ICS13.100

CCSC50

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/TXXXX—XXXX

人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測定

氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜

Determinationof11pesticidesresiduesinhumanserum

bygaschromatography-triplequadrupolemassspectrometry

（報批稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

江蘇省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB32/TXXXX—XXXX

I

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人體血清中11種農(nóng)藥殘留量測定

氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜

1范圍

本文件規(guī)定了人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲

戊靈、毒蟲畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜測定方法。

本文件適用于人體血清中氯苯胺靈、五氯苯甲醚、野麥畏、乙烯菌核利、殺螟硫磷、粉銹寧、二甲

戊靈、毒蟲畏、丁草胺、腈菌唑和莎稗磷11種農(nóng)藥殘留量的測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T16126生物監(jiān)測質(zhì)量保證規(guī)范

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

試樣經(jīng)飽和硫酸銨沉淀蛋白，提取上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，富集濃縮后，用氣相色譜-三重四級

桿質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。

5試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

試劑

5.1.1甲醇（CH3OH）。

5.1.2二氯甲烷（CH2Cl2）。

5.1.3正己烷（C6H14）。

5.1.4甲苯（C7H8）。

5.1.5二氯甲烷-甲醇混合溶液：用二氯甲烷和甲醇按4:1體積比混合。

5.1.6無水硫酸銨（(NH4)2SO4）。

5.1.7飽和硫酸銨溶液：稱取過量無水硫酸銨，用100mL水溶解至有晶體析出。

5.1.8胎牛血清。

標(biāo)準(zhǔn)品

1

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農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥95%或有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，見附錄A。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（0.5mg/mL）：分別準(zhǔn)確稱取12.5mg（精確至0.1mg）各標(biāo)準(zhǔn)品，用甲苯溶解并轉(zhuǎn)

移至25mL容量瓶中，定容至刻度，配制成濃度為0.5mg/mL的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，于-18℃避光保存，

可穩(wěn)定3個月。

5.3.2標(biāo)準(zhǔn)使用溶液

標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（25μg/mL）：分別移取250μL各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于5mL容量瓶中，用甲苯定容至

刻度，配制成濃度為25μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。臨用現(xiàn)配。

5.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于空白基質(zhì)（胎牛血清）中，配制成目標(biāo)農(nóng)藥參考濃度分別為0μg/L，

0.5μg/L，1.0μg/L，5.0μg/L，10.0μg/L和100.0μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)，采用與待測樣本相同的前處理方法（8

測定步驟），最后形成濃度水平為0μg/L，12.5μg/L，25.0μg/L，125.0μg/L，250.0μg/L和2500.0μg/L

基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)序列。臨用現(xiàn)配。

材料

5.4.1十八烷基硅烷鍵合固相萃取柱：3mL，200mg或相當(dāng)者。

5.4.2非抗凝管。

5.4.3聚丙烯離心管：1.5mL。

6儀器和設(shè)備

氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀：配有電子轟擊源（EI）。

電子天平：感量0.0001g。

固相萃取裝置。

氮吹濃縮裝置。

高速離心機：轉(zhuǎn)速可達12000r/min。

渦旋振蕩器。

7試樣采集

使用非抗凝管采集不少于2mL外周靜脈血，室溫靜置30min，3000r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)

移至1.5mL離心管中備用。試樣采集耗材、環(huán)境和人員應(yīng)符合GB/T16126要求。

8測定步驟

提取

準(zhǔn)確移取0.5mL血清于1.5mL離心管中，加入500μL飽和硫酸銨溶液，渦旋振蕩30s，12000r/min

離心15min，吸取上清液至另一離心管中。

凈化

2

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8.2.1固相萃取柱依次用甲醇、水各3mL活化。取上清液過柱，待樣品自然流盡后加入1mL水淋洗，

淋洗液流盡后負壓抽干15min。

8.2.2依次用4mL二氯甲烷-甲醇混合溶液、3mL正己烷洗脫，收集洗脫液，于40℃氮吹至干。加

入200μL二氯甲烷，渦旋振蕩1min后，轉(zhuǎn)移至250μL內(nèi)襯管中，自然揮干，加入20μL甲苯復(fù)溶，

渦旋振蕩1min后用于氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜測定。

測定

8.3.1氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜參考條件

8.3.1.1色譜條件

a)載氣：高純氦氣，流速1mL/min；

b)色譜柱：苯基亞芳基聚合物色譜柱，30m×0.25mm×0.25μm；或性能相當(dāng)者；

c)進樣方式：不分流進樣；

d)進樣體積：2μL；

e)進樣口溫度：270°C；

f)柱溫：初始溫度100°C，持續(xù)1min；30°C/min升溫至200°C保持1min；5°C/min升溫至

210°C保持2min；10℃/min升溫至260℃；20℃/min，升溫至300℃，保持5min。

8.3.1.2三重四級桿質(zhì)譜條件

a)碰撞氣：高純氬氣，流速1mL/min；

b)離子源溫度：300°C；

c)傳輸線溫度：300°C；

d)掃描模式：SRM；

e)電離電壓：70eV；

f)發(fā)射電流：50μA；

g)掃描寬度：3.0s；

h)掃描時間：0.043s；

i)電離方式：EI；

j)選擇離子監(jiān)測：每種化合物分別選擇一個定量離子對，一個定性離子對。所有需要檢測的離

子依據(jù)出峰順序，分時段分別檢測。每種化合物的保留時間、定量離子及定性離子，參見附

錄B。化學(xué)物的選擇離子流圖參見附錄C。

8.3.2定性測定

被測試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%

之內(nèi)。在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣

除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合

物，樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液相比，其允

許偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。如果不能確證，應(yīng)重新進樣，以掃描方

式（有足夠靈敏度）或采用增加其他確證離子的方式或用其他靈敏度更高的分析儀器來確證。

表1定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度/%>5020~50（含）10~20（含）≤10

允許相對偏差/%±20±25±30±50

3

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8.3.3定量測定

本方法通過工作曲線法進行定量測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線的上機濃度范圍為：12.5μg/L~2500.0μg/L，樣品

經(jīng)過提取與凈化后進行測定，根據(jù)得到的目標(biāo)物定量離子的峰面積，采用工作曲線法進行定量，計算樣

本中11種農(nóng)藥的含量。

平行試驗

按步驟8.1~8.3的規(guī)定對同一試樣進行平行試驗測定。

空白試驗

除不加試樣外，其他操作步驟均按步驟8.1~8.3的規(guī)定進行。

9結(jié)果計算

樣本中各農(nóng)藥的含量按照公式（1）計算，計算結(jié)果需扣除空白值。

··························································(1)

?×?

??

式中：?=?

CS——樣本中各農(nóng)藥濃度，μg/L；

C——從工作曲線得對應(yīng)的各農(nóng)藥的濃度，μg/L；

V——樣本檢測定容體積，μL；

VS——樣本取樣體積，μL；

10方法的定量限和準(zhǔn)確度

定量限

血清取樣量為0.5mL，定容體積為20μL時，11種農(nóng)藥的定量限參見附錄A。

準(zhǔn)確度

胎牛血清中11種農(nóng)藥添加濃度均為1μg/L時，回收率為76.5%~133%；添加濃度均為10μg/L時，回

收率為81.4%~123%。1.0μg/L、10.0μg/L添加濃度下各農(nóng)藥相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為17%~35%。

4

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附錄A

（規(guī)范性）

11種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限

表A.111種檢測農(nóng)藥中文名稱及方法定量限

序號中文名稱定量限/（μg/L）

1氯苯胺靈0.5

2五氯苯甲醚0.5

3野麥畏0.5

4乙烯菌核利0.5

5殺螟硫磷0.5

6粉銹寧0.5

7二甲戊靈0.5

8毒蟲畏0.5

9丁草胺0.5

10腈菌唑0.5

11莎稗磷0.5

5

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附錄B

（資料性）

11種檢測農(nóng)藥參考保留時間、定量離子對和定性離子對

表B.111種檢測農(nóng)藥參考保留時間、定量離子對和定性離子對

參考保留時定量離子對/碰撞能量定性離子對/碰撞能量

序號CAS號中文名稱英文名

間/min（m/z）/eV（m/z）/eV

1101-21-3氯苯胺靈Chlorpropham7.05213.1/127.112127.0/65.120

21825-21-4五氯苯甲醚Pentachloroanisole7.81279.9/236.920264.8/236.98

32303-17-5野麥畏Triallate8.75270.0/185.916268.0/183.96

450471-44-8乙烯菌核利Vinclozolin9.54212.0/145.020178.1/115.118

5122-14-5殺螟硫磷Fenitrothion10.26277.0/109.012125.0/79.06

643121-43-3粉銹寧Triadimefon10.96208.0/111.020181.0/127.16

740487-42-1二甲戊靈Pendimethalin11.57252.1/162.114162.1/161.110

8470-90-6毒蟲畏Chlorfenvinphos11.78269.0/161.014267.0/159.012

923184-66-9丁草胺Butachlor12.56176.1/147.1