生物制品效力檢驗

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四、效力檢驗

獸醫(yī)生物制品的效力檢驗?zāi)康脑谟谠u定制品的實際使用價值，如疫苗和類毒素的免疫力，血清的特異性抗體效價及其抗病效力，診斷試劑的特異性、靈敏性和檢出率等。

（一）效力檢驗內(nèi)容

1.免疫原性菌(毒)種的免疫原性決定疫苗的免疫力，但在疫苗制造過程中由于處理不當(dāng)也會影響菌(毒)的免疫原性，從而影響疫苗的免疫效果。此外，有些疫苗株具有對多個血清型良好的免疫原性，而有些疫苗株則存在嚴(yán)格的特異免疫原性。

2.免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期

疫苗的免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期和菌(毒)株的性質(zhì)、抗原性有關(guān)。一般抗原性強的疫苗株對同源動物的免疫產(chǎn)生期早而免疫持續(xù)期較長。如兔出血癥組織滅活疫苗接種兔后3～4d即產(chǎn)生強免疫力，血清HI抗體滴度很高，免疫力可持續(xù)1年以上。通?？筛鶕?jù)疫苗的免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期制定出合理的免疫程序。

任何疫苗免疫動物時均需要含有一定的抗原量，才能導(dǎo)致機體對其產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而形成免疫力，此種疫苗的抗原量即為疫苗的最小免疫量。最小免疫量通常以半數(shù)保護量(PD50)或半數(shù)免疫量(ImD50)表示。在側(cè)定時，應(yīng)以菌落單位(CFU)或空斑單位(PFU)作為疫苗分裝時的劑量單位，而不是以稀釋度為標(biāo)準(zhǔn)。

（二）效力檢驗要點生物制品的效力檢驗，多數(shù)采用動物、培養(yǎng)或免疫血清學(xué)等方法進行，少數(shù)(如診斷抗原)也可用化學(xué)方法檢查。

1.動物保護力試驗

動物保護力試驗為獸醫(yī)生物制品特別是疫苗類制品最常用的效力檢驗方法，疫苗的免疫原性、免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期、最小免疫量等都可通過動物進行檢測或測定。

各種制品所用的動物種類、標(biāo)準(zhǔn)各不相同，或用敏感的等級實驗動物，或用同源動物，通常在所用的實驗動物難以判定時可允許用同源動物重檢。動物保護力試驗方法很多，但大多采用攻毒方法，并設(shè)立對照動物。

(1)定量免疫定量強毒攻擊法攻擊用的強毒量，通常都是實驗資料，多為最小致死量的若干倍，不同動物的強毒攻擊量也不同。一般在動物經(jīng)免疫后2～3周，連同對照動物用定量的強毒攻擊，然后以攻擊動物的存活或不感染比例判定該制品的免疫效果(即保護力)。

例如在豬丹毒弱毒菌苗效力檢驗時，以每只注射含有1000萬個豬丹毒弱毒菌苗的小鼠5只，在免疫14d后連同3只以上對照小鼠各攻擊1000個小鼠致死量的豬丹毒強毒菌，免疫鼠應(yīng)活存4/5以上，對照鼠應(yīng)全部死亡即可判定菌苗效力檢驗合格。

(2)變數(shù)免疫定量強毒攻擊法

將疫苗作不同稀釋度并各免疫一定數(shù)量動物，經(jīng)一定時間建立免疫后，各免疫組動物連同對照動物用同一劑量強毒攻擊，觀察一定時間后統(tǒng)計存活和死亡數(shù)，以統(tǒng)計學(xué)處理計算PD50。

例如，在雞新城疫油佐劑滅活疫苗效力檢驗時，選擇3～4周齡敏感雞35只，以1/25、1/50、1/100稀釋疫苗0.5mL各皮下或肌肉注射10只雞，另5只為對照，3～5周后各肌肉注射105EID50。的新城疫強毒，觀察14d按每組的死亡數(shù)、對照組全死的結(jié)果計算出PD50。并規(guī)定該苗每一個使用劑量(0.5mL)的效價不低于50個PD50(3)定量免疫變量強毒攻擊法設(shè)免疫組與對照組動物，各又分為動物數(shù)量相等的小組。免疫組動物用同一劑量制品免疫，經(jīng)一定時間建立免疫后與對照組動物用不同稀釋度的強毒攻擊，觀察、計算、比較免疫組與對照組的存活率。按LD50計算，如對照組攻擊10-5稀釋度強毒有50%的動物死亡，而免疫組動物攻擊10-3稀釋度強毒動物死亡50%，即免疫組動物對強毒的耐受力比對照組高100倍，也就是免疫組有100個LD50保護力。目前，狂犬病疫苗的效力即按此方法檢驗。(4)血清免疫抗體測定部分生物制品效力可用檢測免疫動物血清中特異性抗體效價來衡量免疫力或效力。例如，抗炭疽血清效力檢驗，給8只敏感豚鼠分別注射血清0.5ml與1.0ml，各4只，24h后，連同4只對