關(guān)于絨毛膜羊膜炎早產(chǎn)子宮平滑肌、胎膜內(nèi)皮素-1受體表達對早產(chǎn)的影響

【摘要】目的探討絨毛膜羊膜炎子宮平滑肌、胎膜內(nèi)皮素-1受體(ETA)表達對早產(chǎn)的影響。方法早產(chǎn)孕齡28~36周60例，根據(jù)胎盤病理分為早產(chǎn)感染組孕婦30例，早產(chǎn)非感染組孕婦30例，對照組為同期正常足月產(chǎn)(37~41周妊娠)孕婦30例;所有病例均在剖宮產(chǎn)術(shù)前取子宮下段平滑肌和胎膜，利用免疫組織化學(xué)染色法結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測臨產(chǎn)后ETA在子宮平滑肌、胎膜上的表達。結(jié)果早產(chǎn)感染組孕婦子宮平滑肌細胞、胎膜細胞ETA表達顯著高于早產(chǎn)非感染組和正常足月組，差異均有顯著性(P<0.01);早產(chǎn)非感染組孕婦ETA水平雖高于正常足月組，但差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論絨毛膜羊膜炎能引起孕母子宮平滑肌、胎膜細胞ETA表達顯著升高?！娟P(guān)鍵詞】早產(chǎn);絨毛膜羊膜炎;子宮平滑肌;胎膜;內(nèi)皮素-1受體[Abstract]ObjectiveToobservetheexpressionofendothalinreceptorAinmyometriumandfetalmembraneofpretermlaborcausedchorioamnionitis.MethodsPatientsofpretermlabor(28~36weeks)，60inall，werepidedintopretermlaborinfectiousgroupwithchorioamnionitis(n=30)andpretermlabornoninfectiousgroupwithoutchorioamnionitis(n=30)acorrdingtoplacentalpathologicalresults.Meanwhile，gravidawomen(28~36weeks，n=30)arethecontrolgroup.Allgroupsweredrawnthemyometrium，fetalmembraneduringthecourseofcesarean.Withimmunohistochemitryandimage-analysissystem，theexpressionlevelsofETAweredetectedontissuesofthemyometrium，fetalmembraneregionsinunit.ResultsComparedwiththepretermlabornoninfectiousgrouporthegravidawomen，theexpressionlevelsofETAwashigher(P<0.01)inthepretermlaborinfectiousgroup.ConclusionTheauthorsarguedthatchorioamnionitiswouldplayimportantrolesinsteppinguptheexpressionlevelsofETAonthemyometrium，fetalmembraneregions.[Keywords]pretermlabor;chorioamnionitis;myometrium;fetalmembrane;endothalinreceptorI早產(chǎn)是常見而又復(fù)雜的妊娠并發(fā)癥，病因較多，其中由各種微生物引起的絨毛膜羊膜炎與感染性早產(chǎn)的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是誘發(fā)早產(chǎn)引起圍產(chǎn)兒患病及死亡的主要原因之一[1];如能闡明其誘發(fā)機制，將對臨床預(yù)防和治療感染性早產(chǎn)有一定的意義。據(jù)報道，絨毛膜羊膜炎早產(chǎn)發(fā)生時能使孕母血清中細胞間粘附分子-1(sICAM-1)含量增高[2]、組織胎盤中細胞因子白細胞介素-6(IL-6)mRNA表達升高[3]等，但其導(dǎo)致感染性早產(chǎn)的分子機制尚未完全明確。內(nèi)皮素-1(endothalinreceptorA，ET-1)是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的活性肽類物質(zhì)，在分娩發(fā)動中有著不可忽視的作用，能刺激子宮平滑肌收縮及增加胎膜等組織合成前列腺素類物質(zhì)(能刺激子宮強烈收縮);但必須通過與其受體ETA結(jié)合以后才能發(fā)揮作用。那么絨毛膜羊膜炎誘發(fā)的感染性早產(chǎn)發(fā)生時，孕母子宮平滑肌、胎膜內(nèi)ETA的表達是如何變化的呢?國內(nèi)外文獻尚未報道。為此，本研究以絨毛膜羊膜炎早產(chǎn)孕母為研究對象，通過檢查子宮平滑肌、胎膜內(nèi)ETA的表達變化，闡述其發(fā)生關(guān)系，為臨床探討絨毛膜羊膜炎致早產(chǎn)發(fā)生的分子生物學(xué)機制提供一定的理論依據(jù)。1資料與方法1.1研究對象選取2009年1—12月在寶豐婦幼保健院產(chǎn)科分娩的早產(chǎn)孕婦60例，正常足月分娩的孕婦30例，均行分娩后胎盤病理學(xué)檢查。(1)早產(chǎn)組：孕周為28~36周，單胎，分娩方式為臨產(chǎn)后因產(chǎn)程異?；蛱壕狡刃衅蕦m產(chǎn)術(shù)。分早產(chǎn)感染組30例和早產(chǎn)非感染組30例。(2)正常足月組：孕周為37~41周，單胎，分娩方式因產(chǎn)科手術(shù)指征或社會因素行剖宮產(chǎn)術(shù)。上述均排除前置胎盤、多胎妊娠、胎盤早剝、妊娠期高血壓疾病、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥以及妊娠合并內(nèi)外科疾病。1.2試劑與儀器RabbitAnti-ETA、SABC免疫組化試劑盒(編號：SA1020)(武漢博士得生物工程有限公司);LEICA-200圖像分析儀(德國LEICAMICROSYSTEMSLTD)。1.3方法1.3.1標本采集剖宮產(chǎn)時，在胎盤娩出、宮體及全身未用宮縮劑前，在子宮下段橫切口上方中段無菌切取子宮平滑肌組織約1cm×1cm×0.2cm，無菌剪取胎膜組織約2cm×2cm，兩份標本均用生理鹽水沖凈表面血液，立即置入4%多聚甲醛緩沖液。1.3.2免疫組化染色檢測ETA表達子宮平滑肌、胎膜組織按免疫組化染色方法固定、脫水、包埋、冠狀切片，片厚4mm。然后選取組織結(jié)構(gòu)完整的切片，每間隔20mm取一張，每個標本取3張，按免疫組織化學(xué)染色試劑盒操作進行染色。Leica-200細胞圖像分析系統(tǒng)觀察ETA免疫反應(yīng)產(chǎn)物，并在同區(qū)相同光學(xué)條件下各取3個視野拍照(400倍)，Image-ProPlus軟件計算每張照片的平均OD值。1.3.3結(jié)果判定光鏡下細胞膜、細胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞必需結(jié)構(gòu)清晰、定位好，著色明顯高于背景。1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計所得數(shù)據(jù)均用SPSS16.0軟件統(tǒng)計處理。所有數(shù)據(jù)用x±s表示。2結(jié)果在子宮平滑肌、胎膜組織，鏡下可見ETA免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈淺黃色或棕黃色顆粒狀沉積;定量結(jié)果顯示，早產(chǎn)感染組與早產(chǎn)非感染組比較，ETA的平均OD值均明顯升高(P<0.01);而早產(chǎn)非感染組與正常足月組類同(P>0.05)(詳見表1、圖1)。表1免疫組化檢測子宮平滑肌、胎膜組織ETA平均OD值比較3討論絨毛膜羊膜炎是病原體進入羊膜腔引起羊水、胎膜(羊膜、絨毛膜)、胎盤的感染，又稱羊膜腔感染或?qū)m內(nèi)感染，能致感染性早產(chǎn)，是圍生兒、產(chǎn)婦的發(fā)病率、死亡率升高的主要原因。深入研究絨毛膜羊膜炎致感染性早產(chǎn)的分子生物機制，有助于為臨床的預(yù)防和治療提供新的思路;但由于其機制涉及大量細胞因子、受體的參與、釋放等，國內(nèi)外學(xué)者對其認識不一。而本實驗通過免疫組織化學(xué)染色及圖像分析方法，對以上各組孕母子宮平滑肌、胎膜內(nèi)ETA表達的檢測;發(fā)現(xiàn)在絨毛膜羊膜炎致感染性早產(chǎn)孕母子宮平滑肌、胎膜內(nèi)，ETA的表達顯著高于早產(chǎn)非感染組及正常足月組。有些作者認為：當(dāng)孕母宮內(nèi)發(fā)生絨毛膜羊膜炎感染時，絨毛膜細胞能分泌大量的炎性細胞因子[4~6]，促使子宮平滑肌功能提前激活[7]，大量增多的ETA能與母血中高濃度的ET-1特異結(jié)合，激活蛋白激酶C(PKC)，引起子宮平滑肌細胞Ca2+大量內(nèi)流，胞漿內(nèi)急劇升高的Ca2+誘發(fā)了子宮收縮。本實驗證實了早產(chǎn)感染組ETA在胎膜組織中的顯著表達，而羊水中又有高水平的ET-1[8]，二者特異結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，刺激羊膜中前列腺素前身物質(zhì)的生成，使局部產(chǎn)生前列腺素(PGs，能刺激子宮強力收縮[9])增多;且已證實，PGs又可通過胎膜組織轉(zhuǎn)運到子宮平滑肌，那么子宮平滑肌內(nèi)PGs的大量積累可誘發(fā)子宮收縮。筆者認為，早產(chǎn)感染組子宮平滑肌、胎膜內(nèi)ETA異常增高的表達，誘發(fā)了子宮強有力的收縮，致分娩發(fā)動提前，可能是引起感染性早產(chǎn)的原因之一。但迄今為止，感染性早產(chǎn)的發(fā)生分子機制還是一個未闡明的醫(yī)學(xué)問題，且與妊娠相關(guān)的激素和細胞因子都可能參與其中，本實驗證實ETA的異常增高的表達，通過哪種途徑調(diào)節(jié)，有待進一步研究。(本文圖片見封三)【2UrbanR，LemancewiczA，UrbanJ，etal.EvaluationofserumsICAM-1andsIVAM-1concentrationinpatientatriskofpretermdelivery.GinekolPol，2003，74：1325-1328.3細胞因子IL-6mRNA與IL-10mRNA在早產(chǎn)合并絨毛膜羊膜炎胎盤組織中的表達水平及意義.實用婦產(chǎn)科雜志，2007，23(3)：167-169.4MenonR，LombardiSJ，F(xiàn)ortunatoSJ.TNF-alphapromotescaspaseactivationandapoptosisinhumanfetalmembranes.JAssistReprodGenet，2002，9(4):201-204.5王紹娟，樂杰.母血細胞因子與絨毛膜羊膜炎關(guān)系的研究.實用婦產(chǎn)科雜志，2004，20(1)：40.6WeiyuanZ，LiW.Studyofinterleukin-6andtumornecrosisfactor-alphalevelsinmaternalserumandamnioticfluidofpatientswithprematureruptureofmembranes.JPerinatMed，1998，26:491.7ChallisaJRG，SmithSKF.EndothelinSignalsandPretermLabor.BiolNonate，2001，79(1)：163-167.8UsukiS，SaitohT，SawamuraT，etal.Increasedmaternalplasmaconcentrationofendothelin-1duringlaborpa