固相萃取——液相色譜法測(cè)定水中毒死蜱等3種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留摘要本試驗(yàn)通過固相萃取-高效液相色譜的方法，檢測(cè)了水中三種農(nóng)藥殘留，并且通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，最后選擇出最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件，采取C18作為固相萃取劑，乙酸乙酯為洗脫劑，最后進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)分析時(shí)選用了C18反相色譜柱。結(jié)果表明可以用這個(gè)方法來對(duì)水中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)。關(guān)鍵詞固相萃取—液相色譜法、丙溴磷、三唑磷、毒死蜱AbstractInthisexperiment,threepesticideresiduesinwaterweredetectedbysolidphaseextraction-highperformanceliquidchromatography(SPE-highperformanceliquidchromatography),andtheoptimalexperimentalconditionswereselectedthroughoptimizationexperiments.C18wasusedassolidphaseextractionagent,ethylacetateaseluent,andC18reversedphasechromatographiccolumnwasselectedforhighperformanceliquidchromatography(HPLC)detectionandanalysis.Theresultsshowthatthismethodcanbeusedtodetectorganophosphoruspesticideresiduesinwater.KeywordsSolidphaseextraction-liquidchromatography,propylbromide,Triazophosandchlorpyrifos丙溴磷能夠殺滅絕大多數(shù)害蟲且藥劑附著力高，是一種分子內(nèi)含有正丙硫基的硫代磷酸酯類的中等毒性殺蟲劑，丙溴磷即使是一些對(duì)農(nóng)藥有抗性的害蟲依舊可以殺滅。三唑磷是現(xiàn)在使用比較廣泛的一款殺蟲、殺螨劑，對(duì)一些對(duì)農(nóng)作物有危害的害蟲有非常好的殺滅效果。毒死蜱對(duì)棉鈴蟲有非常好的效果，是一種乙酰膽堿酯酶的抑制劑，屬于硫逐磷酸酯類的中等毒性殺蟲劑?，F(xiàn)在的農(nóng)業(yè)種植中已經(jīng)禁止使用甲胺磷、對(duì)硫磷等有機(jī)磷殺蟲劑，以上的三種殺蟲劑因?yàn)槠淞己玫臍⑾x效果，在農(nóng)業(yè)中得到了很好的利用，使用量大大增加。這三種殺蟲劑在廣泛使用之后，在水環(huán)境中會(huì)有大量的殺蟲劑殘留，嚴(yán)重的影響到了我們當(dāng)下的水質(zhì)量。但是在現(xiàn)在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，并沒有對(duì)這三種農(nóng)藥的殘留量做出明確的規(guī)定。并且在對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，大多數(shù)研究都只是針對(duì)其中一種或者兩種進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)這三種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測(cè)還沒有進(jìn)行有關(guān)的報(bào)道。本文提供了一種通過高效液相色譜法對(duì)水中這三種農(nóng)藥進(jìn)行分離，并且進(jìn)行測(cè)定的方法。實(shí)驗(yàn)部分儀器與試劑ThermoFisherU3000液相色譜儀萊伯泰科sepaths-12全自動(dòng)固相萃取儀實(shí)驗(yàn)中的色譜柱如下：其中固相萃取柱有C18(ODS)、氨基（NH2），弗洛弗羅里硅土（Florisil）。實(shí)驗(yàn)試劑中，毒死蜱、丙溴磷、三唑磷的純度分別為98.9%、96.5%、95.8%，均為標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇、乙腈為色譜純級(jí)別；丙酮、正乙烷、乙酸乙酯為優(yōu)級(jí)純級(jí)別；實(shí)驗(yàn)過程的用水均為超純水。1.2色譜條件DDS-C18色譜柱的流動(dòng)相為乙腈（13+7）溶液，每次實(shí)驗(yàn)的進(jìn)樣體積為5μl，每分鐘的流量為1.5ml，實(shí)驗(yàn)所選定的波長(zhǎng)為230nm，柱溫為40℃.1.3試驗(yàn)方法將待測(cè)水樣過濾，去除懸浮物雜質(zhì)，用2ml甲醇來活化固相萃取柱，同時(shí)將200ml的待測(cè)水樣流過固相萃取柱，水樣完全通過色譜柱后用10ml乙酸乙酯洗脫，用氮吹儀在40℃條件下用吹干濃縮后用甲醇定容至2ml，用0.22μm濾膜過濾備用。2、結(jié)果與討論2.1色譜條件的優(yōu)化2.1.1波長(zhǎng)的選擇最大吸收波長(zhǎng)的選擇：通過全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)這幾種待測(cè)試劑中在230nm波長(zhǎng)處，毒死蜱、三唑磷有最大吸收波長(zhǎng)，丙溴磷也有較大的吸收并且受到的干擾較小。因此，通過綜合考慮最大吸收波長(zhǎng)以及干擾等因素，最終選擇230nm為本次實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。2.1.2流動(dòng)相的選擇在選擇流動(dòng)相時(shí)，測(cè)定了甲醇、甲醇（6+4）、乙晴（14+6）溶液，乙晴（4+6）溶液這幾種試劑作為流動(dòng)相對(duì)幾種農(nóng)藥的分離效果。最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)選用乙晴（14+6）溶液作為流動(dòng)相時(shí)，所取得的分離效果最好，能夠很好的分離這三種農(nóng)藥，選用其他的流動(dòng)相都不能使幾種農(nóng)藥得到很好的分離。并且選用乙晴（14+6）溶液作為流動(dòng)相時(shí)產(chǎn)生峰形和其他的峰形相比相對(duì)對(duì)稱。所以，本試驗(yàn)選用的流動(dòng)相為乙腈（14+6）溶液。2.1.3流量的選擇為了確定實(shí)驗(yàn)的流量，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的流量選用了0.7ml/min、1.5ml/min、2.0ml/min三種流量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：選用的流量為0.7ml/min時(shí)，幾種農(nóng)藥的出峰時(shí)間都比較晚；當(dāng)選用2.0ml.min進(jìn)行流量分析時(shí)，實(shí)驗(yàn)時(shí)出峰速度太快，實(shí)驗(yàn)不好操作影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；當(dāng)選用1.5ml/min進(jìn)行流量分析時(shí)，不僅出峰的時(shí)間合適，并且也能較好的將這幾種農(nóng)藥分離。因此，本次實(shí)驗(yàn)所選用的流量為1.5ml/min。2.1.4標(biāo)準(zhǔn)樣品的液相色譜圖在進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，圖1為實(shí)驗(yàn)三種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中選用的幾種農(nóng)藥的極性相差比較大，實(shí)驗(yàn)過程中為了在保證幾種農(nóng)藥有較好的分離度的同時(shí)也能防止雜質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，因此在對(duì)色譜條件進(jìn)行選擇的時(shí)候所選用的農(nóng)藥保留時(shí)間均不超過十分鐘。毒死蜱丙溴磷三唑磷毒死蜱丙溴磷三唑磷 7.5102.5507.5102.550圖一標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖2.2樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化2.2.1固柱萃取柱的選擇在進(jìn)行萃取柱的選擇實(shí)驗(yàn)中，選用了C14、NH2、TPS、Florisil這四種進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。試驗(yàn)表明：當(dāng)選用NH2柱和TPS柱時(shí)作萃取柱時(shí)對(duì)三種農(nóng)藥的富集作用都比較差；Florisil萃取柱雖然對(duì)這幾種農(nóng)藥都有一定的回收效果，但是回收效果一般，回收效果最好的毒死蜱的回收率都只能達(dá)到60.8%；C18柱對(duì)毒死蜱、三唑磷、丙溴磷的回收率分別為：82.8%、79.6%、85.5%，回收率穩(wěn)定在80%左右；因?yàn)镃18柱的烷基多，萃取柱的碳含量較高，另外該萃取柱的疏水性也比較好，因此對(duì)這幾種農(nóng)藥也有了更好的保留能力。因此，本次實(shí)驗(yàn)所選用的固相萃取柱為C18柱。根據(jù)上述的實(shí)驗(yàn)，選用了C18固相萃取柱，根據(jù)其性質(zhì)以及溶液的極性，實(shí)驗(yàn)另外選取了六種洗脫劑來進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：甲醇、乙晴幾乎不能將這幾種農(nóng)藥洗脫下來；當(dāng)選用丙酮、正己烷以及丙酮-正已烷（1+1）混合洗脫作為洗脫劑的時(shí)候，對(duì)丙溴磷的回收率分別為70.0%、75.6%、55.7%，對(duì)三唑磷的回收率分別為44.0%、64.0%、33.0%；對(duì)毒死蜱的回收率分別為62.0%、64.8%、34.0%?？梢钥闯?，選用這三種洗脫劑的洗脫效果均不理想，沒有達(dá)到我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于農(nóng)藥殘留的要求。當(dāng)乙酸乙酯為洗脫劑時(shí)，對(duì)這三種農(nóng)藥均有很好的洗脫效果。因此，乙酸乙酯為本次實(shí)驗(yàn)所選用的洗脫劑。2.2.3洗脫劑用量的選擇通過上述的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，最終選擇了乙酸乙酯作為實(shí)驗(yàn)的洗脫劑，另外對(duì)乙酸乙酯的用量進(jìn)行了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，測(cè)定不同的實(shí)驗(yàn)用量對(duì)幾種農(nóng)藥的回收率影響。實(shí)驗(yàn)表明表明：當(dāng)乙酸乙酯的用量為10ml時(shí)，對(duì)這幾種農(nóng)藥的回收效果最好，回收率均超過85%，滿足對(duì)農(nóng)藥殘留的要求。因此實(shí)驗(yàn)所選用的乙酸乙酯用量為10ml。2.3方法的檢出限和測(cè)定下限分配配置三種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，使溶液的濃度為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0mg.L-1，根據(jù)以上選用的優(yōu)化條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)得出，三種農(nóng)藥在3種農(nóng)藥0.05—2.00mg.L-1濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)線性關(guān)系，結(jié)果如表1所示。實(shí)驗(yàn)的檢出限和測(cè)定下限如下表1所示，分別是通過空白樣的三倍、十倍信噪比計(jì)算而來。表1線性參數(shù)、檢出限與測(cè)定下限農(nóng)藥線性范圍ρ/mg.L-1）線性回歸方程相關(guān)系數(shù)檢出限ρ/mg.L-1）測(cè)定下限ρ/mg.L-1）毒死蜱0.05—2.0У=1.24×103Χ+6.240.9987.7×10-42.6×10-3三唑磷0.05—2.0У=1.21×103Χ+29.40.9999.9×10-43.3×10-3丙溴磷0.05—2.0У=7.30×102Χ_5.270.9971.6×10-35.2×10-3從上表可知，水中這三種農(nóng)藥的殘留量可以根據(jù)該方法測(cè)定。2.4方法的準(zhǔn)確度和精密度為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度，通過在空白水樣中添加0.05、0.10、0.50mg.L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液來進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，其相對(duì)偏差（RSD）和加標(biāo)回收率如下表所示表2精密度與回收試驗(yàn)結(jié)果（N=8）農(nóng)藥加標(biāo)量ρ/mg.L-1）回收率/%RSD/%毒死蜱0.0575.21.40.1084.31.70.5085.08.2三唑磷0.0588.00.410.1085.52.40.5089.04.0丙溴磷0.0586.60.550.1085.82.80.5089.04.2從上表的RSD和回收率可以看出，該方法的準(zhǔn)確度和精密度都比較高，可以用于對(duì)水中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)分析。2.5實(shí)際水樣的測(cè)定實(shí)驗(yàn)的待測(cè)水樣選自采集安徽省某工業(yè)園區(qū)7個(gè)采樣點(diǎn)，分別對(duì)這幾個(gè)地區(qū)的水樣進(jìn)行了這幾種農(nóng)藥殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)以及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，在測(cè)定的7個(gè)水樣中，三號(hào)水樣的檢測(cè)結(jié)果中含有三唑磷，五號(hào)水樣中檢測(cè)出了毒死蜱，其他的水平均為測(cè)出這幾種農(nóng)藥。表3水樣分析結(jié)果（N=5）序號(hào)丙溴磷三唑磷毒死蜱測(cè)定值ρ/mg.L-1回收率測(cè)定值ρ/mg.L-1回收率測(cè)定值ρ/mg.L-1回收率186.088.582.7285.085.381.8386.00.003595.182.5487.288.585.1589.589.50.002089.5688.785.783.5786.884.884.0由表3可以看出實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率均在80%以上，符合現(xiàn)在我國(guó)對(duì)于水中農(nóng)藥殘留的要求，表明可以用這種方法檢測(cè)水中這三種農(nóng)藥的殘留。本試驗(yàn)通過固相萃取-高效液相色譜的方法，檢測(cè)了水中三種農(nóng)藥殘留，并且通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，最后選擇出最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件，采取C18作為固相萃取劑，乙酸乙酯為洗脫劑，最后進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)分析時(shí)選用了C18反相色譜柱。結(jié)果表明可以用這個(gè)方法來對(duì)水中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)。本次實(shí)驗(yàn)同國(guó)家現(xiàn)有的檢測(cè)這三種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)方法相比，這種方法更加簡(jiǎn)單，可以一次性檢測(cè)出這三種農(nóng)藥的殘留量而不需要逐一檢測(cè)。在同一個(gè)條件下就可以檢測(cè)出這三種農(nóng)藥的殘留量且實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性高，因此可以廣泛運(yùn)用到現(xiàn)在的水樣中農(nóng)藥殘留檢測(cè)中。參考文獻(xiàn)程運(yùn)斌、劉育清。丙溴磷、毒死蜱30%。乳油氣相色譜分析【J】。農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究2014.4⑵9-24。李秀杰、