1《大豆莖潰瘍病菌檢疫鑒定方法》編制說明民共和國思茅海關(guān)、中華人民共和國寧波海關(guān)。主要起草人：吳品珊、雷榮、大豆莖潰瘍病菌分為大豆北方莖潰瘍病菌（Diaporthecaulivora(Athow&Caldwell)Santos,Vrandecic&Phillips）和大豆南方莖潰瘍病菌（Diaporthe），％，目前我國有關(guān)大豆莖潰瘍病菌檢疫鑒定的標(biāo)準(zhǔn)只有兩項行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，分別是2研究病菌的等溫核酸RPA檢測等快速檢測方法，RPA（重組酶聚合酶擴增多次試驗后確定，選用準(zhǔn)確和穩(wěn)定的分離培養(yǎng)、常規(guī)PCR、實時熒光PCR、式、內(nèi)容、術(shù)語表達方式等進行了深入的學(xué)習(xí)，并根據(jù)GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化3RPA/CRISPR-Cas12a熒光法（孫夕雯、雷榮、吳品珊等，Rapidandsensitivedetectionoftwofungalpathogensinsoybeansuamplification/CRISPR-Cas12amethod）；探針DM-Pro（許忠祥等RPA/CRISPR-Cas12a熒光法特4叢生致密；病菌具淺色至深色圓形的子座，直徑小于2在整個培養(yǎng)介質(zhì)中；子囊殼黑色，球形，大小1柄，大小30~40×4~7(μm)，透明，長圓至橢圓形，雙細胞，分隔處稍縊縮，每個細胞具雙油球，大×3~4(μm)；病菌的無性態(tài)為擬莖點霉Phomopsis×253.3~348.1(μm)，具長而突出的喙，喙長為731.0~1063.0(μm)；子囊大小54.3.2大豆南方莖潰瘍PCR、實時熒光PCR擴增和和重組酶聚合酶擴增（RecombinasePolymerase673.2分子檢測方法驗證81Diaporthecaulivora2Diaporthecaulivora3Diaporthecaulivora4Diaportheaspalathi5Diaportheaspalathi6Diaportheaspalathi7Diaporthehelianthi8Leptosphaerialindquistii9PhytophthorasojaeLeptosphaeriamaculansLeptosphaeriabiglobosa3.2.1大豆北方莖潰瘍DiaporthDPCF4（5′-GCCCCCTTGGGGGCCCCCC9bpbp-bp-bp-bp-bp-bp-750250339bp特異性引物DC2F：5'-AGAACCAAGAGATCCGTTGTDC2R：5'-CCGGCGGCCAAGCTA-3'探針DC2Pb：5'-(FAM)-CATTTATGTTTATTTCTCAGAGTTT-(MProbeqPCRSuperMix(北京全式金生物技術(shù)股熒光強度（a.u.)熒光強度（a.u.)3循環(huán)數(shù)反向引物DC-Cas-R：5'-CGACGGDC-crRNA:5'-UAAUUUCUACUCUUGUAGAUCGCCGCAUCAUCACACCUGG-3'DC-Cas-F/DC-Cas-R(10μmol/L)各2.4μL，DNA模板(1~10ng)2μL熒光強度(a.u.)熒光強度(a.u.)y2(3)w,4-11x-10x時間(min)熒光強度（a.u.)熒光強度（a.u.)y41234-10w時間(min)x3.2.1大豆南方莖潰瘍DiaportheaspalDM-R3（5'-GCAGGCCGGCCCCCCCAG-3'）min。bpbp-bp-bp-bp-bp-bp-750250394bp實時熒光PCR有兩對特異性引物和探針，特異性引物DM1F：5'-AGGCGCACCCAGAAADM1R：5'-TTTTGCTCAGAGTTTCGGTGTAAA-3'探針DM1Pb：5'-(FAM)-TGAACTCATACCTTACTGTTG-(熒光強度（a.u.)?熒光強度（a.u.)456循環(huán)數(shù)特異性引物DMF：5'-ACCGCCAGGGCDMR3：5'-GCAGGCCGGCCCCCCCA探針DM-Pro：5'-(FAM)-AGGGCCTGCCCTTCT熒光強度（a.u.)熒光強度（a.u.)4循環(huán)數(shù)5'-UAAUUUCUACUCUUGUAGAUCGCCGCGUCGCCACy440wwCAGTCCACCACGAGACCCCTTGCGTGCAGCCGCCGCGTCGCCACAC-C3spacer-3’熒光強度(a.u.)熒光強度(a.u.)4y564wx