第2節(jié)

基因工程的基本操作程序第1課時

篩選和獲取目的基因與構(gòu)建基因表達(dá)載體學(xué)習(xí)目標(biāo)01基礎(chǔ)落實·必備知識全過關(guān)02重難探究·能力素養(yǎng)全提升01基礎(chǔ)落實·必備知識全過關(guān)知識點(diǎn)一

基因工程的基本操作程序

目的基因

基因表達(dá)載體知識點(diǎn)二

目的基因的篩選與獲取1.

篩選合適的目的基因（1）

目的基因：在基因工程的設(shè)計和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因。目的基因主要是指____________的基因。編碼蛋白質(zhì)（2）篩選方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。（3）

獲取目的基因的方法有：①人工合成目的基因；②用_____特異性地快速擴(kuò)增目的基因；③通過構(gòu)建基因文庫來獲取目的基因。

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模板增加一倍瓊脂糖凝膠電泳知識點(diǎn)三

基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.

基因表達(dá)載體的構(gòu)建目的

使目的基因在受體細(xì)胞中__________,并且可以遺傳給下一代,同時,使目的基因能夠______和__________。穩(wěn)定存在表達(dá)發(fā)揮作用2.

基因表達(dá)載體的組成啟動子上游

轉(zhuǎn)錄終止子下游轉(zhuǎn)錄標(biāo)記目的基因3.

基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程

限制酶同種相同末端

旁欄邊角

想一想

2.

［教材P77相關(guān)信息］引物的化學(xué)本質(zhì)是什么？_____________________________________________________________________________________________________________

結(jié)論語句

辨一辨

×

×

√

√（5）

基因工程操作程序的核心步驟是目的基因的獲取。

(

)

×（6）

基因表達(dá)載體含有啟動子和終止密碼子。

(

)

×（7）

標(biāo)記基因不一定是抗生素抗性基因。

(

)

√02重難探究·能力素養(yǎng)全提升主題一

利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因情境探究

圖1圖2

模板、酶、原料、引物以及特定的溫度

3283.

圖2中某同學(xué)設(shè)計的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理，請分別說明理由。_______________________________________________________________________________________________________________

4.

研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)性溫度與設(shè)計的引物（如長度、堿基組成）有關(guān)，請分析原因。_____________________________________________________________________________________________________________________________________

5.

要保證目的基因能與載體相連接，還要對引物進(jìn)行什么操作？_

____________________________________________________

方法突破

比較項目區(qū)別解旋方式解旋酶催化場所主要在細(xì)胞核內(nèi)酶溫度細(xì)胞內(nèi)溫和條件控制溫度,在不同溫度下進(jìn)行結(jié)果比較項目聯(lián)系續(xù)表視角應(yīng)用視角1

PCR的過程

D注：A、B、C、D是引物，箭頭是延伸方向。

DA.&1&

B.&2&

C.&3&

D.&4&

視角2

PCR與DNA復(fù)制的比較

B

主題二

基因表達(dá)載體的構(gòu)建情境探究構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的核心步驟。目的是讓基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代;同時，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。請討論回答下列問題。

提示

可以防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化以及目的基因與載體的反向連接。3.

質(zhì)粒作為基因工程的載體，包含標(biāo)記基因、啟動子、終止子等多種功能元件，這些功能元件是質(zhì)粒中自帶的嗎？_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

提示

不一定，有些是根據(jù)需要人為添加的。例如想讓目的基因在某種特定細(xì)胞中表達(dá)，就需要在質(zhì)粒中添加上在這種細(xì)胞中特異性表達(dá)的啟動子，從而保證目的基因的表達(dá)。方法突破

啟動子和終止子、起始密碼子和終止密碼子的區(qū)別項目啟動子終止子起始密碼子終止密碼子成分位置基因上游基因下游作用決定轉(zhuǎn)錄的結(jié)束翻譯的起始信號決定翻譯過程的結(jié)束【知識拓展】

真、原核生物的基因結(jié)構(gòu)________________________________________________________________________________________________________________________________續(xù)表視角應(yīng)用視角1

載體的組成元件和構(gòu)建過程

B

圖1圖2

√視角2

重組質(zhì)粒的篩選

注：影印接種指用滅菌后的“印章”在培養(yǎng)基中輕按一下，將培養(yǎng)基乙中菌落按相同位置接種到培養(yǎng)基丙。A.圖甲所示的質(zhì)粒中還應(yīng)含有復(fù)制原點(diǎn)和終止子等結(jié)構(gòu)B.將經(jīng)轉(zhuǎn)化處理后的大腸桿菌菌液接種至培養(yǎng)基乙使用的是稀釋涂布平板法C.配制培養(yǎng)基乙時應(yīng)加入氨芐青霉素D.培養(yǎng)基丙中生長的菌落即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌√[解析]

質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有具有標(biāo)記基因、具有一個或多個限制酶切點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制（具有復(fù)制原點(diǎn)），若是同時作為表達(dá)載體，還需要具有啟動子和終止子等結(jié)構(gòu)，A項正確；題中培養(yǎng)基乙中菌落相對分散，使用的是稀釋涂布平板法，B項正確；配制培養(yǎng)基