絲素/石墨烯/辛伐他汀復(fù)合膜對(duì)大鼠顱骨缺損骨修復(fù)量的影響及石墨烯局部應(yīng)用大鼠體內(nèi)重要臟器安全性研究目的:分析比較絲素/石墨烯/辛伐他汀復(fù)合膜(silkfibroin/grapheneoxide/Simvastatincompositemembrane,SF/GO/Sim)、絲素/石墨烯復(fù)合膜(silkfibroin/grapheneoxidecompositemembrane,SF/GO)、絲素/辛伐他汀復(fù)合膜(silkfibroin/Simvastatincompositemembrane,SF/Sim)、純絲素膜(silkfibroinmembrane,SF)促大鼠顱骨骨修復(fù)的區(qū)別,探討絲素/石墨烯/辛伐他汀復(fù)合膜對(duì)大鼠顱骨缺損骨修復(fù)的影響;觀察GO局部應(yīng)用的全身反應(yīng),對(duì)大鼠重要臟器(肝、脾、腎)進(jìn)行生物安全性評(píng)價(jià)。方法:1.選取8周齡SD(Sprague-Dawley)大鼠48只,隨機(jī)分為4組,每組12只。建立大鼠雙側(cè)顱骨5mm直徑極限骨缺損模型,實(shí)驗(yàn)組(A組)于缺損處置入SF/GO/Sim復(fù)合膜,對(duì)照組分別置入SF/GO復(fù)合膜(B組)、SF/Sim復(fù)合膜(C組)及SF膜(D組)。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一半于8周時(shí)處死,取顱骨標(biāo)本行肉眼觀察,脫鈣后行Van-Gieson病理染色(VG染色)分析骨形成情況;另一半實(shí)驗(yàn)動(dòng)物定期(術(shù)后6周、9周時(shí))腹腔注射熒光標(biāo)記物標(biāo)記新骨形成,于術(shù)后12周時(shí)全部處死,取標(biāo)本大體觀察,乙醇梯度脫水后行硬組織切片,激光共聚焦顯微鏡觀察熒光標(biāo)記情況,用ImageProPLUS(IPP)軟件測量缺損中心方向、顱外側(cè)方向新骨形成量,Van-Gieson病理染色(VG染色)分析骨形成情況。于術(shù)后12周時(shí)處死所有A、B組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并取肝、脾、腎標(biāo)本觀察,行HE組織病理染色,對(duì)局部應(yīng)用GO進(jìn)行生物安全性評(píng)價(jià)。2.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用IBMSPSSStatistics20統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理,所得數(shù)據(jù)用(?)±s表示。多組間樣本均數(shù)采用雙因素方差分析(two-wayclassificationANOVA)檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì),P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:大體觀察:各組膜材料在位良好,無膜脫落情況。8周組骨組織標(biāo)本膜邊緣模糊,缺損處質(zhì)地較軟,有一定韌性,角鑷可按壓,撤去外力按壓后回彈,實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組回彈時(shí)間短,b、c組回彈時(shí)間無明顯差異,d組質(zhì)地最軟,回彈較慢。12周組骨組織標(biāo)本膜材料與周邊骨組織緊密結(jié)合,骨缺損邊緣與膜材料邊界不清,實(shí)驗(yàn)組缺損邊緣較對(duì)照組更為不規(guī)則,缺損范圍明顯減小;缺損處質(zhì)地較硬,但不及自體骨硬度,韌性較大,角鑷用力可按壓,撤去外力按壓迅速回彈,缺損區(qū)域骨硬度觸感強(qiáng)于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組回彈時(shí)間短,但差異不明顯,b、c組回彈時(shí)間無明顯差異,快于d組。各肝、脾、腎標(biāo)本色澤及質(zhì)地?zé)o明顯異常,被膜無緊張,邊緣無水腫圓鈍情況。動(dòng)物標(biāo)本vg染色結(jié)果:8周時(shí)各組標(biāo)本都有不同程度材料殘留,實(shí)驗(yàn)a組及對(duì)照b組材料殘留較對(duì)照c、d組多。鏡下細(xì)胞數(shù)量豐富,a組纖維較對(duì)照組大,與材料接觸更為均勻,b、c組纖維較粗,d組纖維染色最細(xì)。12周時(shí)四組標(biāo)本都未見材料殘留,a、b組可見go均勻分布在視野下,各組細(xì)胞數(shù)量較8周組明顯減少;a組膠原纖維遍布整個(gè)缺損區(qū)域,交織成網(wǎng),b、c組膠原纖維呈疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),d組膠原纖維呈束狀。12周動(dòng)物標(biāo)本熒光測量結(jié)果:主要由缺損邊緣向缺損中心生長。實(shí)驗(yàn)a組向缺損中心方向及向顱外側(cè)方向的骨生長量分別為(290.546±23.256)μm、(102.014±11.196)μm,對(duì)照b組向缺損中心方向及向顱外側(cè)方向的骨生長量分別為(146.470±29.482)μm、(96.898±13.351)μm,對(duì)照c組向缺損中心方向及向顱外側(cè)方向的骨生長量分別為(155.501±13.594)μm、(94.008±25.003)μm,對(duì)照d組向缺損中心方向及向顱外側(cè)方向的骨生長量分別為(109.526±24.025)μm、(61.128±15.512)μm;向缺損中心方向辛伐他汀及氧化石墨烯的主效應(yīng)分別為95.025μm、85.994μm,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),二者有交互效應(yīng)(p<0.05);向顱外側(cè)方向辛伐他汀及氧化石墨烯的主效應(yīng)分別為18.998μm、21.888μm,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),但二者不存在交互效應(yīng)(p>0.05)。肝、脾、腎he組織病理染色結(jié)果