有助于消化檢驗方法1動物實驗1.1實驗原理胃腸道是營養(yǎng)物質(zhì)的攝取、消化與吸收的器官，對食物的消化作用主要是依靠其運動、消化酶的分泌來完成的。如果某一保健食品能對這一環(huán)節(jié)或幾環(huán)節(jié)有調(diào)節(jié)作用，就可能具有有助于消化的作用。1.2實驗項目促進消化功能動物實驗包括大鼠體重、體重增重、攝食量和食物利用率實驗；小腸運動實驗；消化酶的測定等三部分。1.3實驗動物根據(jù)實驗項目可選用單一性別成年小鼠或大鼠。小鼠18－22克，每組10－15只，大鼠120－150克，每組8－12只。1.4劑量分組及受試樣品給予時間實驗設(shè)三個劑量組和一個陰性對照組（或空白對照組以人體推薦量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）為其中的一個劑量組，另設(shè)二個劑量組，必要時設(shè)陽性對照組和模型對照組。受試樣品給予時間30天（小腸運動實驗受試樣品給予時間15－30天必要時可延長至45天。1.5實驗內(nèi)容1.5.1體重、體重增重、攝食量和食物利用率選用同一性別的大鼠。實驗開始時動物體重的差異應(yīng)不超過平均體重的10%。分不同劑量實驗組和陰性對照組，經(jīng)口給予受試樣品，每周測2次體重和食物攝入量。實驗結(jié)束時計算體重、體重增重、攝食量和食物利用率。1.5.2小腸運動實驗選用同一性別的小鼠，分不同劑量實驗組、空白對照組和模型對照組，模型對照組用復(fù)方地芬諾酯（或洛哌丁胺2～4mg/kgBW）造模?？捎媚蛱磕┘影⒗畼淠z作為指示劑。經(jīng)口給予受試樣品。實驗結(jié)束前禁食不禁水16小時，于測定當(dāng)天各實驗組和空白及模型對照組再給予一次受試樣品或蒸餾水，30分鐘后各實驗組和模型對照組給予復(fù)方地芬諾酯（0.025%－0.05%空白對照組給予蒸餾水，30分鐘后各組再給予指示劑，25分鐘后斷頸處死動物，計算墨汁推進率。按下式計算墨汁推進率：墨汁推進長度（cm）墨汁推進率=×100%小腸總長度（cm）1.5.3消化酶的測定選用同一性別的大鼠。分不同劑量實驗組和陰性對照組，實驗開始時動物體重的差異應(yīng)不超過平均體重的10%。經(jīng)口給予受試樣品。實驗結(jié)束前各組動物禁食不禁水24小時，采用乙醚（或異氟烷）麻醉大鼠幽門結(jié)扎法收集一定時間內(nèi)排出的胃液，測定單位時間內(nèi)胃液量。取胃液1mL放入50mL的三角燒瓶中，加入0.05mol/L鹽酸溶液15mL搖勻，放入新鮮制作的蛋白管兩根。塞好瓶口，在37℃恒溫箱中孵育24小時，取出蛋白管，用尺測量蛋白管兩端透明部分的長度（mm以四端之值求其平均值。計算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性單位(μ/mL）＝四端蛋白管透明部分長度均值2×16胃蛋白酶排出量(μ/h）＝胃蛋白酶活性×每小時胃液量1.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定計量資料可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結(jié)論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。食物利用率和墨汁推進率資料需進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，X＝Sin-1p，式中P為食物利用率和墨汁推進率，用小數(shù)表示，然后再進行方差分析。1.6.1體重、體重增重、攝食量和食物利用率實驗組與陰性對照組比較，體重、體重增重、攝食量三項指標(biāo)中任一指標(biāo)增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，且食物利用率與陰性對照組比較不明顯降低，可判定該實驗結(jié)果陽性。1.6.2小腸運動實驗在模型成立的前提下，實驗組與模型對照組比較，墨汁推進率增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該實驗結(jié)果陽性。1.6.3消化酶的測定實驗組與陰性對照組比較，胃液量、胃蛋白酶活性，胃蛋白酶排出量三項指標(biāo)中任一指標(biāo)增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該實驗結(jié)果陽性。結(jié)果判定動物體重、體重增重、攝食量、食物利用率，小腸運動實驗和消化酶測定三方面中任二方面實驗結(jié)果陽性，可判定該受試樣品動物實驗結(jié)果陽性。2.人體試食試驗根據(jù)不同受試樣品適應(yīng)人群的區(qū)別，有助于消化人體試食試驗建立兩套試食試驗方案，即針對適應(yīng)人群主要為兒童的兒童方案和適應(yīng)人群主要為成人的成人方案。2.1兒童方案2.1.1受試者納入標(biāo)準(zhǔn)：受試者選擇由單純飲食不佳造成的體重在同齡平均正常體重值小于1個標(biāo)準(zhǔn)差以內(nèi)，伴有食欲低下、食量減少、偏食等消化不良表現(xiàn)的4－10歲兒童。2.1.2受試者排除標(biāo)準(zhǔn)2.1.2.1急、慢性腹瀉者。2.1.2.2糞便常規(guī)檢查蟲卵陽性者。2.1.2.3合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等全身性疾病者。2.1.2.4短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對結(jié)果判斷者。2.1.2.5未堅持服用受試樣品者。2.1.3試驗設(shè)計及分組要求采用自身和組間兩種對照設(shè)計。按受試者體重、血紅蛋白、進食量等隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、家庭經(jīng)濟水平等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。每組受試者有效例數(shù)不少于50例。2.1.4受試樣品的劑量和使用方法試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對照組可服用安慰劑或具有同樣作用的陽性物。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。按盲法進行試食試驗。試驗期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。2.1.5觀察指標(biāo)2.1.5.1安全性指標(biāo)2.1.5.1.1一般體格檢查：試驗前應(yīng)詢問和查閱受試兒童健康卡片，了解受試兒童的睡眠、精神情況。對所有兒童進行常規(guī)體格檢查。2.1.5.1.2血常規(guī)：紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)。2.1.5.1.3尿常規(guī)：比重、pH值、白細(xì)胞。2.1.5.1.4糞便常規(guī)：蟲卵檢查（試食開始前檢查一次）。2.1.5.2功效性指標(biāo)2.1.5.2.1食欲：分為食欲佳，食欲可，食欲差三級。2.1.5.2.2進食量：采用3天膳食調(diào)查法。記錄試食開始前和試食結(jié)束前3天各受試兒童的總進食量（包括主食、副食、蔬菜和水果以連續(xù)3天觀察計算出1天平均的進食量。2.1.5.2.3偏食：分為無偏食，中等偏食，偏食三級。2.1.5.2.4體重測量和血紅蛋白含量的測定：測定試食前后的體重和血紅蛋白變化。2.1.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定試驗數(shù)據(jù)為計量資料，可用t檢驗進行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗。2.1.6.1食欲改善：食欲評價分為食欲佳（進餐時有食欲，喜歡吃飯，3分食欲可（進餐時能吃飯但比同齡兒童少，2分食欲差（進餐時不愿吃飯，比同齡兒童明顯減少，1分）三級。試食前后試食組自身比較，食欲評分明顯增加，試食后試食組與對照組比較，食欲評分或其試驗前后的差值增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該指標(biāo)陽性。2.1.6.2進食量改善：試食前后試食組自身比較進食量明顯增加，試食后試食組與對照組比較，進食量或其試驗前后的差值增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該指標(biāo)陽性。2.1.6.3偏食改善：偏食評價分為無偏食（進餐時不挑食，3分中等偏食（進餐時挑食但在勸說下能進食，2分偏食（進餐時挑食嚴(yán)重，在勸說下仍不進食，1分）三級。試食前后試食組自身比較，偏食評分明顯增加，試食后試食組與對照組比較，偏食評分或其試驗前后的差值增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定該指標(biāo)陽性。2.1.6.4體重測量和血紅蛋白含量的測定試食前后試食組自身比較，體重或血紅蛋白明顯增加，試食后試食組與對照組比較，體重或血紅蛋白明顯增加，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性，可判定體重或血紅蛋白指標(biāo)陽性。2.2成人方案2.2.1受試者納入標(biāo)準(zhǔn)選擇功能性消化不良，伴有長期胃腸不適，主訴食欲不振，早飽、氣多，胃腸脹滿，嘔吐，不明原因慢性腹瀉或大便秘結(jié)等自愿受試者。2.2.2受試者排除標(biāo)準(zhǔn)2.2.2.1急性腹瀉者。2.2.2.2嚴(yán)重器質(zhì)性病變引起的消化不良者。2.2.2.3體質(zhì)虛弱無法接受試驗者。2.2.2.4合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重全身性疾病患者。2.2.2.5短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷者。2.2.2.6未按要求服用受試樣品，無法判斷試食結(jié)果者。2.2.3試驗設(shè)計及分組要求采用自身和組間兩種對照設(shè)計。按受試者的消化癥狀輕重隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別、病程等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。每組受試者有效例數(shù)不少于50例。2.2.4受試樣品的劑量和使用方法試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對照組用安慰劑或空白對照，也可用具有同樣作用的陽性物。受試樣品給予時間30天，必要時可延長至45天。試驗期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。2.2.5觀察指標(biāo)2.2.5.1安全性指標(biāo)2.2.5.1.1一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等2.2.5.1.2血、尿便常規(guī)檢查2.2.5.1.3肝、腎功能檢查2.2.5.1.4胸片、心電圖、腹部B超檢查（在試驗開始前檢查一次）2.2.5.2功效性指標(biāo)2.2.5.2.1臨床癥狀觀察：準(zhǔn)確記錄受試者試驗前后的臨床癥狀，按下表給予量化評分，比較試驗前后癥狀積分的變化。2.2.5.2.2胃/腸運動試驗：所有受試者在試驗前、試驗結(jié)束時均進行胃/腸運動檢查，推薦用鋇條透視法（在進食的條件下檢查）。2.2.6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定試驗數(shù)據(jù)為計量資料，可用t檢驗進行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗；若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗；但變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應(yīng)用秩和檢驗。表臨床癥狀積分癥狀輕（1分）中（2分）重（3分）腹痛持續(xù)時間短，不需服藥疼痛時間較長，每日超4小時，尚能忍受疼痛較重，持續(xù)，需服藥才能減輕間有發(fā)作經(jīng)常發(fā)作，引及兩脅不適頻繁發(fā)作，引及兩脅疼痛泛酸偶有吐酸飲食不適即吐酸頻繁吐酸腹脹腹脹在短時間內(nèi)較甚腹脹較甚，在較長時間內(nèi)不緩解整日腹脹食欲食欲差，飯量減少1/2~2/3無食欲，飯量減少2/3腹瀉或便秘偶有腹瀉或便秘飲食不適即腹瀉或便秘頻繁腹瀉或便秘2.2.6.1臨床癥狀結(jié)果判定試食前后試食組自身比較及試食后試食組與對照組組間比