第五次試驗(yàn)課內(nèi)容1、細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢驗(yàn)，數(shù)碼判定（示教）2、腸道桿菌在選擇判別培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況（示教）

EMB、SS平板、雙糖鐵培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基3、肥達(dá)試驗(yàn)（結(jié)果示教）4、肉湯增菌結(jié)果血平板接種（操作，每組一份）5、病例二討論醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第1頁(yè)原理：染色鏡檢普通瓊脂平板中菌落形態(tài)不能判別能夠判別試驗(yàn)一細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢驗(yàn)，數(shù)碼判定細(xì)菌代謝產(chǎn)物分解代謝產(chǎn)物合成代謝產(chǎn)物生化反應(yīng)?醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第2頁(yè)細(xì)菌菌落色素觀(guān)察金黃色葡萄球菌：產(chǎn)生只局限于菌落脂溶性金黃色色素。銅綠假單胞菌：產(chǎn)生帶熒光水溶性色素，該色素可擴(kuò)散至菌落周?chē)?，使培養(yǎng)基呈亮綠色。金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第3頁(yè)細(xì)菌菌落溶血現(xiàn)象觀(guān)察乙型溶血性鏈球菌:透明無(wú)色溶血環(huán)。SLOorSLS？醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第4頁(yè)一、糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：不一樣細(xì)菌分解糖類(lèi)能力和分解代謝產(chǎn)物不一樣應(yīng)用：慣用于腸道細(xì)菌判定醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第5頁(yè)結(jié)果判定培養(yǎng)基變紅色陽(yáng)性，記為+

培養(yǎng)基變紅色，試管內(nèi)有氣泡陽(yáng)性，記為+

指示劑不變色陰性，記為-葡萄糖乳糖傷寒沙門(mén)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)大腸埃希菌糖發(fā)酵試驗(yàn)痢疾志賀菌糖發(fā)酵試驗(yàn)副傷寒沙門(mén)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第6頁(yè)IMViC是吲哚（indole）、甲基紅（methylredtest）、V-P（Voges-Prokauertest）和枸櫞酸鹽利用（citratetest）四個(gè)試驗(yàn)縮寫(xiě)，用于快速判別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌（衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)）細(xì)菌代謝產(chǎn)物檢驗(yàn)，數(shù)碼判定醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第7頁(yè)二、靛基質(zhì)（吲哚）產(chǎn)生試驗(yàn)(I)原理：分解蛋白胨內(nèi)色氨酸形成靛基質(zhì)（無(wú)色）靛基質(zhì)與靛基質(zhì)試劑中對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合而顯紅色(玫瑰吲哚)材料：蛋白胨水培養(yǎng)基（氯化鈉、蛋白胨、蒸餾水）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第8頁(yè)方法：約0.3ml靛基質(zhì)試劑漸漸加入細(xì)菌蛋白胨水培養(yǎng)物注：加入吲哚試劑后切勿搖擺結(jié)果：大腸埃希菌(﹢)紅色產(chǎn)氣桿菌(﹣)黃色紅色吲哚大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第9頁(yè)葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸pH<4.5甲基紅指示劑培養(yǎng)基呈紅色（+）乙酰甲基甲醇（中性）pH>5.4培養(yǎng)基呈橘黃色（-）脫羧大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌都能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣……產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧大腸桿菌三、甲基紅試驗(yàn)（M）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第10頁(yè)材料：葡萄糖蛋白胨水（葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、蒸餾水）方法：結(jié)果：大腸埃希菌，紅色——＋產(chǎn)氣桿菌，黃色——

－醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第11頁(yè)葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸乙酰甲基甲醇紅色化合物（+）脫羧四、VP試驗(yàn)（Vi）大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌都能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣……產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧大腸桿菌在堿性溶液中被氧化VP試劑（李氏試劑）不能反應(yīng)（-）反應(yīng)30min二乙酰+精氨酸胍基醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第12頁(yè)材料：葡萄糖蛋白胨水李氏試劑（硫酸銅、濃氨水、NaOH、蒸餾水）方法：暴露于空氣中結(jié)果:大腸埃希菌，不出現(xiàn)紅色（﹣）產(chǎn)氣桿菌，紅色（﹢）大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第13頁(yè)五、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香草酚藍(lán)呈堿性變色培養(yǎng)基變藍(lán)培養(yǎng)基產(chǎn)氣桿菌能利用銨鹽作為唯一氮源，利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第14頁(yè)材料：枸櫞酸鹽培養(yǎng)基（枸櫞酸鈉、NH4H2PO4、MgSO4、K2HPO4、NaCl、瓊脂、蒸餾水、0.5%溴麝香草酚蘭酒精溶液）方法：結(jié)果：大腸埃希菌，綠色（﹣）產(chǎn)氣桿菌，深藍(lán)色（﹢）產(chǎn)氣桿菌大腸桿菌有沒(méi)有菌落？醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第15頁(yè)用于腸桿菌科屬間判別大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌

IMViC試驗(yàn)總結(jié)醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第16頁(yè)

分解六、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)原理：材料：醋酸鉛培養(yǎng)基（普通瓊脂培養(yǎng)基、硫代硫酸鈉溶液、醋酸鉛溶液）含硫氨基酸硫化氫遇鉛鹽或亞鐵鹽黑褐色沉淀醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第17頁(yè)方法：結(jié)果：變形桿菌，黑褐色——＋大腸埃希菌，不變色——－

變形桿菌大腸桿菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第18頁(yè)對(duì)蛋白質(zhì)發(fā)酵吲哚試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)對(duì)糖發(fā)酵糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)VP試驗(yàn)其它枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第19頁(yè)

試驗(yàn)原理該試劑條是由20個(gè)含干燥底物小管所組成，用細(xì)菌懸浮液接種。培養(yǎng)一定時(shí)間后，經(jīng)過(guò)代謝作用產(chǎn)生顏色改變，或在培養(yǎng)后加入試劑后變色而觀(guān)察結(jié)果。腸道桿菌數(shù)碼判定（API20E）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第20頁(yè)判讀結(jié)果：每三項(xiàng)為一組，每組分值為124分）將陽(yáng)性反應(yīng)分值相加，得出數(shù)據(jù)編碼，從API20E編碼手冊(cè)中查細(xì)菌名稱(chēng)。

數(shù)碼判定（API20E）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第21頁(yè)（21）半固體培養(yǎng)基(動(dòng)力試驗(yàn))

大腸埃希菌

志賀菌傷寒沙門(mén)菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第22頁(yè)材料：1、EMB培養(yǎng)基、SS瓊脂平板、雙糖鐵培養(yǎng)基2、大腸埃希菌、傷寒沙門(mén)菌、志賀菌選擇培養(yǎng)基腸道桿菌在選擇判別培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況判別培養(yǎng)基醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第23頁(yè)

伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）EMB平板基質(zhì)肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基抑制物伊紅、美藍(lán)底物乳糖指示劑伊紅、美藍(lán)堿性無(wú)色半透明菌落酸性→紫黑色或紫紅色，且有金屬光澤菌落持點(diǎn)＋為紫黑色或紫紅色菌落－為無(wú)色半透明菌落抑制作用抑制G＋菌用途分離沙門(mén)菌和志賀菌屬弱選擇培養(yǎng)基醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第24頁(yè)原理：（EMB平板)非致病菌：致病菌：美藍(lán)

分解乳糖伊紅結(jié)合紫黑色或紫紅色化合物不分解乳糖，菌落呈無(wú)色、半透明。其它類(lèi)似培養(yǎng)基？醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第25頁(yè)SS培養(yǎng)基（SalmonellaShigellaAgarMedium）SS平板基質(zhì)肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基抑制物膽鹽、煌綠、枸櫞酸鈉、硫代硫酸鈉底物乳糖指示劑中性紅pH（6.8—8.0）堿性→黃色酸性→紅色菌落持點(diǎn)＋為粉紅色菌落－為無(wú)色半透明菌落抑制作用抑制大腸桿菌及G＋菌用途分離沙門(mén)菌和志賀菌屬?gòu)?qiáng)選擇培養(yǎng)基醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第26頁(yè)原理：（SS平板）非致病菌：致病菌：膽鹽

分解乳糖乳酸膽酸中心渾濁粉紅色菌落不分解乳糖，菌落呈透明無(wú)色；枸櫞酸鐵能指示硫化氫產(chǎn)生，使菌落中心呈黑色注意：非致病菌并非被殺滅，故挑病原菌菌落時(shí)，盡可能挑取菌落中心部分醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第27頁(yè)大腸埃希菌痢疾志賀菌大腸埃希菌與傷寒沙門(mén)菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第28頁(yè)雙糖鐵培養(yǎng)基（DoublesugarIronMedium）成份含酚紅指示劑pH7.6蛋白胨水500mL

瓊脂(1.3%)6.5g

乳糖(1%)5g葡萄糖(0.1%)0.5g

硫酸亞鐵銨(0.02%)0.1g

硫代硫酸鈉(0.02%)0.1g用途

初步判別腸道桿菌醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第29頁(yè)原理：只分解葡萄糖：產(chǎn)少許酸上層培養(yǎng)基酸+O2→CO2+H2O蛋白胨代謝產(chǎn)物下層培養(yǎng)基不接觸空氣→培養(yǎng)基呈酸性→顯黃色葡萄糖、乳糖都分解硫酸亞鐵銨：用以檢驗(yàn)細(xì)菌分解蛋白質(zhì)后是否產(chǎn)生硫化氫。只產(chǎn)酸產(chǎn)酸&產(chǎn)氣培養(yǎng)基略變堿指示劑變紅醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第30頁(yè)

腸道桿菌生長(zhǎng)結(jié)果

SSEMB雙糖鐵大腸埃希菌粉紅色大菌落紫黑色或紫紅色黃色痢疾志賀菌無(wú)色細(xì)小無(wú)色、半透明上紅下黃半透明菌落傷寒沙門(mén)菌無(wú)色細(xì)小無(wú)色、半透明上紅下黃半透明菌落黑色沉淀醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第31頁(yè)特異性抗體（血清中）診療菌液肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象檢測(cè)試劑成份病人體內(nèi)反應(yīng)傷寒或副傷寒病人O抗原H抗原含有傷寒沙門(mén)菌O抗原傷寒沙門(mén)菌H抗原甲型副傷寒沙門(mén)菌H抗原肖氏沙門(mén)菌H抗原肥達(dá)試驗(yàn)（Widaltest）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第32頁(yè)方法：1、每孔加0.5mlN.S2、倍比稀釋病人血清，第7孔不加做對(duì)照3、每孔加0.5ml抗原4、輕輕振蕩混勻后，37℃孵育過(guò)夜醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第33頁(yè)結(jié)果觀(guān)察++++清澈透明，菌體形成凝塊于管底

+++較透明，大部分菌體形成凝塊于管底

++稍渾濁，較多細(xì)小凝集

+較渾濁，有細(xì)小凝集－渾濁，無(wú)凝集血清凝集效價(jià)：(抗體滴度)

與定量Ag產(chǎn)生顯著凝集（++）血清最高稀釋倍數(shù)醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第34頁(yè)結(jié)果分析（1）

傷寒沙門(mén)菌“O”效價(jià)≥1：80“H”效價(jià)≥1：160

副傷寒沙門(mén)菌“H”效價(jià)≥1：80◆O、H效價(jià)＞正常值，腸熱癥可能性大＜正常值，可能性小◆O高H不高：感染早期or交叉反應(yīng)◆O不高H高：預(yù)防接種、非特異性回想反應(yīng)有診療價(jià)值醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第35頁(yè)O抗原沙門(mén)菌屬間有交叉反應(yīng)IgMH抗原種特異性--傷寒沙門(mén)菌IgG甲型副傷寒沙門(mén)菌肖氏沙門(mén)菌希氏沙門(mén)菌結(jié)果分析（2）醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第36頁(yè)肉湯增菌結(jié)果血平板接種1、觀(guān)察肉湯增菌結(jié)果2、接種視細(xì)菌培養(yǎng)條件而用不一樣平板血標(biāo)本肉湯增菌血平板分離培養(yǎng)革蘭染色血漿凝固酶+觸酶試驗(yàn)病例1醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第37頁(yè)病例二患者：男性，19歲。惡心、腹痛4h，伴水樣腹瀉3次入院就診。無(wú)嘔吐、寒顫。腹痛呈陣發(fā)性。既往體檢無(wú)過(guò)敏史。體檢：T38.5℃，BP134/75mmHg，P100次/分，R16次/分。心肺正常。上腹壓痛，而無(wú)反跳痛。肝脾未觸及。試驗(yàn)室檢驗(yàn)：糞便鏡檢可見(jiàn)中性粒細(xì)胞，偶見(jiàn)紅細(xì)胞。血象正常。尿正常。問(wèn)題：1．該患者可能患了什么疾病？需與哪些疾病作判別診療？2．怎樣進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)？

醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第38頁(yè)1、病例分析：感染中毒引發(fā)腹痛和腹瀉可能原因有哪些？腫瘤食物過(guò)敏炎癥性腸病潰瘍腹外疾病腸易激綜合征醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第39頁(yè)主訴：陣發(fā)性腹痛、腹瀉腸道感染細(xì)菌病毒寄生蟲(chóng)真菌?腸桿菌科：大腸埃希菌、志賀菌屬、沙門(mén)菌屬弧菌科：霍亂菌、副溶血性弧菌彎曲菌屬：空腸彎曲菌球菌科：金黃色葡萄球菌等輪狀病毒、Norwork病毒和腸腺病毒等溶組織阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)等念珠菌、曲菌、毛霉菌等醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座第4