集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)微生物檢驗技術(shù)

主題室內(nèi)空氣中的微生物微生物在空氣中的傳播集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)微生物衛(wèi)生指示菌的檢測室內(nèi)空氣中的微生物1、來源人的生命活動人的勞作活動室內(nèi)環(huán)境地面來源2、傳播附著于塵埃附著于鼻腔和口腔噴出的飛沫小滴上附著于飛沫表面蒸發(fā)后所形成的“飛沫核”上3、種類分類舉例細(xì)菌革蘭氏陰性細(xì)菌耶爾森氏菌屬鼠疫耶爾森氏菌軍團(tuán)菌屬嗜肺軍團(tuán)菌腸桿菌科克雷伯氏菌，枸櫞酸桿菌，變形桿菌鮑特菌屬百日咳桿菌革蘭氏陰性厭氧無芽孢桿菌無菌性肺炎立克次氏體Q熱立克次氏體衣原體鸚鵡熱衣原體革蘭氏陽性細(xì)菌葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌鏈球菌屬肺炎鏈球菌分枝桿菌屬結(jié)核分枝桿菌棒狀桿菌屬白喉棒狀桿菌需氧芽孢桿菌屬炭疽桿菌支原體肺炎支原體真菌（酵母菌、霉菌）青霉屬、枝孢菌屬、曲霉屬、金黃擔(dān)子屬、鏈格孢屬等病毒RNA病毒小RNA病毒科柯薩奇病毒?？瞬《颈遣《竟跔畈《究迫撕粑拦跔畈《菊巢《究屏鞲胁《靖闭巢《究迫傺撞《?，麻疹病毒，副流感病毒DNA病毒腺病毒科腺病毒動物塵螨等原生動物、昆蟲肢體殘留物植物花粉集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)微生物衛(wèi)生指示菌的檢測冷卻水、冷凝水中的嗜肺軍團(tuán)菌空調(diào)送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、β-溶血性鏈球菌空調(diào)風(fēng)管表面細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)中央空調(diào)與軍團(tuán)病世界上的多起軍團(tuán)病的暴發(fā)與中央空調(diào)冷卻塔有關(guān)。冷凝水同樣為軍團(tuán)菌的生長提供一個適宜的環(huán)境。軍團(tuán)菌伯杰氏細(xì)菌分類最新歸為一個科，一個屬，共有42個種，60多個血清型。其中有22種是從病人分離的。嗜肺軍團(tuán)菌占22種引發(fā)病例的絕大多數(shù)（90%）。米克戴德軍團(tuán)菌占6-8%，其它約占2%。另外較主要的還有博茲曼軍團(tuán)菌、杜莫夫軍團(tuán)菌、長灘軍團(tuán)菌、約旦軍團(tuán)菌、高爾曼軍團(tuán)菌、非利軍團(tuán)菌、阿尼沙軍團(tuán)菌、詹姆斯敦軍團(tuán)菌、紅光軍團(tuán)菌及橡樹嶺軍團(tuán)菌等。嗜肺軍團(tuán)菌目前已發(fā)現(xiàn)有15個血清型，從病人分離最多的是1型。軍團(tuán)菌分布

極其廣泛，但都與水有關(guān)。野外的池、溪、河、泉水都能分離出此菌，在生活環(huán)境中的自來水、貯水箱水、淋浴水、桑拿浴水、鍋爐房排氣管的冷凝水中都有此菌存在。特別是空調(diào)系統(tǒng)冷卻塔、循環(huán)貯水池、冷凝水幾乎是此菌的“長住地”。軍團(tuán)菌抵抗力

在無芽孢細(xì)菌中此菌屬對自然環(huán)境因素抵抗力較強(qiáng)。能在自然水體和空調(diào)、水暖設(shè)備的水中長期存活。在普通自來水中可存活400天以上，在60℃左右甚至在火山口附近的水塘里都能發(fā)現(xiàn)軍團(tuán)菌的蹤跡。波恩大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)該菌是醫(yī)院下水道的“生物膜”組成成分之一。對常用消毒劑敏感。軍團(tuán)菌生物學(xué)性狀革蘭氏染色陰性桿菌，無芽孢、無莢膜，菌體大小為0.3-0.9X2-20微米，有一至數(shù)根極或次極鞭毛，其細(xì)胞壁中側(cè)鏈脂肪酸占有高比例（80%-90%，一般為20%），這點(diǎn)與其它革蘭氏染色陰性桿菌不同。軍團(tuán)菌培養(yǎng)物特性1、軍團(tuán)菌的生長繁殖，除一般細(xì)菌要求的營養(yǎng)外，需要半胱氨酸和鐵鹽。2、鈉對其生長不利。3、對PH的要求嚴(yán)格，培養(yǎng)接種前培養(yǎng)基的PH要控制在6.9～7.0。（有機(jī)緩沖劑ACES，PH很穩(wěn)定，不用調(diào)都可以。）4、最適生長溫度35℃，生長溫度范圍25～42℃。培養(yǎng)物特性5、專性需氧6、代謝很慢7、菌落特點(diǎn)通常在3天（72小時）可見小菌落，4天（96小時）則發(fā)育成圓形，邊緣整齊，表面稍隆起，光滑、濕潤，在黑色培養(yǎng)基的背景下，呈乳白色微帶藍(lán)灰的典型軍團(tuán)菌菌落，此時菌落直徑一般可達(dá)2～３mm。菌落有光澤，粘稠，用接種環(huán)可拉起粘絲。培養(yǎng)物特性軍團(tuán)菌屬的典型生物學(xué)共性有8項：BCYE瓊脂上生長；血瓊脂上不生長；革蘭氏染色陰性；生長需要L-半胱氨酸；硝酸鹽還原陰性；脲酶陰性；不發(fā)酵糖；過氧化氫酶陽性軍團(tuán)菌的檢驗程序

采樣樣品富集樣品處理

BCYEα或GVP瓊脂平板上兩天以后生長的菌落作G染色次日生長的菌落棄去球菌和G+桿菌都不是軍團(tuán)菌G-桿菌

缺半胱氨酸的BCYEα瓊脂BCYEα瓊脂

生長的不是軍團(tuán)菌不生長生長

極可能是軍團(tuán)菌,應(yīng)作玻片凝集及全面鑒定

軍團(tuán)菌的檢驗程序1、采樣2、富集：膜過濾法、離心法3、處理：直接涂布、酸處理、熱處理4、鏡下觀察：（菌落形態(tài)、革蘭氏染色）5、菌落驗證6、鑒定顯微鏡觀察菌落生長情況，初步在BCYE瓊脂培養(yǎng)基上生長的菌落為毛玻璃樣，具有多型性，一般革蘭氏染色不易著色的陰性小桿菌。軍團(tuán)菌病的流行病學(xué)傳染源：被污染的各種水源。傳播途徑：含軍團(tuán)菌的氣溶膠通過空氣由人直接吸入肺泡發(fā)病，這是傳播軍團(tuán)菌病最主要的形式。但只<5um的氣溶膠微粒才能進(jìn)入肺泡引起發(fā)病。能產(chǎn)生氣溶膠的情況有許多，較重要的是空調(diào)冷卻塔，已證明這是多次軍團(tuán)菌病爆發(fā)流行的污染源。生活飲用供水系統(tǒng)帶菌也已證明是許多醫(yī)源性爆發(fā)流行的來源。因軍團(tuán)菌病從人到人的傳播從未發(fā)生過，故本病無需隔離。軍團(tuán)菌病的流行病學(xué)易感人群：一般來說，生活用水中污染了軍團(tuán)菌，對于免疫力正常的健康人，其感染軍團(tuán)菌的危險性是很小的。但如果菌株的毒力增強(qiáng)，或者年老體衰者或有慢性消耗性疾病等抵抗力低下的人，尤其是細(xì)胞免疫力低下者（如各種癌癥、腎衰、器官移植患者、愛滋病等），即引起發(fā)病或流行。

現(xiàn)認(rèn)為軍團(tuán)病是人畜共患病。

流行季節(jié)：夏、秋季（６－１０月）軍團(tuán)菌病的流行病學(xué)發(fā)病率：WHO估計為12/10萬，醫(yī)源性肺炎占第二位，25%，CAP歐盟資料約10%。

死亡率：未經(jīng)正確治療時高達(dá)20%。

本病分布于全世界，但流行和散發(fā)病例多見于美、歐各國。軍團(tuán)菌病軍團(tuán)菌病，共有2種臨床類型a、輕型Pontiacfeverb、重癥肺炎型軍團(tuán)病的一般臨床癥狀特征咳嗽90%發(fā)熱99%呼吸困難50%胸痛35%頭痛35%肌肉疼痛35%腹瀉35%神經(jīng)癥狀35%軍團(tuán)菌病的預(yù)防和治療

特效藥：紅霉素、利福平、阿奇霉素等脂溶性高的抗生素

只有能穿透細(xì)胞膜而達(dá)到胞內(nèi)高濃度的抗生素才有治療作用。

預(yù)防措施唯有加強(qiáng)水源管理，因為沒有疫苗，空氣傳播也難以控制。

化學(xué)消毒劑：長期高濃度才有效，但易腐蝕管道，只消毒表面。如二氧化氯等。物理消毒：如紫外照射法，熱沖洗法等。生物消毒劑：目前最好方法，其消毒效果好，但費(fèi)用高。一些國家關(guān)于軍團(tuán)軍控制值的規(guī)定各類標(biāo)準(zhǔn)水中軍團(tuán)菌安全值的規(guī)定歐洲E.W.G.L.標(biāo)準(zhǔn)冷卻塔系統(tǒng)：軍團(tuán)菌≤1，000cfu/l總菌數(shù)≤10000cfu/ml荷蘭自來水標(biāo)準(zhǔn)自來水系統(tǒng)：軍團(tuán)菌≤50cfu/l新加坡標(biāo)準(zhǔn)冷卻塔、噴泉系統(tǒng)：軍團(tuán)菌≤10，000cfu/l日本厚生勞動省標(biāo)準(zhǔn)溫泉水標(biāo)準(zhǔn)：軍團(tuán)菌≤100cfu/l澳大利亞標(biāo)準(zhǔn)冷卻塔系統(tǒng)：軍團(tuán)菌≤10，000cfu/l總菌數(shù)≤100000cfu/ml中國大陸衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)冷卻水、冷凝水：嗜肺軍團(tuán)菌不得檢出β-溶血性鏈球菌定義：經(jīng)（35~37）℃，（24~48）h培養(yǎng)，在血平板上形成呈灰白色，表面突起直徑的細(xì)小菌落，菌落透明或半透明，表面光滑有乳光；菌落周圍有明顯的（2~4）mm界限分明、完全透明的的無色溶血環(huán)。鏡檢為革蘭氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列。β-溶血性鏈球菌β-溶血性鏈球菌屬鏈球菌屬，血清型為A、B、C、E、F、G、H、K、L、M、O、P、Q、R、S、T（C多糖體分型），其中對人致病菌約90%屬A群。注意與甲型和丙型鏈球菌的區(qū)分?？照{(diào)送風(fēng)中的細(xì)菌總數(shù)定義用儀器法采集集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中的細(xì)菌，計數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)35~37℃、48小時培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，以每立方米空氣中菌落形成單位（cfu/m3)報告?？照{(diào)送風(fēng)中的真菌總數(shù)定義用撞擊式空氣采樣器法采集室內(nèi)空氣，計數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28℃(5~7)天培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)，換算為每立方米室內(nèi)空氣中真菌總數(shù)，以cfu/m3報告?？照{(diào)風(fēng)管細(xì)菌總數(shù)和真菌總數(shù)檢測原理：通過擦拭法或機(jī)器人采樣法，采集風(fēng)管表面單位面積(50cm2)的微生物，得出空調(diào)風(fēng)管細(xì)菌總數(shù)和真菌總數(shù)，以cfu/m2報告空調(diào)風(fēng)管細(xì)菌總數(shù)和真菌總數(shù)檢測樣品分析1、刮拭法：將采集的積塵樣品無菌操作稱取1g，加入到0.01%Tween-80水溶液中,做10倍梯級稀釋,取適宜稀釋液1mL傾注法接種平皿。2、擦拭法：將擦拭物無菌操作加入加入到0.01%Tween-80水溶液中,做10倍梯級稀釋,取適宜稀釋液1mL傾注法接種平皿。公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范