在在色譜峰表中右鍵單擊，然后選擇峰重新編號ID#，來為新色譜峰表格自動重新編號。反映新的色ID#。參比ID編號對該成分來說，用來作為參比峰的ID#。參比峰用來調(diào)整校準(zhǔn)成分的預(yù)期保留時間以留時間=(實際參比峰保留時間/預(yù)期參比峰保留時間)*色譜峰保留時間ISTDID編號如果正在使用內(nèi)標(biāo)方法，IDTD.IDID注意：如果正在進行內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)，必須為每個校準(zhǔn)組分輸入一個IDTD.ID編號。如果色譜峰是一個內(nèi)標(biāo)物，在ISTD.ID號欄中輸入它自己的ID號。如果正在做外標(biāo)校準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)為所有的組分在ISTDID號欄內(nèi)輸分離度ID編號如果需要，輸入用來計算分辨率的色譜峰ID#。如果此處保持空白，將基于所感興單位輸入用于報告結(jié)果的濃度單位，如mg/ml或vol%。LODASTMLOD（檢測限）值，該值用于確定峰是否在檢測限度內(nèi)（如先前對ESTD或ISTD方法有效。LOQASTMLOQ（定量限制）值，該值用于確定峰是否在定量限制內(nèi)（如先僅對ESTD或ISTD方法有效。擬合類型此選項確定對數(shù)據(jù)進行校正曲線擬合的方式強制過零點選擇該框時，將強迫校正曲線過原點重復(fù)進樣1104[((104+100+102)/3)*.6]+[101*.4]=注意：對于內(nèi)標(biāo)校正，每個重復(fù)進樣代表組分面積/高度與內(nèi)標(biāo)面積/高度之間的比率%校正范圍該選擇基于在校正中發(fā)現(xiàn)的峰面積或高度與方法中的當(dāng)前峰面積和高度之間的百分無1/ln[含量]1/ln[含量]sqrt[含量]1/響應(yīng)值ln[響應(yīng)值]1/ln[響應(yīng)值]sqrt[響應(yīng)值]Log（含量）Log（含量）1/log（含量）log（響應(yīng)值）1/log（響應(yīng)值ln（含量）&ln（響應(yīng)值（ELSD序列操作。注意：如果輸入“0”值，將禁用該功能。重復(fù)進樣RD制輸入要用于重復(fù)進樣報告的百分比相對偏差的值。如果百分比相對偏差高于此值，則樣品“失敗”。注意：如果輸入“0”RF%RSD限值輸入校正響應(yīng)因子的百分比相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。當(dāng)在序列表中指定了“校正開始”和“校正3、單點外標(biāo)進3、單點外標(biāo)進行外標(biāo)校正的步驟：C:\EZChromElite\Enterprise\Projects\Default\Data\multi之間進行擬合。如果不選中零位，則只是一個孤立的點，無法得到一條直線3通過檢查校正，可以瀏覽得到的各個峰的校正曲線值。由于工作站中沒有重復(fù)進樣的數(shù)據(jù)，下面就演示 Elite\Enterprise\Projects\Default\Data\multicalibrationlevel2.dat注意：請確認(rèn)峰表內(nèi)關(guān)于重復(fù)進樣的設(shè)置是正確別仍然為1，而且選中平均多次進樣結(jié)果。然后點擊開始進行分析。別仍然為1，而且選中平均多次進樣結(jié)果。然后點擊開始進行分析。10104、單點內(nèi)標(biāo)注意：如果要進行內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)，必須為每一個校準(zhǔn)組分輸入一ISTDID號。ISTDID是作為內(nèi)標(biāo)色譜峰的編號(ID)。如果該色譜峰是一個內(nèi)標(biāo)，在ISTDID編號中也要輸入它自己的ID編號C:\EZChromElite\Enterprise\Projects\Default\Data\multicalibrationlevel1.dat3.從分析菜單選擇分析/單級校正，或者點擊其快捷按注意：內(nèi)標(biāo)含量從方注意：內(nèi)標(biāo)含量從方法“峰表”中得出；對于未知運行，則需要輸入未知樣品的內(nèi)標(biāo)含量通過檢查校正，可以瀏覽得到的各個峰的校正曲線鍵，選擇導(dǎo)入報告在彈出的報告模板文件中在彈出的報告模板文件中選擇內(nèi)標(biāo)法.Srp，然后點擊打開按鈕85、多點外標(biāo)C:\EZChromElite\Enterprise\Projects\Default\Data\multicalibrationlevel1.dat3.從通過檢查校正，可以瀏覽得到的各個峰的校正曲線調(diào)入第2級的數(shù)據(jù)C:\EZChromElite\Enterprise\Projects\Default\Data\multicalibrationlevel2.dat。調(diào)入第3級的數(shù)據(jù)C:\EZChromElite\Enterprise\Projects\Defaul