轉(zhuǎn)基因食品定性檢測(cè)參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第2頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天相關(guān)系列標(biāo)準(zhǔn)：第3頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天應(yīng)用范圍：GB/T19495的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的核酸定性PCR方法。本部分適用于種子、飼料、食品和環(huán)境樣品中轉(zhuǎn)基因成分的定性PCR檢測(cè)。第4頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)原理：一般原理：定性分析包括對(duì)測(cè)試樣品目標(biāo)核算序列的篩選檢測(cè)和特異性檢測(cè)。在設(shè)置合適的對(duì)照和在檢測(cè)下限的情況下，定性檢測(cè)結(jié)果要清楚判斷樣品是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。本檢測(cè)方法包括：目標(biāo)序列的擴(kuò)增和檢測(cè)，擴(kuò)增片段特異性的確證。第5頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR擴(kuò)增目標(biāo)序列的擴(kuò)增是在反應(yīng)緩沖液中，脫氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行的催化反應(yīng)。在反應(yīng)混合體系中不應(yīng)存在DNA聚合酶的抑制劑。DNA擴(kuò)增是一個(gè)循環(huán)的過程：—通過加熱使雙螺旋DNA變性為單鏈核酸：—在合適的溫度下引物和目標(biāo)序列發(fā)生退火；—在合適的溫度下，結(jié)合在兩條單鏈上的引物通過DNA聚合酶作用進(jìn)行PCR延伸反應(yīng)。第6頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR產(chǎn)物檢測(cè)和確證可以通過凝膠電泳或其他方法檢測(cè)PCR產(chǎn)物，必要是可以將PCR產(chǎn)物從凝膠中分離出來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。可以通過限制性內(nèi)切酶酶切分析、雜交、DNA序列分析或者熔點(diǎn)曲線分析等方法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行確證。采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)時(shí)，擴(kuò)增及檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行。第7頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)步驟：第8頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第9頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第10頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天引物設(shè)計(jì)原則第11頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第12頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR方法的選擇：第13頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR反應(yīng)條件及驗(yàn)證第14頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果判定：第15頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天植物基因組DNA提取方法：CTAB法SDS法試劑盒法第16頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、物種特異性檢測(cè)：第17頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第18頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR反應(yīng)體系：第19頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置：第20頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR結(jié)果確證：第21頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、篩選檢測(cè)方法第22頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第23頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR反應(yīng)體系：第24頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR反應(yīng)參數(shù)：第25頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天PCR結(jié)果確證：第26頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天三