高效液相色譜和超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用研究一、本文概述隨著現(xiàn)代醫(yī)藥科技的飛速發(fā)展，藥物分析作為確保藥物安全有效的重要環(huán)節(jié)，其重要性日益凸顯。在眾多藥物分析技術(shù)中，高效液相色譜（HPLC）和超高效液相色譜（UPLC）因其高分離效能、高靈敏度以及廣泛的應(yīng)用范圍，已成為藥物分析領(lǐng)域的重要工具。本文旨在探討HPLC和UPLC在藥物分析中的應(yīng)用，包括方法開(kāi)發(fā)、樣品處理、定量分析、雜質(zhì)分析以及質(zhì)量控制等方面，旨在為讀者提供全面的藥物分析技術(shù)、參考制劑、文章首先介紹了HPLC和UPLC的基本原理和生物主要特點(diǎn)，包括色譜柱的選擇、流動(dòng)相的優(yōu)化、檢測(cè)器的使用等。隨后，結(jié)合實(shí)例詳細(xì)闡述了HPLC和UPLC在藥物分析中的具體應(yīng)用，包括對(duì)原料藥樣品等不同類(lèi)型樣品的處理方法，以及如何提高分析的準(zhǔn)確性和可靠性。文章還討論了HPLC和UPLC在藥物質(zhì)量控制和雜質(zhì)分析方面的應(yīng)用，以及這些技術(shù)在新藥研發(fā)、藥品注冊(cè)、生產(chǎn)過(guò)程監(jiān)控等環(huán)節(jié)中的重要作用。二、高效液相色譜（）在藥物分析中的應(yīng)用藥物成分分析：HPLC可以準(zhǔn)確地測(cè)定藥物中的活性成分、雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等。通過(guò)選擇合適的色譜柱和流動(dòng)相，可以實(shí)現(xiàn)藥物的多組分同時(shí)測(cè)定。這對(duì)于保證藥物的質(zhì)量和安全性具有重要意義。藥物代謝研究：HPLC在藥物代謝研究中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。通過(guò)分析生物樣本（如血液、尿液、組織等）中的藥物及其代謝產(chǎn)物，可以了解藥物的代謝途徑、代謝速率等，為藥物研發(fā)和臨床應(yīng)用提供重要信息。藥物動(dòng)力學(xué)研究：HPLC可以用于測(cè)定生物樣本中的藥物濃度，進(jìn)而研究藥物的吸收、分布、代謝和排泄過(guò)程。這對(duì)于確定藥物的劑量、給藥間隔、療效評(píng)估等具有重要意義。藥物雜質(zhì)分析：藥物中的雜質(zhì)可能影響其安全性和有效性。HPLC可以準(zhǔn)確地檢測(cè)和鑒定藥物中的雜質(zhì)，有助于保證藥物的質(zhì)量。藥物穩(wěn)定性研究：HPLC可以監(jiān)測(cè)藥物在不同條件下的穩(wěn)定性，如溫度、濕度、光照等。這對(duì)于確定藥物的儲(chǔ)存條件、有效期等具有重要意義。藥物制劑分析：HPLC可以用于分析藥物制劑中的各個(gè)組分，如片劑、膠囊、注射劑等。這對(duì)于保證藥物制劑的質(zhì)量和療效具有重要意義。高效液相色譜（HPLC）在藥物分析中具有廣泛的應(yīng)用，對(duì)于保證藥物的質(zhì)量、安全性和有效性具有重要意義。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，HPLC在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用將更加廣泛和深入。三、超高效液相色譜（）在藥物分析中的應(yīng)用超高效液相色譜（UPLC）簡(jiǎn)介：簡(jiǎn)要介紹UPLC的基本原理、特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，例如更高的分離效率、更快的分析速度和更好的靈敏度。藥物分析中的關(guān)鍵應(yīng)用：探討UPLC在藥物分析中的主要應(yīng)用領(lǐng)域，如藥物成分分析、藥物雜質(zhì)分析、藥物代謝研究等。案例分析：提供具體的案例分析，展示UPLC在實(shí)際藥物分析中的應(yīng)用，包括分析方法、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)：討論UPLC在藥物分析領(lǐng)域的發(fā)展趨勢(shì)，如技術(shù)改進(jìn)、新應(yīng)用領(lǐng)域的開(kāi)拓等?？偨Y(jié)UPLC在藥物分析中的重要性及其對(duì)藥物研發(fā)和質(zhì)量控制的貢獻(xiàn)?，F(xiàn)在，我將根據(jù)這個(gè)大綱為您生成“超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用”段落的內(nèi)容。由于字?jǐn)?shù)限制，我將在多輪回復(fù)中完成整段落的撰寫(xiě)。讓我們開(kāi)始第一部分：超高效液相色譜（UPLC）作為一種先進(jìn)的分析技術(shù)，已在藥物分析領(lǐng)域展現(xiàn)出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。UPLC相較于傳統(tǒng)的高效液相色譜（HPLC）技術(shù)，通過(guò)使用更小的顆粒大?。ㄍǔＰ∮?微米）和更高的操作壓力，實(shí)現(xiàn)了更高的分離效率和更快的分析速度。UPLC在靈敏度方面的提升，使其在藥物分析中扮演著越來(lái)越重要的角色。在藥物分析中，UPLC的關(guān)鍵應(yīng)用領(lǐng)域包括但不限于藥物成分的定量和定性分析、藥物雜質(zhì)的檢測(cè)、藥物代謝物的鑒定以及藥物穩(wěn)定性研究。這些應(yīng)用對(duì)于確保藥物的質(zhì)量、安全性和有效性至關(guān)重要。例如，通過(guò)UPLC對(duì)藥物中的活性成分進(jìn)行定量分析，可以精確控制藥物劑量，確保治療效果。同時(shí)，UPLC在檢測(cè)藥物中的微量雜質(zhì)方面也表現(xiàn)出卓越的性能，這對(duì)于防止藥物污染和提高藥物純度具有重要意義。我們將進(jìn)一步探討UPLC在藥物分析中的具體案例，并分析這些案例如何體現(xiàn)UPLC的優(yōu)勢(shì)和重要性。四、與在藥物分析中的比較與選擇高效液相色譜（HPLC）和超高效液相色譜（UPLC）都是分析化學(xué)中常用的色譜技術(shù)，它們?cè)谒幬锓治鲱I(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。這兩種技術(shù)都可以用來(lái)分離、鑒定和定量藥物及其代謝產(chǎn)物。UPLC使用的顆粒尺寸比HPLC?。ㄍǔＰ∮?微米），這使得UPLC具有更高的柱效和分辨率。這意味著UPLC能在更短的時(shí)間內(nèi)分離更多的組分，并且分離效果更好。由于UPLC的高效率，分析時(shí)間通常比HPLC短。這對(duì)于高通量分析非常重要，可以顯著提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率。UPLC由于使用的顆粒更小，所需的溶劑壓力更高，但同時(shí)它也實(shí)現(xiàn)了更高的溶劑利用率。在某些情況下，UPLC可以比HPLC節(jié)省更多的溶劑。UPLC的注射量可以比HPLC更小，同時(shí)保持或提高靈敏度。這對(duì)于分析珍貴樣品或低濃度化合物非常有用。UPLC儀器通常比HPLC儀器更昂貴，同時(shí)維護(hù)成本也更高。在選擇使用UPLC還是HPLC時(shí)，需要考慮預(yù)算和成本效益。雖然UPLC在很多方面優(yōu)于HPLC，但并不是所有的藥物分析都需要UPLC。對(duì)于一些不需要高分辨率或快速分析的應(yīng)用，HPLC可能更為合適和經(jīng)濟(jì)。在選擇HPLC或UPLC時(shí)，需要根據(jù)具體的分析需求、樣品特性、時(shí)間效率、成本預(yù)算等因素綜合考慮。例如，對(duì)于需要快速分析大量樣品的制藥公司，UPLC可能是更好的選擇而對(duì)于預(yù)算有限且分析需求不是特別高的研究機(jī)構(gòu)，HPLC可能更為合適。五、高效液相色譜和超高效液相色譜的未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)技術(shù)創(chuàng)新：HPLC和UPLC技術(shù)將繼續(xù)進(jìn)行創(chuàng)新和優(yōu)化，以滿(mǎn)足藥物分析中對(duì)更高分辨率、更高靈敏度和更快分析速度的需求。例如，新型色譜柱和檢測(cè)器的研發(fā)，以及新型樣品前處理技術(shù)的出現(xiàn)，都將極大地推動(dòng)HPLC和UPLC在藥物分析中的應(yīng)用。自動(dòng)化和智能化：自動(dòng)化和智能化是未來(lái)HPLC和UPLC發(fā)展的重要方向。通過(guò)引入自動(dòng)進(jìn)樣器、自動(dòng)洗脫系統(tǒng)、智能數(shù)據(jù)分析軟件等，可以實(shí)現(xiàn)樣品處理、色譜分析、數(shù)據(jù)處理的全程自動(dòng)化和智能化，大大提高分析效率和準(zhǔn)確性。多維色譜技術(shù)：多維色譜技術(shù)（如二維、三維液相色譜）能夠提供更豐富的樣品信息，提高分析的分辨率和靈敏度。未來(lái)，多維色譜技術(shù)將在藥物分析中發(fā)揮更大的作用，特別是在復(fù)雜樣品的分析中。在線(xiàn)聯(lián)用技術(shù)：將HPLC或UPLC與其他分析技術(shù)（如質(zhì)譜、核磁共振等）在線(xiàn)聯(lián)用，可以實(shí)現(xiàn)更全面的樣品分析。這種聯(lián)用技術(shù)不僅可以提高分析的靈敏度和分辨率，還可以提供樣品的結(jié)構(gòu)信息，對(duì)藥物分析具有重要意義。綠色分析技術(shù)：隨著環(huán)保意識(shí)的日益增強(qiáng)，綠色分析技術(shù)將成為未來(lái)HPLC和UPLC發(fā)展的重要方向。通過(guò)優(yōu)化色譜條件、減少有機(jī)溶劑的使用、開(kāi)發(fā)環(huán)保型色譜柱和檢測(cè)器等，可以實(shí)現(xiàn)藥物分析的綠色化。未來(lái)HPLC和UPLC在藥物分析中的應(yīng)用將更加廣泛和深入。隨著技術(shù)的不斷創(chuàng)新和優(yōu)化，以及自動(dòng)化、智能化、多維色譜、在線(xiàn)聯(lián)用和綠色分析技術(shù)的發(fā)展，HPLC和UPLC將為藥物分析提供更高效、更準(zhǔn)確、更環(huán)保的分析手段。六、結(jié)論隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，高效液相色譜（HPLC）和超高效液相色譜（UPLC）在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用已經(jīng)越來(lái)越廣泛。這兩種色譜技術(shù)以其高靈敏度、高分辨率、高速度和高選擇性等特點(diǎn)，在藥物質(zhì)量控制、雜質(zhì)分析、代謝產(chǎn)物研究以及藥物動(dòng)力學(xué)研究等方面發(fā)揮著重要的作用。通過(guò)本文的綜述，我們可以看到，HPLC在藥物分析中的應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)成熟，不僅能夠?qū)λ幬镞M(jìn)行定性定量分析，還能對(duì)藥物的雜質(zhì)進(jìn)行有效的監(jiān)測(cè)和控制。而UPLC作為一種新型的色譜技術(shù)，其更高的分離效率和更快的分析速度使其在藥物分析中具有更大的優(yōu)勢(shì)。特別是在復(fù)雜樣品的分析中，UPLC能夠更快速、更準(zhǔn)確地提供藥物及其代謝產(chǎn)物的信息，為藥物研發(fā)和生產(chǎn)提供了有力的支持。任何一種技術(shù)都有其局限性。HPLC和UPLC在藥物分析中的應(yīng)用也受到一些因素的影響，如樣品的復(fù)雜性、色譜柱的選擇、流動(dòng)相的優(yōu)化等。在實(shí)際應(yīng)用中，我們需要根據(jù)具體的分析需求選擇合適的色譜技術(shù)，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)臉悠诽幚砗蜕V條件優(yōu)化，以獲得最佳的分析結(jié)果。高效液相色譜和超高效液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用具有廣闊的前景和重要的價(jià)值。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，相信這兩種色譜技術(shù)將在藥物分析領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用，為藥物研發(fā)和生產(chǎn)提供更加準(zhǔn)確、快速和可靠的分析方法。參考資料：高效液相色譜（HPLC）是一種廣泛應(yīng)用于分離、分析復(fù)雜化合物的強(qiáng)大工具。近年來(lái)，隨著技術(shù)的進(jìn)步，超高效液相色譜（UHPLC）逐漸嶄露頭角，其在分離速度、分辨率和靈敏度等方面表現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢(shì)。將現(xiàn)有的HPLC方法轉(zhuǎn)換為UHPLC并不總是直接的，需要進(jìn)行細(xì)致的方法開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證。本文將探討如何將HPLC方法轉(zhuǎn)換為UHPLC，并討論轉(zhuǎn)換后的方法驗(yàn)證的重要性。HPLC和UHPLC在原理上是相似的，都是基于色譜法，利用固定相和流動(dòng)相之間的相互作用來(lái)分離化合物。UHPLC采用了更細(xì)的顆粒填料，通常粒徑在7-5μm范圍內(nèi)，這使得流動(dòng)相的流速更快，提高了分離速度和靈敏度。將HPLC方法轉(zhuǎn)換為UHPLC需要經(jīng)過(guò)幾個(gè)步驟。需要確定合適的流速，以充分利用UHPLC的高效分離能力。由于UHPLC的填料顆粒更細(xì)，流動(dòng)相的流速通常較快，以提高分離速度。需要優(yōu)化進(jìn)樣量，以適應(yīng)UHPLC的快速分離。較大的進(jìn)樣量可能導(dǎo)致峰展寬，降低分辨率和靈敏度?？赡苄枰{(diào)整流動(dòng)相的比例和組成，以?xún)?yōu)化化合物在固定相和流動(dòng)相之間的分配，提高分離效果。完成方法的轉(zhuǎn)換后，驗(yàn)證新方法的性能至關(guān)重要。驗(yàn)證應(yīng)包括精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限和定量限等參數(shù)的評(píng)估。精密度是指重復(fù)測(cè)定同一濃度樣品時(shí)得到的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。準(zhǔn)確度可以通過(guò)比較已知濃度的樣品測(cè)定值與真實(shí)值之間的差異來(lái)評(píng)估。檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）分別表示能夠檢測(cè)到和可重復(fù)測(cè)定的化合物最低濃度。為了確保方法的可靠性和通用性，建議在不同時(shí)間、由不同操作者使用不同批次的儀器進(jìn)行方法的驗(yàn)證。這將有助于評(píng)估方法的耐用性和可重復(fù)性。將HPLC方法轉(zhuǎn)換為UHPLC需要進(jìn)行細(xì)致的方法開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，同時(shí)進(jìn)行全面的方法驗(yàn)證以確保其性能滿(mǎn)足預(yù)期要求。通過(guò)這些步驟，我們可以充分利用UHPLC的優(yōu)勢(shì)，提高分析效率、靈敏度和準(zhǔn)確性，更好地服務(wù)于科學(xué)研究、質(zhì)量控制和藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。隨著醫(yī)藥行業(yè)的快速發(fā)展，藥物分析領(lǐng)域的分析技術(shù)也在不斷進(jìn)步。超高效液相色譜（UPLC）作為一種先進(jìn)的分離分析技術(shù)，在藥物分析領(lǐng)域中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。本文將介紹超高效液相色譜在藥物分析領(lǐng)域中的應(yīng)用。在藥物分析領(lǐng)域中，客戶(hù)需要快速、準(zhǔn)確地分析藥物及其代謝產(chǎn)物的化學(xué)成分、結(jié)構(gòu)和活性。同時(shí)，隨著新藥研發(fā)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的加劇，對(duì)藥物分析技術(shù)的要求也越來(lái)越高。超高效液相色譜作為一種高分辨率、高靈敏度的分析技術(shù)，能夠滿(mǎn)足藥物分析領(lǐng)域中的多種需求。超高效液相色譜的基本原理是利用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入色譜柱，通過(guò)色譜柱內(nèi)的固定相和流動(dòng)相之間的相互作用，使不同的化合物分離，隨后用檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)和分析。超高效液相色譜的儀器主要包括高壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分。其工作流程包括樣品進(jìn)樣、色譜分離、檢測(cè)分析和數(shù)據(jù)處理等步驟。在藥物分析領(lǐng)域中，超高效液相色譜的應(yīng)用場(chǎng)景非常廣泛。在藥物篩選階段，超高效液相色譜可以用于快速分離和鑒定化合物的成分，有助于發(fā)現(xiàn)新的先導(dǎo)化合物。在雜質(zhì)分析方面，超高效液相色譜具有高分辨率和靈敏度，能夠準(zhǔn)確分析藥物中的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，確保藥物的質(zhì)量和安全性。在藥效評(píng)估方面，超高效液相色譜可以用于分析藥物在生物體內(nèi)的代謝過(guò)程和代謝產(chǎn)物，有助于深入了解藥物的療效和作用機(jī)制。為了更好地展示超高效液相色譜在藥物分析領(lǐng)域中的應(yīng)用效果和優(yōu)勢(shì)，下面以一個(gè)實(shí)際案例進(jìn)行分析。在一項(xiàng)新藥研發(fā)項(xiàng)目中，研究人員利用超高效液相色譜技術(shù)對(duì)一種抗腫瘤藥物進(jìn)行了分析。通過(guò)色譜分離和檢測(cè)，成功地鑒定了該藥物中的主要成分和雜質(zhì)，并對(duì)其在生物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究。這一案例充分展示了超高效液相色譜在藥物分析領(lǐng)域中的實(shí)際應(yīng)用效果和優(yōu)勢(shì)。在總結(jié)中，超高效液相色譜作為一種高分辨率、高靈敏度的分析技術(shù)，在藥物分析領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景和潛力。從藥物篩選到雜質(zhì)分析和藥效評(píng)估等多個(gè)方面，超高效液相色譜為新藥研發(fā)提供了強(qiáng)有力的支持。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和普及，相信超高效液相色譜在未來(lái)的藥物分析領(lǐng)域中將發(fā)揮更大的作用。高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。1903年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett）首次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法chromatography（來(lái)自希臘字，chroma意思是顏色，graphy意思是記錄-直譯為顏色記錄）來(lái)描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是,俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）他在論文中寫(xiě)到：“（原文）一植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端加入，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結(jié)果按照不同色素的吸附順序在管內(nèi)觀(guān)察到它們相應(yīng)的色帶，就象光譜一樣，稱(chēng)之為色譜圖?！?930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國(guó)學(xué)者M(jìn)artin和Synge基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個(gè)重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開(kāi)始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后，微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜，進(jìn)一步提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類(lèi)基因組計(jì)劃，蛋白質(zhì)組學(xué)有HPLC作預(yù)分離等。①高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。⑤應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。⑦樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。1．吸附色譜法(AdsorptionChromatography)2．分配色譜法(PartitionChromatography)4．分子排阻色譜法/凝膠色譜法(SizeExclusionChromatography)5．鍵合相色譜法（bonded-phasechromatography）6．親和色譜法(AffinityChromatography)可分為“高壓輸液泵”、“色譜柱”、“進(jìn)樣器”、“檢測(cè)器”、“餾分收集器”以及“數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)”等部分。液相色譜和質(zhì)譜連接，可以增加額外的分析能力，能夠準(zhǔn)確鑒定和定量像細(xì)胞和組織裂解液，血液，血漿，尿液和口腔液等復(fù)雜樣品基質(zhì)中的微量化合物。高效液相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)（ABSciexEksigentLC/MS和LC/MS/MS）提供了一些獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，包括：流量穩(wěn)定（±1)，耐高壓(30～60Mpa)，耐各種流動(dòng)相：例如：有機(jī)溶劑、水和緩沖液；如果所進(jìn)行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析，而是為了做其它波譜鑒定，或獲取少量試驗(yàn)樣品的小型制備，餾分收集是必要的；(Liquid-liquidPartitionChromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(ChemicallyBondedPhaseChromatography)流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式：式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm—溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度；Vs—固定相的體積；Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大；但也有不同之處，GPC中，流動(dòng)相對(duì)K影響不大，LLPC流動(dòng)相對(duì)K影響較大。a.正相液-液分配色譜法(NormalPhaseliquidChromatography):流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。b.反相液-液分配色譜法(ReversePhaseliquidChromatography):流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。c.液-液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解；流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見(jiàn)后），可克服上述缺點(diǎn)。流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來(lái)進(jìn)行分離的。其作用機(jī)制是：當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱時(shí)，溶質(zhì)分子()和溶劑分子(S)對(duì)吸附劑表面活性中心發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附（未進(jìn)樣時(shí)，所有的吸附劑活性中心吸附的是S)，可表示如下：mnSa======anSm式中：m--流動(dòng)相中的溶質(zhì)分子；Sa--固定相中的溶劑分子；a--固定相中的溶質(zhì)分子；Sm--流動(dòng)相中的溶劑分子。IEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹(shù)脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換，依據(jù)這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。以陰離子交換劑為例，其交換過(guò)程可表示如下：-（溶劑中）(樹(shù)脂-R4NCl-)===（樹(shù)脂-R4N-)Cl-（溶劑中）凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來(lái)進(jìn)行分離。離子對(duì)色譜法是將一種(或多種)與溶質(zhì)分子電荷相反的離子(稱(chēng)為對(duì)離子或反離子)加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原式中：水相--流動(dòng)相中待分離的有機(jī)離子（也可是陽(yáng)離子）；Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(duì)（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；Y---形成的離子對(duì)化合物。離子對(duì)色譜法（特別是反相）解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。用離子交換樹(shù)脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器，為消除流動(dòng)相中強(qiáng)電解質(zhì)背景離子對(duì)電導(dǎo)檢測(cè)器的干擾，設(shè)置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。以陰離子交換樹(shù)脂(R-OH)作固定相，分離陰離子（如Br-）為例。當(dāng)待測(cè)陰離子Br-隨流動(dòng)相(NaOH)進(jìn)入色譜柱時(shí)，發(fā)生如下交換反應(yīng)（洗脫反應(yīng)為交換反應(yīng)的逆過(guò)程）：可見(jiàn)，通過(guò)抑制柱將洗脫液轉(zhuǎn)變成了電導(dǎo)值很小的水，消除了本底電導(dǎo)的影響；試樣陰離子Br-則被轉(zhuǎn)化成了相應(yīng)的酸HBr-，可用電導(dǎo)法靈敏的檢測(cè)。(StericExclusionChromatography)空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類(lèi)似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來(lái)進(jìn)行分離，而是按分子大小進(jìn)行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動(dòng)力學(xué)體積或分子大小有關(guān)。試樣進(jìn)入色譜柱后，隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過(guò)。在試樣中一些太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻，因此就直接通過(guò)柱子，首先在色譜圖上出現(xiàn)，一些很小的分子可以進(jìn)入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最后出現(xiàn)。流程：如圖1所示，溶劑貯器⑴中的流動(dòng)相被泵⑵吸入，經(jīng)〔3〕梯度控制器按一定的梯度進(jìn)行混合然后輸出，經(jīng)⑷測(cè)其壓力和流量，導(dǎo)入(5進(jìn)樣閥（器）經(jīng)⑹保護(hù)柱、⑺分離柱后到⑻檢測(cè)器檢測(cè)，由⑽數(shù)據(jù)處理設(shè)備處理數(shù)據(jù)或⑾記錄儀記錄色譜圖，⑿餾分收集器收集餾分，⒀為廢液。色譜圖(chromatogram)——樣品流經(jīng)色譜柱和檢測(cè)器，所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線(xiàn)，又稱(chēng)色譜流出曲線(xiàn)(elutionprofile)?；€(xiàn)(baseline)——經(jīng)流動(dòng)相沖洗，柱與流動(dòng)相達(dá)到平衡后，檢測(cè)器測(cè)出一段時(shí)間的流出曲線(xiàn)。一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。噪音(noise)——基線(xiàn)信號(hào)的波動(dòng)。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過(guò)載、檢測(cè)器不穩(wěn)定、流動(dòng)相含有氣泡或色譜柱被污染所致。漂移(drift)——基線(xiàn)隨時(shí)間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動(dòng)相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來(lái)也會(huì)產(chǎn)生漂移。色譜峰(peak)——組分流經(jīng)檢測(cè)器時(shí)響應(yīng)的連續(xù)信號(hào)產(chǎn)生的曲線(xiàn)。流出曲線(xiàn)上的突起部分。正常色譜峰近似于對(duì)稱(chēng)形正態(tài)分布曲線(xiàn)（高斯Gauss曲線(xiàn)）。不對(duì)稱(chēng)色譜峰有兩種：前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)。前者少見(jiàn)?！吨袊?guó)藥典》規(guī)定fn=95~05為正常峰，fn<95為前延峰，fn>05為拖尾峰。峰寬（peakwidth，W)—峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線(xiàn)與基線(xiàn)的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。W=4σ半峰寬（peakwidthathalf-height，Wh/2)—峰高一半處的峰寬。Wh/2=355σ保留時(shí)間(retentiontime，tR)——從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。理論塔板數(shù)(theoreticalplatenumber，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡(jiǎn)稱(chēng)柱效）。分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥5稱(chēng)為完全分離。拖尾因子(tailingfactor，T)——T=，用以衡量色譜峰的對(duì)稱(chēng)性。也稱(chēng)為對(duì)稱(chēng)因子(symmetryfactor)或不對(duì)稱(chēng)因子(asymmetryfactor)。應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，常用的色譜柱填料有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用辛基鍵合硅膠次之，氰基或氨基鍵合硅膠也有使用；離子交換填料用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。在用紫外吸收檢測(cè)器時(shí)，所用流動(dòng)相應(yīng)符合紫外分光光度法項(xiàng)下對(duì)溶劑的要求。正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類(lèi)、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類(lèi)型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變。以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。按各品種項(xiàng)下要求對(duì)儀器進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子.在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間t(R)和半高峰寬W(h/2)，按n=54^2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)，如果測(cè)得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達(dá)到要求。定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測(cè)量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度(R)的計(jì)算公式為：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)，式中t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。除另外有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于5。為保證測(cè)量精度，特別當(dāng)采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為：T(拖尾因子)=W05h/2d1式中W(05h)為05峰高處的峰寬；d1為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外,T應(yīng)在95～05間。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成三種不同濃度的溶液，分別注樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于0%。定量測(cè)定時(shí)，可根據(jù)樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)總量時(shí)，須采用峰面積法。測(cè)定供試品（或經(jīng)衍生化處理的供試品）中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計(jì)算在內(nèi)。色譜圖的記錄時(shí)間應(yīng)根據(jù)各品種所含雜質(zhì)的保留時(shí)間決定，除另有規(guī)定外可為該品種項(xiàng)下主成分保留時(shí)間的倍數(shù)。當(dāng)雜質(zhì)峰面積與成分峰面積相差懸殊時(shí)，采用主成分自身對(duì)照法。在測(cè)定前，先按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對(duì)照溶液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)器的靈敏度或進(jìn)樣量，使對(duì)照溶液中的主成分色譜峰面積滿(mǎn)足準(zhǔn)確測(cè)量要求。然后取供試品溶液，進(jìn)樣，記錄時(shí)間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的倍數(shù)。根據(jù)測(cè)得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并和對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算雜質(zhì)限度。采用不加校正因子的峰面積法。取供試品，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法配制不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖Ⅰ；再配制含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖Ⅱ。記錄的時(shí)間除另有規(guī)定外，應(yīng)為該品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間的倍數(shù)，色譜圖上內(nèi)標(biāo)峰高應(yīng)為記錄儀滿(mǎn)標(biāo)度的30%以上，否則應(yīng)調(diào)整注樣量或檢測(cè)器靈敏度。如果色譜圖Ⅰ中沒(méi)有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間相同的雜質(zhì)峰，則色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰面積之和應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積（溶劑峰不計(jì)在內(nèi)）。如果色譜圖Ⅰ中有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰保留時(shí)間相同的雜質(zhì)峰，應(yīng)將色譜圖Ⅱ上的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積減去色譜圖Ⅰ中此雜質(zhì)峰面積，即為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積；色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰總面積加色譜圖Ⅰ中此雜峰面積，即為各雜質(zhì)峰的校正總面積，各雜質(zhì)峰的校正總面積應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱(chēng)（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子：As/ms]校正因子f=-Ar/mr式中As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高,Ar為對(duì)照品的峰面積或峰高；ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量mr為加入對(duì)照品的量。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量供試品（或其雜質(zhì)）峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：Ax含量(mx)=f×-As/ms式中Ax為供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高；mx為供試品（或其雜質(zhì)）的量。f、As和ms的意義同上。當(dāng)配制校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同一分內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱(chēng)（量）取。按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱(chēng)（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品和供試品待測(cè)成分的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)，以定量環(huán)進(jìn)樣為好。要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能多的了解樣品的有關(guān)性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點(diǎn)及其應(yīng)用范圍。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對(duì)分子質(zhì)量的大小，在水中和有機(jī)溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學(xué)結(jié)構(gòu)等物理、化學(xué)性質(zhì)。對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量較低（一般在200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進(jìn)行分析。相對(duì)分子質(zhì)量在200~2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對(duì)分子質(zhì)量高于2000，則可用空間排阻色譜法。水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對(duì)非極性的混合物，可用液-固色譜法。若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機(jī)螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應(yīng)用于離子化合物；異構(gòu)體的分離可用液固色譜法；具有不同官能團(tuán)的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對(duì)于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。HPLC的出現(xiàn)不過(guò)三十多年的時(shí)間，但這種分離分析技術(shù)的發(fā)展十分迅猛，應(yīng)用十分廣泛。其儀器結(jié)構(gòu)和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示(SeeFig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類(lèi)、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲(chóng)劑、除銹劑的分析等物質(zhì)的分析。HPLC使用的色譜柱是很細(xì)的(1~6mm)，所用固定相的粒度也非常?。◣爪蘭到幾十μm)，所以流動(dòng)相在柱中流動(dòng)受到的阻力很大，在常壓下，流動(dòng)相流速十分緩慢，柱效低且費(fèi)時(shí)。為了達(dá)到快速、高效分離，必須給流動(dòng)相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動(dòng)速度。為此，須用高壓泵進(jìn)行高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。HPLC使用的高壓泵應(yīng)滿(mǎn)足下列條件：a.流量恒定，無(wú)脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍（一般為1~10mL/min)；c.有較高的輸液壓力；對(duì)一般分離，60×10^5Pa的壓力就滿(mǎn)足了，對(duì)高效分離，要求達(dá)到150~300×10^5Pa。當(dāng)柱塞推入缸體時(shí)，泵頭出口（上部）的單向閥打開(kāi)，同時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)入的單向閥（下部）關(guān)閉，這時(shí)就輸出少量的流體。反之，當(dāng)柱塞向外拉時(shí)，流動(dòng)相入口的單向閥打開(kāi)，出口的單向閥同時(shí)關(guān)閉，一定量的流動(dòng)相就由其儲(chǔ)液器吸入缸體中。這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相。其工作原理是：壓力為p1的低壓氣體推動(dòng)大面積（SA）活塞A，則在小面積（SB）活塞B輸出壓力增大至p2的液體。壓力增大的倍數(shù)取決于A和B兩活塞的面積比，如果A與B的面積之比為50:1，則壓力為5×Pa的氣體就可得到壓力為250×Pa的輸出液體。這是一種恒壓泵。類(lèi)似于GC中的程序升溫。已成為現(xiàn)代高效液相色譜中不可缺少的部分。梯度洗提，就是載液中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過(guò)程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過(guò)載液中極性的變化來(lái)改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。梯度洗提可以分為兩種：a.低壓梯度（也叫外梯度）：在常壓下，預(yù)先按一定程序?qū)煞N或多種不同極性的溶劑混合后，再用一臺(tái)高壓泵輸入色譜柱。b.高壓梯度(或稱(chēng)內(nèi)梯度系統(tǒng))：利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設(shè)定的比例送入梯度混合室，混合后，進(jìn)入色譜柱。⑴注射器進(jìn)樣裝置：進(jìn)樣所用微量注射器及進(jìn)樣方式與GC法一樣。進(jìn)樣壓力150×10^5Pa時(shí)，必須采用停流進(jìn)樣。⑵高壓定量進(jìn)樣閥：與GC法用的流通法相似，能在高壓下進(jìn)樣。色譜柱是色譜儀最重要的部件（心臟）。通常用厚壁玻璃管或內(nèi)壁拋光的不銹鋼管制作的，對(duì)于一些有腐蝕性的樣品且要求耐高壓時(shí)，可用銅管、鋁管或聚四氟乙烯管。柱子內(nèi)徑一般為1～6mm。常用的標(biāo)準(zhǔn)柱型是內(nèi)徑為6或9mm，長(zhǎng)度為15～30cm的直形不銹鋼柱。填料顆粒度5～10μm，柱效以理論塔板數(shù)計(jì)大約7000～10000。它的作用原理是基于被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系遵守比爾定律。最常用的檢測(cè)器，應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。a.靈敏度高：其最小檢測(cè)量10-9g·mL-1,故即使對(duì)紫外光吸收很弱的物質(zhì)，也可以檢測(cè)；c.流通池可做的很小(1mm×10mm，容積8μL)；e.波長(zhǎng)可選，易于操作：如，使用裝有流通池的可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)（可變波長(zhǎng)檢測(cè)器）。缺點(diǎn)：對(duì)紫外光完全不吸收的試樣不能檢測(cè)；同時(shí)溶劑的選擇受到限制。紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；陣列由1024個(gè)光電二極管陣列，每個(gè)光電二極管寬僅50μm，各檢測(cè)一窄段波長(zhǎng)。在檢測(cè)器中，光源發(fā)出的紫外或可見(jiàn)光通過(guò)液相色譜流通池，在此流動(dòng)相中的各個(gè)組分進(jìn)行特征吸收，然后通過(guò)狹縫，進(jìn)入單色其進(jìn)行分光，最后由光電二極管陣列檢測(cè)，得到各個(gè)組分的吸收信號(hào)。經(jīng)計(jì)算機(jī)快速處理，得三維立體譜圖。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)。差示折光檢測(cè)器是借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率的方法來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。溶液的折射率是純?nèi)軇鲃?dòng)相）和純?nèi)苜|(zhì)（試樣）折射率乘以各物質(zhì)的濃度之