1人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷的含量指標(biāo)與檢查方法本文件規(guī)定了人參、西洋參、三七根部和莖葉等總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量測(cè)定方法，規(guī)定了用高效液相色譜法測(cè)定總皂苷中各皂苷質(zhì)量含量比例方法及指標(biāo)。本文件適用于人參主根和須根的Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc和Rd質(zhì)量含量區(qū)別；適用于西洋參主根和須根的Rb1、Re、Rb2、Rc、Rd、Rg1皂苷；三七主根和須根的Rg1、Rb1、R1、Re、Rd皂苷質(zhì)量含量區(qū)別；也適用于人參莖葉的Re、Rd、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rf皂苷，西洋參莖葉的Rb3、Rd、Re、Rb2、Rc、Rb1和Rg1皂苷，三七莖葉的Rb3、C-Mx1、Rc、Fc、Fa、Rb1和Rd皂苷質(zhì)量含量區(qū)別。提供人參、西洋參、三七主根和須根以及莖葉總皂苷中各皂苷質(zhì)量含量比例的區(qū)別點(diǎn)，以便可檢出人參產(chǎn)品中所采用的原料是否人參或西洋參或三七主根和須根，或者采用其莖葉皂苷。本文件規(guī)定了紅參浸出物等人參煎制制品以及用其配制的保健食品、酒類中總皂苷質(zhì)量含量測(cè)定方法及指標(biāo)，規(guī)定了人參煎制制品總皂苷中，原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc和Rd和其原皂苷轉(zhuǎn)化生成的20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、Rg5和Rk1，20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4，20(S)-Rh2和20(R)-Rh2、Rk2和Rh3，20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4以及C-K等二十余種人參稀有皂苷的含量比例的測(cè)定方法及指標(biāo)，規(guī)范化其產(chǎn)品中主要皂苷和原皂苷轉(zhuǎn)化生成的稀有皂苷含量比例，以便規(guī)范化產(chǎn)品質(zhì)量。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語與定義人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷的含量指標(biāo)與檢查方法，包括了：3.1主要人參屬植物加工中總皂苷含量，指主要參類人參、西洋參、三七主根和須和其莖葉2等原料，包括了紅參浸出物或人參煎制制品、人參酒等加工產(chǎn)品中的總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量。3.2總皂苷中各皂苷比例，用高效液相色譜法，測(cè)定總皂苷中各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例。3.3紅參浸出物或人參煎制制品或人參酒等人參加工產(chǎn)品的總皂苷中，不僅含有原人參皂苷Rg5和Rk1，20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4，20(S)-Rh2和20(R)-Rh2、Rk2和Rh3，20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4，以及F2、F1和C-K等稀有皂苷。因此其總皂苷中，原人參皂苷和稀有皂苷等、各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例。4原理人參原料及其加工產(chǎn)品中的總皂苷含量測(cè)定：用甲醇分別提取人參或西洋參或三七根部或其莖葉或紅參及其提取物的人參總皂苷，減壓濃縮，用石油醚進(jìn)行脫脂，干燥、溶于少量的水、經(jīng)大孔吸附樹脂柱和大孔脫色樹脂柱凈化，減壓濃縮、干燥衡重，分別得到人參或西洋參或三七根部或其莖葉或紅參及其提取物的人參總皂苷含量。人參酒總皂苷含量，取200mL在60-70℃水浴鍋中干燥、經(jīng)大孔吸附樹脂柱和大孔脫色樹脂柱凈化，減壓濃縮、干燥衡重，得到總皂苷含量。市銷的莖總?cè)~皂苷含量，經(jīng)大孔吸附樹脂柱和大孔脫色樹脂柱凈化，減壓濃縮、干燥衡重，得到總皂苷質(zhì)量含量。上述總皂苷做高效液相色譜，分別得到各總皂苷的峰面積色譜圖；然后分別得到各皂苷的6個(gè)不同濃度的各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜“峰面積、摩爾濃度和質(zhì)量濃度”標(biāo)準(zhǔn)曲線，核對(duì)總皂苷色譜圖中，各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例；分別得到人參或西洋參或三七主根和須根或其莖葉等原料，以及紅參浸出物等人參煎制制品、人參酒等人參加工產(chǎn)品中的總皂苷中各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例。5試劑和材料5.1石油醚（60-90）：分析純。5.2甲醇、乙腈：色譜純。5.3水：GB/T6682，一級(jí)水5.4大孔樹脂和脫色大孔樹脂：根據(jù)廠家規(guī)定方法，預(yù)先處理好的大孔樹脂35.5人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品：詳見附錄-1（內(nèi)容包括標(biāo)準(zhǔn)品名稱、CAS號(hào)、分子式）6儀器和設(shè)備6.1索氏提取器6.2高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器，符合GB/T26792的規(guī)定6.3色譜柱C18（十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑），5μm，φ4.6mm×250mm6.4微孔濾膜（有機(jī)相）：13mm×0.45μm6.5分析天平：感量0.00001g6.6減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀6.7恒重的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，25mL，50mL6.8恒溫干燥箱6.9分液漏斗6.10恒溫水浴鍋7分析步驟7.1人參或西洋參或三七的主根或須根部或其莖葉以及其紅參浸膏等人參加工產(chǎn)品的總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量的測(cè)定7.1.1樣品的處理及粗總皂苷的提取1）將人參或西洋參或三七的主根或須根，分別粉碎為25目以下，分別人參或西洋參準(zhǔn)確稱取1g，準(zhǔn)確稱取三七主根或須根0.5g（精確至0.0001g），加入15mL石油醚脫脂1h、移去石油醚，重復(fù)3次；揮干樣品中的石油醚，再加入甲醇回流8小時(shí)提取皂苷，減壓濃縮，得到粗皂苷提取物。2）準(zhǔn)確稱取1g的紅參浸膏或人參煎熬制品，在60℃恒溫箱干燥，加入15mL石油醚脫脂1h、移去石油醚，重復(fù)3次；揮干樣品中的石油醚，再加入甲醇回流8小時(shí)提取皂苷，減壓濃縮，分別得到粗皂苷提取物。3）準(zhǔn)確取100mL人參酒，在60-70℃水浴鍋中揮發(fā)干燥，加入15mL石油醚脫脂1h、移去石油醚，重復(fù)3次；揮干樣品中的石油醚，得到粗皂苷提取物。7.1.2粗皂苷凈化上述樣品各粗皂苷（或準(zhǔn)確稱取50mg的市銷的人參或西洋參或三七莖葉皂苷），分別加20-30mL水溶解后，上預(yù)先處理好的15mL大孔吸附樹脂柱上，加水反復(fù)吸附皂苷，待4皂苷被完全吸附后，用90mL水洗掉大孔樹脂柱上的糖類的雜質(zhì)，然后用75mL的80%（v/v）乙醇進(jìn)行洗脫；其乙醇洗脫液再經(jīng)10mL脫色大孔樹脂柱脫色、再用20mL的80%乙醇（v/v）洗脫脫色柱上殘留的皂苷；將其皂苷脫色液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓濃縮干燥后，在恒溫干燥箱(80-90℃)中，將其旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶干燥至恒重，稱重，分別計(jì)算各樣品總皂苷質(zhì)量含量。7.1.3計(jì)算總皂苷質(zhì)量含量C（%）的計(jì)算式：計(jì)算式中：C：樣品中總苷質(zhì)量含量（%）M1：含有皂苷的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶恒質(zhì)量（g）M2：空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶恒質(zhì)量（g）M：樣品原料質(zhì)量（g）7.2用高效液相色譜法，測(cè)定人參、西洋參、三七的主根或須根和莖葉峰原料及其加工產(chǎn)品總皂苷中各皂苷含量比例以高效液相色譜法，測(cè)定上述人參、西洋參、三七的根部和莖葉等原料及人參加工產(chǎn)品總皂苷中的各皂苷含量比例。7.2.1高效液相色譜參考條件a）色譜柱：C18柱（十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑）（5μm，φ4.6mm×250mm）b）流動(dòng)相：乙腈、水c）柱溫：35℃d）流速：0.6mL/mine）檢測(cè)波長(zhǎng)：203nmf）進(jìn)樣量：10μL1）測(cè)定人參、西洋參、三七的根部和莖葉等原料總皂苷的高效液相色譜流動(dòng)相、乙腈-水梯度洗脫水0~35min19%等度81%35~55min19%至29%線性梯度81%至71%55~65min29%至40%線性梯度71%至60%65~95min40%至100%乙腈線性梯度60%至0%52）測(cè)定人參加工產(chǎn)品、紅參浸膏或人參煎熬制品或人參酒的總皂苷（原人參皂苷轉(zhuǎn)化為很多種人參稀有皂苷）高效液相色譜的流動(dòng)相、乙腈-水梯度洗脫水0~5min20%～40%80%～60%40%～60%60%～40%10~70min60%～100%40%~0%7.2.2用高效液相色譜法，測(cè)定人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉等原料，以及人參加工產(chǎn)品紅參浸出物、煎制人參制品、人參酒等的總皂苷中各皂苷峰面積比例與含量用高效液相色譜法測(cè)定各樣品總皂苷中的各皂苷色譜圖和峰面積比；再分別測(cè)定6個(gè)不同濃度的各相關(guān)人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的高液相色譜，繪制標(biāo)準(zhǔn)峰面積和摩爾和質(zhì)量濃度曲線，分別確定每個(gè)樣品中的各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例。7.2.2.1人參或西洋參或三七的主根或須根或莖葉等原料總皂苷中的各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例。分別準(zhǔn)確稱取15mg的上述人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉的總皂苷，分別放于5mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容、配制3mg/mL的人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉總皂苷溶液，微孔濾膜過濾、進(jìn)樣體積10μL、做高效液相色譜圖，分別記錄各樣品總皂苷中各人參皂苷的峰面積和其峰面積比例。樣品總皂苷中、對(duì)應(yīng)各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)分別配制成6個(gè)不同濃度。準(zhǔn)確分別稱取15mg人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品R1、Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rb2、R1、Rb3、Gyp17、C-Mc1、C-Mx1或Fa，分別放于5mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容至刻度，分別配制1.5mg/mL的各皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液；將其標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品液，分別取0.05mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL分別置于5mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別配制成0.015mg/mL、0.075mg/mL、0.15mg/mL、0.30mg/mL、0.90mg/mL和原1.50mg/mL等、6個(gè)不同濃度的各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣體積10μL，分別做高效液相色譜，分別繪制各皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度、摩爾濃度和峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別核對(duì)確定原樣品高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例、質(zhì)量含量比例。結(jié)果，樣品總皂苷中，各皂苷峰面積比例和摩爾含量比例是一致的；樣品總皂苷中，各皂苷質(zhì)量含量比例，用計(jì)算式（2）可計(jì)算。67.2.2.2紅參浸出物、煎制人參制品、人參酒等的總皂苷中，各皂苷高效液相色譜峰面積比例與含量比例的測(cè)定分別準(zhǔn)確稱取15mg的紅參浸出物或煎制人參制品或人參酒總皂苷，分別放于5mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容、分別配制3mg/mL的參浸出物或煎制人參制品或人參酒總皂苷溶液，微孔濾膜過濾、進(jìn)樣體積10μL、做高效液相色譜圖，記錄樣品總皂苷中各人參皂苷的峰面積圖和其峰面積比例。人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別準(zhǔn)確稱取15mg人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2或Rh3，分別放于10mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容至刻度，分別配制1.5mg/mL的各皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。將1.5mg/mL標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品液，分別取0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.00.3mg/mL、0.30mg/mL、0.72mg/mL和原1.5mg/mL等，6個(gè)不同濃度的各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣體積10μL，做高效液相色譜，分別繪制各皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的制質(zhì)量濃度、摩爾濃度和峰面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線，核對(duì)確定原樣品高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例、質(zhì)量含量比例。結(jié)果，樣品總皂苷中，各皂苷峰面積比例和摩爾含量比例是一致的；樣品總皂苷中，各皂苷質(zhì)量含量比例，用計(jì)算式（2）可計(jì)算。7.2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：用高效液相色譜法，測(cè)定“人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉等原料以及人參加工產(chǎn)品紅參浸出物、煎制人參制品及人參酒等”的總皂苷的結(jié)果：各樣品人參皂苷出峰順序：西洋參主根和須根各主要人參皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rb1、RcRb2、Rd（附件-2,B三七主根和須根各主要人參皂苷出峰順序：R1、Rg1、Re、Rb1、Rd（附件-2,C）；人參莖葉各人參皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd（附件-2,D）；西洋參莖葉各皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd（附件-2,E）；三七莖葉各皂苷（一種產(chǎn)品）出峰順序：Fa、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Gyp17、C-Mc1、C-Mx1（附件-2,E）；7Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3（附件-3）；Rd、Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等（附件-4）。用高效液相色譜法，分別測(cè)定6個(gè)不同濃度的各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液、記錄峰面積，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)品各皂苷質(zhì)量濃度、摩爾濃度及峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別確定各樣品總皂苷色譜圖中各皂苷峰面積比例、摩爾濃度及質(zhì)量濃度關(guān)系；結(jié)果，人參或西洋參或三七的根部或其莖葉以及紅參浸出物、煎制人參制品及人參酒等總皂苷中，各皂苷高效液相色譜峰面積比例（%）與各人參皂苷摩爾濃度積比例（%）基本一致。根據(jù)每個(gè)人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，參考各人參皂苷分子量，確定了每個(gè)樣品總皂苷中各皂苷峰面積與質(zhì)量濃度關(guān)系；得到在各樣品總皂苷中出峰順序?yàn)閚皂苷的質(zhì)量含量比例與峰面積比例關(guān)系（通式）計(jì)算式（%）：計(jì)算式中：Cn：人參或西洋參或三七的根部及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總皂苷中各皂苷出峰順序n號(hào)人參皂苷質(zhì)量含量比例（%）Mn：出峰順序n號(hào)人參皂苷峰面積在總皂苷面積中所占的比例（%）Fn：出峰順序n號(hào)人參皂苷分子量M1、M2、M3，…，Mn：在人參或西洋參或三七根部及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總?cè)藚⒃碥罩?，出峰順?、2、3、…、n號(hào)人參皂苷峰面積比例（%）F1、F2、F3、…、Fn：人參或西洋參或三七根部或其莖葉的總皂苷中，按照出峰順序1、2、3、…、n號(hào)人參皂苷的分子量。例-1：以人參根總皂苷例，色譜中人參皂苷出峰順序?yàn)镽g1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd；出峰順序1號(hào)皂苷的Rg1在人參根總皂苷中質(zhì)量含量比（%）出峰順序2號(hào)皂苷的Re在人參根總皂苷中質(zhì)量含量比（%）等等。例-2：紅參浸膏（一種產(chǎn)品）各皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-R8Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3；其中17號(hào)出峰的20(S)-Rg3在紅參浸膏總皂苷中質(zhì)量含量比（%）：等等。由此可見，用高效液相色譜法，測(cè)定“人參或西洋參或三七的根部或其莖葉等原料，以及人參加工產(chǎn)品紅參浸出物、煎制人參制品或人參酒等總皂苷”各人參皂苷色譜峰面積及其峰面積比例，測(cè)定對(duì)應(yīng)各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，根據(jù)各人參皂苷分子量，確定各皂苷峰面積比例與含量比例。結(jié)果，總皂苷中各人參皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致；每個(gè)樣品總皂苷中，出峰順序?yàn)閚皂苷質(zhì)量含量比例與峰面積比例關(guān)系的（通式）計(jì)算式（%）：如下，以試驗(yàn)實(shí)例，進(jìn)一步說明。7.3人參或西洋參或三七的主根和須根及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總皂苷中各皂苷峰面積比與含量比例關(guān)系實(shí)例7.3.1人參或西洋參或三七的主根和須根及莖葉（一種產(chǎn)品）總皂苷中各皂苷峰面積比與質(zhì)量含量比例關(guān)系分別準(zhǔn)確配制3mg/mL的人參或西洋參或三七的根部或其莖葉總皂苷，進(jìn)樣體積10μL，做高效液相色譜圖，記錄各人參皂苷的高效液相色譜峰面積色譜圖。7.3.1.1人參、西洋參和三七根部總皂苷中各皂苷的高效液相色譜峰面積比例與質(zhì)量含量比例關(guān)系：人參主根和須根總皂苷（附件-2A）：在高效液相色譜中，人參根的主要人參皂苷出峰順序?yàn)镽g1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd；人參根部各皂苷色譜圖中的峰面積，用6個(gè)濃度的皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd質(zhì)量濃度、摩爾濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線核對(duì)結(jié)果，其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致；各皂苷質(zhì)量濃度含量比例以計(jì)算式（2）的計(jì)算結(jié)果，如表1所示。表1、高效液相色譜中人參主根和須根的總皂苷的各主要皂苷峰面積比例及質(zhì)量含量比例（%）皂苷出峰順序Rg1ReRfRb1RcRb2Rd人參主根峰面積比（%）38.07.8621.97.816.765.87質(zhì)量含量比（%）32.66.7326.09.027.805.959人參須根峰面積比（%）5.2123.1質(zhì)量含量比（%）8.74.1725.6由此可見，人參根部的特征皂苷為Rf；總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例，就是人參皂苷摩爾含量比例；各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例差異5%以內(nèi)。人參主根和須根最大區(qū)別為；主根的人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的50%-55%；須根中人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的34%左右。主根的人參二醇類皂苷Rb1、Rc、Rb2和Rd含量為45%左右，而須根的參二醇類皂苷接近60%-70%；由此、可以區(qū)別人參主根和須根。西洋參主根和須根總皂苷（附件-2B）：在總皂苷中，各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例：主要人參皂苷出峰順序?yàn)镽g1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd；其色譜圖和各皂苷峰面積比例和質(zhì)量含量比例，如下圖3所示：表3、西洋參主根和須根主要皂苷在高效液相色譜圖中組成（各皂苷峰面積比例及質(zhì)量含量比例%）皂苷出峰順序Rg1ReRb1RcRb2Rd西洋參主根峰面積比（%）9.6733.838.165.492.44質(zhì)量含量比（%）7.6931.842.045.882.62西洋參須根峰面積比（%）4.3234.424.84.3120.4質(zhì)量含量比（%）3.4332.327.34.61由此可見，總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例一致；各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例差異4%以內(nèi)。西洋參主根和須根的最大區(qū)別，總皂苷中主根的主要皂苷Re和Rb1含量為總皂苷70%以上，須根為60%以下。沒有人參特征皂苷Rf和三七特征皂苷R1。三七主根和須根總皂苷（附件-2C）：三七主根和須根各總皂苷中，各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例：主要人參皂苷出峰順序?yàn)镽1、Rg1、Re、Rb1、Rd；各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例，如下表4所示：表4、三七主根和須根主要皂苷在高效液相色譜圖中峰面積比例及質(zhì)量含量比例（%）皂苷出峰順序R1Rg1ReRb1Rd三七主根峰面積比（%）44.55.2927.5質(zhì)量含量比（%）38.55.4132.9三七須根峰面積比（%）51.16.1722.3質(zhì)量含量比（%）45.06.4227.2由此可見，總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致；各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例差異5%左右。三七根部主要皂苷為Rg1和Rb1，含量近70%，特征皂苷為R1。從上述試驗(yàn)得知。人參、西洋參和三七各部總皂苷中各皂苷的峰面積比例與質(zhì)量含量比例差異5%以內(nèi)。說明，用高效液相色譜法一般測(cè)定人參或西洋參或三七的根部總皂苷的峰面積比例，近似代表各皂苷的質(zhì)量含量比例。7.3.1.2莖葉各總皂苷中，各皂苷峰面積比例與質(zhì)量含量比例（%）：人參莖葉皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd（附件-2D）；人參皂苷Re和Rd在總皂苷中含量接近60%，遠(yuǎn)高于人參根部，如表5所示。表5、人參莖葉各皂苷峰面積比例及質(zhì)量含量比例（%）皂苷出峰順序Rg1ReRfRb1RcRb2Rd人參莖葉峰面積比（%）32.34.487.446.496.6525.8質(zhì)量含量比（%）32.33.798.737.417.5925.8西洋參莖葉各皂苷出峰順序：Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd（附件-2E）；在總皂苷中Rb3和Rd含量60%以上，遠(yuǎn)高于根部總皂苷，如表6所示。表6、西洋參莖葉各皂苷峰面積比例及質(zhì)量含量比例（%）皂苷出峰順序Rg1ReRb1RcRb2Rb3Rd西洋參莖葉峰面積比（%）3.872.074.729.8735.827.3質(zhì)量含量比（%）3.062.275.0310.5238.225.5三七莖葉各皂苷出峰順序：Fa、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Gyp17、C-Mc1、C-Mx1附件-2F）在總皂苷中Rb3和C-Mx1含量50%，與三七根部皂苷組成決然不同表7、市銷的三七莖葉（一種產(chǎn)品）各皂苷峰面積比例及質(zhì)量含量比例（%）皂苷出峰順序FaRb1RcRb2Rb3RdGyp17C-Mc1C-Mx1三七莖葉峰面積比（%）6.752.2633.92.716.6018.8質(zhì)量含量比（%）8.292.4635.92.525.916.97.3.1.3歸納人參或西洋參或三七的根部和其莖葉人參皂苷特征指標(biāo)及區(qū)別a．原料人參皂苷含量：人參和西洋參；主根皂苷質(zhì)量含量≥3.5%；須根皂苷含量≥5%。三七主根皂苷質(zhì)量含量，≥7%。市銷的人參皂苷、包括人參或西洋參或三七根部皂苷和莖葉皂苷，總皂苷質(zhì)量含量，≥80%；b．在高效液相色譜中，人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉總皂苷中各人參皂苷峰面積比與摩爾含量摩爾比例一致。人參或西洋參或三七的根部總皂苷中各皂苷的峰面積比例與質(zhì)量含量比例差異5%以內(nèi)；用人參或西洋參或三七的根部總皂苷中各人參皂苷峰面積比例，可近似代表其人參皂苷質(zhì)量含量比例：其主要區(qū)別：（1）人參或西洋參或三七的根部總皂苷的區(qū)別：在高效液相色譜圖譜中，人參根部特征皂苷為Rf，主要含Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd；西洋參根部，主要60%以上Re和Rb1，還含Rg1、Rb2、Rc、Rb2、Rd；三七根部特征皂苷為R1，主要含70%Rg1和Rb1還含有Re和Rd。由此，可以區(qū)別產(chǎn)品中采用原料是人參或西洋參或三七根部；（2）人參主根、須根和莖葉總皂苷區(qū)別（均含有特征皂苷Rf）；人參主根和須根總皂苷最大區(qū)別為；主根的人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的50%-55%；須根中人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的34%左右。主根的人參二醇類皂苷Rb1、Rc、Rb2和Rd含量為45%左右，而須根的參二醇類皂苷接近60%-70%；由此可以區(qū)別人參主根和足夠。人參根部與莖葉總皂苷大區(qū)別：莖葉總皂苷中Rb1含量只有4%左右，人參根部Rb1含量26%；莖葉總皂苷Rd含量26%，人參根部總皂苷Rd含量只有10%左右。由此，可以區(qū)別人參產(chǎn)品中所用的原料是，人參主根、還是須根或者是莖葉皂苷。（3）西洋參主根、須根和莖葉總皂苷區(qū)別：西洋參總皂苷中主根的主要皂苷Re和Rb1含量為總皂苷70%以上，須根為60%以下；西洋參莖葉皂苷中Rb1皂苷含量只有2%，而Rb3和Rd皂苷含量高達(dá)60%；由此可以區(qū)別產(chǎn)品中采用的原料是西洋參主根、須根和莖葉總皂苷（4）三七主根和莖葉總皂苷區(qū)別：三七根主要皂苷為R1、Rg1、Re、Rb1和Rd，三七莖葉主要皂苷中為Rb3和C-Mx1皂苷，其含量高達(dá)50%；而R1、Rg1、Rb1皂苷含量很低，由此可以區(qū)別產(chǎn)品中原料采用的是三七主根或莖葉。（5）人參、西洋參和三七莖葉總皂苷的區(qū)別：人參莖葉總皂苷中Re和Rd含量接近60%；西洋參莖葉總皂苷中Rb3和Rd含量60%以上；三七總皂苷中Rb3和C-Mx1含量50%左右；不僅表示人參、西洋參和三七莖葉總皂苷之間的區(qū)別，也表示人參、西洋參和三七根部與莖葉的區(qū)別?？傊?，根據(jù)上述人參或西洋參或三七的根部和莖葉皂苷組成指標(biāo)的特點(diǎn)，可區(qū)別一種人參產(chǎn)品中采用原料釋是否、人參或西洋參主根或者須根總皂苷，或者采用人參或西洋參或三七根部或者莖葉皂苷；這對(duì)人參產(chǎn)業(yè)很有指導(dǎo)意義。7.3.2用高效液相色譜法得到紅參浸膏（一種產(chǎn)品）總皂苷中各人參皂苷面積比與根據(jù)計(jì)算式（2）所得到的質(zhì)量含量比例按照7.1、7.2和7.3。1方法測(cè)定，紅參浸膏產(chǎn)品中：干物質(zhì)量含量≥60%，水不溶性物質(zhì)量含量2%以下；總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量，≥70mg/g；從干燥參紅參浸膏質(zhì)量得率≥65%。將3mg/mL的紅參浸膏總皂苷，進(jìn)樣體積10μL，做高效液相色譜，記錄各人參皂苷的高效液相色譜峰面積及其比例。紅參浸膏總皂苷中各人參皂苷出峰順序?yàn)椋篟g1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3（附件-3）。制作6個(gè)不同濃度的上述各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積、質(zhì)量濃度、摩爾濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，與紅參經(jīng)總皂苷高效液相色譜圖（附件-3）核對(duì)結(jié)果，其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致；各皂苷質(zhì)量濃度含量比例以計(jì)算式（2）的計(jì)算結(jié)果和峰面積比例，如表8所示：表8、紅參浸膏各人參皂苷在功效液相色譜圖中峰面積比和質(zhì)量濃度比（%）人參皂苷出峰順序人參皂苷名稱總皂苷中峰面積比（%）總皂苷中質(zhì)量含量比（%）1Rg12Re2.332.703Rf2.432.384Rb17.5910.305Rc6.268.27620(S,R)-Rg24.484.317Rb25.857.72820(S)-Rh1920(R)-Rh10.84Rd5.105.91Rg65.014.71Rg42.552.40Rk32.672.03Rh45.854.4420(S)-Rg320(R)-Rg38.648.31Rk17.316.87Rg58.357.85C-K2020(S)-Rh22.522120(R)-Rh222Rk22.0523Rh32.62由此得到：紅參浸膏或人參煎制加工過程中，20(S)-原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的20-O-糖鏈，分別被水解為稀有皂苷20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1；其20-羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3；其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：紅參浸膏指標(biāo)：a.紅參浸膏的干物質(zhì)量含量≥60%，水不溶性物質(zhì)量含量2%以下；總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量≥60-70mg/g；從干參的產(chǎn)品質(zhì)量得率≥65%：b.紅參浸膏總皂苷中含有原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd和其原皂苷轉(zhuǎn)化生成的20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1；其20-羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3皂苷等，數(shù)量多，很難做產(chǎn)品指標(biāo)。因次簡(jiǎn)化產(chǎn)品指標(biāo)：產(chǎn)品指標(biāo)可定為：（1）以峰面積計(jì)算，50%以上原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd、轉(zhuǎn)化成20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1；其20-羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等稀有皂苷；（2）紅參浸膏中，明顯地檢出Rg1、Rb1、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5色譜峰；其6種特征皂苷質(zhì)量含量為，≥20mg/g。（3）用讓人參浸膏配制的制品或經(jīng)人參煎熬制備的人參制品中總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量與總皂苷各皂苷含量比例，可參考紅參浸膏的測(cè)定方法，可以確定。上述方法也適用于其他煎制人參制品以及用紅參浸膏配置的人參制品等；其指標(biāo)：根據(jù)廠家的具體產(chǎn)品的不同，可以建立具體產(chǎn)品的人參總皂苷含量及總皂苷中原人參皂苷和其原皂苷轉(zhuǎn)化成稀有皂苷的含量比例。7.3.3用高效液相色譜法得到人參酒（一種產(chǎn)品）總皂苷中各人參皂苷面積比與根據(jù)計(jì)算式（2）所得到的質(zhì)量含量比例一種人參酒產(chǎn)品，酒度為51vol%，人參總皂苷質(zhì)量的人參酒總皂苷，進(jìn)樣體積10μL，做高效液相色譜圖，記錄各人參皂苷的高效液相色譜圖（附件-4）。各皂苷出峰順序?yàn)镽g1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S,R)-Rg2、Rb2Rd、Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等（附件-4）。制作6個(gè)不同濃度的上述各人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積、質(zhì)量濃度、摩爾濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，與人參酒總皂苷高效液相色譜圖（附件-4）核對(duì)結(jié)果，其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致；各皂苷質(zhì)量濃度含量比例以計(jì)算式（2）的計(jì)算結(jié)果和峰面積比例，如表9所示：表9、人參酒各人參皂苷在高效液相色譜圖中峰面積比和質(zhì)量濃度比（%）人參皂苷出峰時(shí)間峰面積面積比例（%）1Rg1,Re30.143182437517.622Rf38.3444154974.01338.6942270842.194Rb139.080112367910.85520(S)-Rg239.4992528422.446Rc39.7582920122.82720(R)-Rg239.9244011913.87820(S)-Rh140.5345590025.409Rb240.7194790534.6320(R)-Rh140.9653047982.94Rd42.7545596135.4048.5003062052.9650.051997590.9620(S)-Rg350.6603920193.7920(R)-Rg351.1162675242.5851.7035214915.04Rk156.366153190Rg556.9945235915.06Rk262.144939750.91Rh362.5207388077.13人參酒，有人參發(fā)酵酒、用人參或人參浸出物配置的配制酒。人參發(fā)酵酒或配制酒中，均含有原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd，以及其轉(zhuǎn)化生成的稀有皂苷20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4，20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4，20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、Rg5和Rk1，Rk2和Rh3等。各人參酒廠家，按上述方法可建立總皂苷的質(zhì)量含量和各主要皂苷質(zhì)量含量比例具體指標(biāo)。通用的人參酒、包括人參配制酒和人參發(fā)酵酒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：a.酒度，15～60vol%；總皂苷質(zhì)量含量，10～120mg/100mL酒；b.總?cè)藚⒃碥罩小耙愿髟碥崭咝б合嗌V峰面積計(jì)算”原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc和Rd總峰面積與“轉(zhuǎn)化生成的稀有皂苷20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4，20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4，20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、Rg5和Rk1，Rk2和Rh3等”總峰面積比例為80%～35%.綜上所述：上述7.1方法、7.2和7.3的方法，不僅適用于人參或西洋參或三七的根部或其莖葉等原料及其人參加工產(chǎn)品-紅參浸膏或人參酒等的產(chǎn)品總?cè)藚⒃碥召|(zhì)量含量測(cè)定，適用于其總皂苷中各皂苷的峰面積比例、摩爾含量比例和質(zhì)量含量比例的測(cè)定；也適用于本文未涉及到的所有人參制品的總?cè)藚⒃碥蘸?，總皂苷中各皂苷含量比例的測(cè)定。8檢測(cè)精密度每種人參皂苷在重復(fù)性條件下獲得的3次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于這兩個(gè)測(cè)定值算術(shù)平均值的5%。