蘇云金桿菌與載體拼接

普通棉花（無(wú)抗蟲(chóng)特性）

棉花細(xì)胞抗蟲(chóng)棉提取表達(dá)Bt基因?qū)隑t基因重組DNA分子培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的簡(jiǎn)要過(guò)程問(wèn)題探討1.目的基因的篩選與獲取2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4.目的基因的

檢測(cè)與鑒定（核心工作）

第2節(jié)

基因工程的基本操作程序1基因表達(dá)載體的構(gòu)建2目的基因的篩選與獲取3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4目的基因的檢測(cè)與鑒定四個(gè)步驟：基因表達(dá)載體的構(gòu)建（核心）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的篩選與獲取基因工程的基本操作程序有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用。載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)。

第2節(jié)

基因工程的基本操作程序目的基因的篩選與獲取1.目的基因（1）概念：用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因；如：與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相

關(guān)的基因。主要是編碼特定蛋白質(zhì)的基因，也可以是具有調(diào)控作用的因子一資料：蘇云金桿菌通過(guò)產(chǎn)生蘇云金桿菌伴胞晶體蛋白（Bt抗蟲(chóng)蛋白），破壞鱗翅目昆蟲(chóng)的消化系統(tǒng)來(lái)殺死棉鈴蟲(chóng)?？茖W(xué)家將“殺蟲(chóng)基因”轉(zhuǎn)入棉花中，棉花產(chǎn)生Bt抗蟲(chóng)蛋白抵抗蟲(chóng)害。目的基因思考：1.Bt抗蟲(chóng)蛋白的抗蟲(chóng)原理是什么？2.抗蟲(chóng)棉中的Bt抗蟲(chóng)蛋白會(huì)不會(huì)對(duì)人畜產(chǎn)生危害？

當(dāng)Bt抗蟲(chóng)蛋白被分解為多肽后，多肽與害蟲(chóng)腸上皮細(xì)胞的特異性受體結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞膜穿孔，最后造成害蟲(chóng)死亡。

Bt抗蟲(chóng)蛋白只有在某類(lèi)昆蟲(chóng)腸道的堿性環(huán)境中才能表現(xiàn)出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，腸道細(xì)胞也沒(méi)有特異性受體，因此，Bt抗蟲(chóng)蛋白不會(huì)對(duì)人畜產(chǎn)生上述影響對(duì)Bt基因的表達(dá)產(chǎn)物-Bt抗蟲(chóng)蛋白有較為深入的了解Bt基因是培育轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉較為合適的目的基因目的基因的篩選與獲取2.篩選合適的目的基因方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中篩選。DNA測(cè)序儀核苷酸序列比對(duì)氨基酸序列比對(duì)越來(lái)越多基因的功能和結(jié)構(gòu)被分析。一蘇云金桿菌的殺蟲(chóng)作用于Bt基因有關(guān)掌握了Bt基因的序列信息蘇云金桿菌制劑可防治棉花蟲(chóng)害實(shí)例：利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增（重點(diǎn)）cDNA文庫(kù)直接獲取人工合成基因文庫(kù)（P82了解）（化學(xué)合成法）：根據(jù)測(cè)序技術(shù)或從GenBank等序列數(shù)據(jù)庫(kù)中掌握了目的基因的序列后，用DNA合成儀進(jìn)行人工合成基因組文庫(kù)從生物體內(nèi)用限制酶直接得到獲取目的基因的具體方法3.目的基因的獲取目的基因的篩選與獲取一基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)（主要是cDNA文庫(kù)）基因文庫(kù)：基因組文庫(kù)：含有某種生物全部基因片段的重組DNA的克隆群體。（1）從基因文庫(kù)中直接獲取3.目的基因的獲取目的基因的篩選與獲取一部分基因文庫(kù)：含有某種生物部分基因片段的重組DNA的克隆群體。目的基因的篩選與獲取一提取基因組DNADNA片段重組載體基因組文庫(kù)限制酶與載體連接導(dǎo)入受體菌提取特定組織或發(fā)育時(shí)期的mRNA單鏈DNA重組載體cDNA文庫(kù)雙鏈cDNA導(dǎo)入受體菌與載體連接DNA聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因組文庫(kù)中的基因含有啟動(dòng)子、終止子、內(nèi)含子cDNA文庫(kù)中的基因不含以上結(jié)構(gòu)3.目的基因的獲取（2）人工合成DNA合成儀①前提：基因比較小、核苷酸序列已知②方法：通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成目的基因3.目的基因的獲取目的基因的篩選與獲取一提取蘇云金芽孢桿菌抗蟲(chóng)基因？快速獲得大量抗蟲(chóng)基因（3）利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因目的基因的篩選與獲取一PCR——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。3.目的基因的獲取PCR由穆里斯等人于1985年發(fā)明，為此，穆里斯于1993年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。PCR技術(shù)：PCR是______________

的縮寫(xiě)，是一項(xiàng)根據(jù)___________的原理，在___

_提供參與DNA復(fù)制的___

____與__

____，對(duì)

_________________

_進(jìn)行______

__的技術(shù)；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA半保留復(fù)制體外各種組分反應(yīng)條件目的基因的核苷酸序列大量復(fù)制全稱(chēng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA半保留復(fù)制體外（PCR擴(kuò)增儀/PCR儀）對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因原理操作環(huán)境目的優(yōu)點(diǎn)（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因目的基因的篩選與獲取一結(jié)合體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程，思考PCR的進(jìn)行需要哪些條件？PCR擴(kuò)增儀溫故知新：回顧DNA的復(fù)制過(guò)程體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程解旋酶DNA聚合酶體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、原料、引物、酶、能量等引物目的基因的篩選與獲取一DNA復(fù)制的方向引物DNA母鏈DNA的復(fù)制方向總是從子鏈的5’端向3’端延伸引物從模板鏈3’端結(jié)合①DNA復(fù)制所需的基本條件:參與的組分在DNA復(fù)制中的作用解旋酶DNA母鏈4種脫氧核苷酸DNA聚合酶引物提供DNA復(fù)制的模板合成DNA子鏈的原料打開(kāi)DNA雙鏈催化合成DNA子鏈?zhǔn)笵NA聚合酶能夠從引物的3’端開(kāi)始連接脫氧核苷酸（體外用耐高溫的DNA聚合酶）（體外用高溫代替）（2種）引物是一小段能與__________的一段堿基序列__________的____________DNA母鏈互補(bǔ)配對(duì)短單鏈核酸3’5’DNA母鏈3’5’DNA母鏈3’5’引物3’5’引物目的基因的篩選與獲取一（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因DNA雙鏈解旋之后DNA聚合酶無(wú)法直接聚合游離的脫氧核苷酸，必須由引物提供3′端之后才能開(kāi)始連接脫氧核苷酸。由于DNA雙鏈?zhǔn)欠聪嗥叫械模孕枰獌煞N引物。復(fù)制原則:堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（保證復(fù)制的準(zhǔn)確進(jìn)行）引物①設(shè)計(jì)引物的依據(jù)是：

_______________________②引物設(shè)計(jì)時(shí)既要考慮目的基因序列，又要考慮載體序列，原因是：

________________________________________③使用的一對(duì)引物的序列相同嗎？

_________________________________________④引物設(shè)計(jì)的要求（或引物失效的原因）

a._______________________________________b._______________________________________⑤每種引物內(nèi)部不能發(fā)生局部堿基互補(bǔ)配對(duì)的原因

______________________________⑥兩種引物之間不能在局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)的原因

_____________________________________⑦兩種引物都結(jié)合在DNA模板鏈的_____端脫氧核苷酸連接在引物的_____端進(jìn)行延伸目的基因兩端的核苷酸序列為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，需在引物的5’端加上限制酶的酶切位點(diǎn)不相同，目的基因兩端具有不同的核苷酸序列*兩種引物才能確保DNA的兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增3’防止引物自身環(huán)化防止引物之間配對(duì)，導(dǎo)致引物不能同模板鏈結(jié)合3’每種引物內(nèi)部不能發(fā)生局部堿基互補(bǔ)配對(duì)兩種引物之間不能在局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)3’5’DNA母鏈3’5’DNA母鏈3’5’引物3’5’引物引物長(zhǎng)度不宜過(guò)短，防止引物隨機(jī)結(jié)合目的基因的篩選與獲取一耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）DNA模板引物（2種）穩(wěn)定的緩沖溶液（一般添加Mg2+）四種脫氧核苷酸(dNTP)激活真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶②基本過(guò)程變性復(fù)性延伸①基本條件:（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因控制溫度能量:熱能，dNTP水解釋放的能量③檢測(cè)方法完成后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定產(chǎn)物。(90℃以上）(50℃左右）(72℃左右）（含目的基因）dATP與ATP在結(jié)構(gòu)上有什么區(qū)別？dATP為什么能用作DNA復(fù)制的底物？

如圖所示，ATP結(jié)構(gòu)中的五碳糖為核糖，而dATP結(jié)構(gòu)中的五碳糖為脫氧核

糖。ATP轉(zhuǎn)移掉兩個(gè)磷酸基團(tuán)后剩下的結(jié)構(gòu)就是腺嘌呤核糖核苷酸，所以ATP

是轉(zhuǎn)錄的底物；同理，dATP轉(zhuǎn)移掉兩個(gè)磷酸基團(tuán)后剩下的結(jié)構(gòu)就是腺嘌呤脫氧

核糖核苷酸，所以dATP可以用作DNA復(fù)制的底物。3’5’3’5’3’5’3’5’A.變性90℃以上，雙鏈DNA解聚為單鏈B.復(fù)性50℃左右，兩種引物與兩條單鏈DNA結(jié)合C.延伸72℃左右，4種脫氧核苷酸在Taq酶的作用下，合成新的DNA鏈3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’目的基因的篩選與獲取一②基本過(guò)程（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因堿基互補(bǔ)配對(duì)原則第一輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第二輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過(guò)變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第二輪循環(huán)的產(chǎn)物；第二輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第三輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過(guò)變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第三輪的產(chǎn)物；第二輪循環(huán)的產(chǎn)物第三輪的產(chǎn)物完成后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物目的基因的篩選與獲取一②基本過(guò)程（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因PCR小結(jié)目的基因的篩選與獲取一受熱變性引物

耐高溫的DNA聚合酶(1)過(guò)程：（3）結(jié)果：1個(gè)模板DNA分子經(jīng)過(guò)n輪PCR，以_____方式擴(kuò)增，可以擴(kuò)增出

個(gè)DNA片段，共需要引物數(shù)量為

個(gè)。指數(shù)2n2n＋1－2(2)DNA復(fù)制方向：

。5’端→3’端觀看視頻，跟隨視頻畫(huà)出前三個(gè)循環(huán)的過(guò)程，并思考：為了保證目的基因的完整，在實(shí)際操作中，用于PCR的模板往往會(huì)保留目的基因前后的一小段序列，那么幾輪循環(huán)后會(huì)出現(xiàn)只有目的基因片段（等長(zhǎng)）的DNA分子？目的基因的篩選與獲取一（3）利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因③相關(guān)計(jì)算觀看視頻，跟隨視頻畫(huà)出前三個(gè)循環(huán)的過(guò)程，并思考：為了保證目的基因的完整，在實(shí)際操作中，用于PCR的模板往往會(huì)保留目的基因前后的一小段序列，那么幾輪循環(huán)后會(huì)出現(xiàn)只有目的基因片段（等長(zhǎng)）的DNA分子？三輪目的基因的篩選與獲取一（3）利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因③相關(guān)計(jì)算思維拓展復(fù)制次數(shù)DNA分子總數(shù)01123n21=222=423=82n１)復(fù)制n次后DNA總數(shù):2n2）含母鏈的DNA占總數(shù)的比例：22ｎ12ｎ-1=3）只含子鏈的DNA占總數(shù)的比例：

親代DNA（2條鏈）無(wú)論DNA復(fù)制多少次，含母鏈的DNA數(shù)永遠(yuǎn)是2第1次復(fù)制第2次復(fù)制第3次復(fù)制2ｎ

-22ｎ思維拓展復(fù)制次數(shù)脫氧核苷酸鏈總數(shù)02123n2×21=42×22=82×23=162×2n=2n+1１)復(fù)制n次后脫氧核苷酸鏈總數(shù):2）新合成的脫氧核苷酸鏈數(shù)：2n+1一個(gè)DNA分子中含有2條脫氧核苷酸鏈

親代DNA（2條鏈）第1次復(fù)制第2次復(fù)制第3次復(fù)制2n+1-2②1個(gè)目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)n次，得到多少個(gè)目的基因？含引物的DNA分子有多少個(gè)？①1個(gè)DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)n次，理論上至少需要多少個(gè)引物？2n思維拓展復(fù)制n次，需要的引物數(shù)=新合成的脫氧核苷酸鏈數(shù)找一找：復(fù)制n次，含有引物的脫氧核苷酸鏈有多少？2n+1-22n+1-2思維拓展一個(gè)DNA分子復(fù)制n次，則消耗的脫氧核苷酸數(shù)若親代DNA分子含有胞嘧啶脫氧核苷酸m個(gè)，經(jīng)過(guò)n次復(fù)制需要消耗胞嘧啶脫氧核苷酸數(shù):m（2n-1）

第n次復(fù)制需胞嘧啶脫氧核苷酸數(shù):m.2n-1

親代DNA（2條鏈）第1次復(fù)制第2次復(fù)制第3次復(fù)制總的DNA數(shù)Xm-親代DNA的m（原本就有的）

堿基互補(bǔ)配對(duì)四種脫氧核苷酸模板、能量、酶、引物解旋酶催化體外復(fù)制細(xì)胞內(nèi)（主要在細(xì)胞核內(nèi)）耐高溫的DNA聚合酶解旋酶、DNA聚合酶DNA在高溫下變性解旋大量的DNA片段形成整個(gè)DNA分子PCR與DNA復(fù)制過(guò)程比較目的基因的篩選與獲取一（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因比較項(xiàng)目PCR細(xì)胞核內(nèi)DNA復(fù)制場(chǎng)所試管中細(xì)胞內(nèi)方式半保留全連續(xù)局部區(qū)域復(fù)制半保留半不連續(xù)全鏈復(fù)制起始位點(diǎn)引物3'端復(fù)制起始位點(diǎn)酶僅一種DNA聚合酶（Taq酶）多種酶反應(yīng)條件溫度變幅大溫和解旋高溫解旋解旋酶解旋引物DNA片段，保留在復(fù)制的子鏈中RNA片段，不保留在復(fù)制的子鏈中產(chǎn)物引物界定的片段核基因組循環(huán)次數(shù)人為設(shè)置與細(xì)胞分裂同步聯(lián)系①模板:均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板②原料:均為四種脫氧核苷酸（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）③酶:均需DNA聚合酶④引物:都需要引物，使DNA聚合酶從引物開(kāi)始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成補(bǔ)充2.PCR技術(shù)與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的比較目的基因的篩選與獲取一1.下列有關(guān)體內(nèi)DNA復(fù)制與PCR比較的敘述，正確的是A.二者合成子鏈的方向相同，均從5′端→3′端B.二者均需要解旋酶破壞氫鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)解旋C.體內(nèi)DNA復(fù)制不需要引物，PCR反應(yīng)需要引物D.二者遵循的堿基互補(bǔ)配對(duì)方式相同，且均需要ATP提供能量√學(xué)以致用

·鏈接典例拓展3’5’3’5’3’5’3’5’A.變性90℃以上，雙鏈DNA解聚為單鏈B.復(fù)性50℃左右，兩種引物與兩條單鏈DNA結(jié)合C.延伸72℃左右，4種脫氧核苷酸在Taq酶的作用下，合成新的DNA鏈3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’目的基因的篩選與獲取一②基本過(guò)程（3）利用PCR擴(kuò)增目的基因堿基互補(bǔ)配對(duì)原則思維拓展新合成的脫氧核苷酸鏈上都有引物，即每個(gè)DNA都有引物找一找：①?gòu)?fù)制n次，含有引物的脫氧核苷酸鏈有多少？②復(fù)制n次，含有引物的DNA有多少？2n2n+1-2大本78題2小本141題13cd小本141題13cdef用PCR可以擴(kuò)增mRNA嗎？mRNA不可以直接擴(kuò)增，需要將它逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再進(jìn)行擴(kuò)增。1.逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的DNA鏈，形成RNA-DNA雜交分子；2.核酸酶H降解RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈，使之變成單鏈DNA；3.以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子，即cDNADNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定探究·實(shí)踐實(shí)驗(yàn)原理（1）DNA片段的擴(kuò)增①利用PCR可以在體外進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增。②PCR利用了DNA的熱變性原理，通過(guò)調(diào)節(jié)溫度來(lái)控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。③PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。一次PCR一般要經(jīng)歷30次循環(huán)。（2）DNA片段的電泳鑒定①DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過(guò)程就是電泳。②PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。瓊脂糖凝膠電泳

原理：DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過(guò)程就叫電泳。PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300納米的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。加樣孔電源瓊脂糖凝膠電泳DNA片段的電泳鑒定材料用具（1）儀器（2）用具PCR儀、微量離心管、微量移液器、一次性吸液槍頭、電泳裝置（包括電泳儀電泳槽等）4種脫氧核苷酸的等量混合液、2種引物、DNA聚合酶、模板DNA、擴(kuò)增緩沖液、無(wú)菌水、電泳緩沖液、凝膠載樣緩沖液、瓊脂糖和核酸染料等PCR儀微量離心管微量移液器電泳裝置方法步驟（1）DNA片段的擴(kuò)增用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說(shuō)明書(shū)，在微量離心管中依次加入各組分參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。待所有組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子，將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在離心管的底部（提高反應(yīng)速率）循環(huán)程序變性復(fù)性延伸預(yù)變性94℃,5min//30次94℃,30s55℃,30s72℃,1min最后1次94℃,1min55℃,30s72℃,1min10倍濃縮的擴(kuò)增緩沖液5μL20mmol/L的4種脫氧核苷酸的等量混合液1μL20μmol/L的引物I2.5μL20μmol/L的引物II2.5μLH2O28-33μL1~5U/μL的TaqDNA聚合酶1~2U模板DNA5~10μL總體積50μL瓊脂糖凝膠電泳的操作步驟配制瓊脂糖溶液制備凝膠制備凝膠加樣電泳觀察記錄DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定注意說(shuō)明1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購(gòu)買(mǎi)，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。4.在進(jìn)行操作時(shí)，一定要戴好一次性手套。結(jié)果：片段相同的DNA分子會(huì)停留在相同的條帶，因此可以鑒別PCR的產(chǎn)物是否為目的基因。1234561：Marker、標(biāo)準(zhǔn)大小的DNA分子2：目的基因3-5：不同循環(huán)次數(shù)的PCR產(chǎn)物6：清水瓊脂糖凝膠電泳目的基因的篩選與獲取一2至5都為含目的基因的DNA片段,因?yàn)橐锸且罁?jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)的，引物只能和含目的基因的DNA片段結(jié)合，并在耐高溫的DNA聚合酶的作用下延伸應(yīng)用：在刑偵學(xué)中，只要能獲取痕量DNA，就可以應(yīng)用PCR技術(shù)，大量擴(kuò)增，結(jié)合凝膠電泳，判斷個(gè)體之間的親緣關(guān)系。瓊脂糖凝膠電泳目的基因的篩選與獲取一獲取了足夠量的Bt基因后，下一步就是要讓基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代；同時(shí)，使Bt基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。構(gòu)建基因表達(dá)載體（核心工作）基因表達(dá)載體由哪些部分組成二基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.基因表達(dá)載體的目的（1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，且可以遺傳給下一代；（2）使目的基因能夠在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用。2.基因表達(dá)載體的組成位置：功能：RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)基因的上游（一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段）緊挨轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)能控制表達(dá)所需要的特殊性狀。位置：功能：基因的下游（一段特殊的DNA片斷）終止mRNA的轉(zhuǎn)錄用來(lái)鑒別或篩選含有目的基因的細(xì)胞基因表達(dá)載體的構(gòu)建二DNA復(fù)制的起始位點(diǎn)，DNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。=復(fù)制原點(diǎn)

+目的基因+啟動(dòng)子+終止子

+標(biāo)記基因注意：目的基因必須插入到

與

之間。啟動(dòng)子終止子

3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程基因表達(dá)載體構(gòu)建模式圖載體（質(zhì)粒）DNA分子（含目的基因）限制酶處理帶有黏性末端或平末端的切口帶有相同黏性末端或平末端的目的基因片段DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種二基因表達(dá)載體的構(gòu)建培育抗蟲(chóng)棉的簡(jiǎn)要過(guò)程使用一種DNA限制酶進(jìn)行切割，共有幾種連接情況？問(wèn)題探討載體目的基因自連片段間的連接目的基因自連質(zhì)粒自連目的基因與質(zhì)粒連接目的基因與目的基因連接質(zhì)粒與質(zhì)粒連接正向連接反向連接11’22’122’1’22’1’1思考：1、啟動(dòng)子和終止子分別是轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)和終點(diǎn)嗎？提示：不是。啟動(dòng)子是轉(zhuǎn)錄的起始信號(hào)，而非轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)；終止子是轉(zhuǎn)錄的終止信號(hào)，而非轉(zhuǎn)錄的終止位點(diǎn)。啟動(dòng)(終止)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)(終止)翻譯作用位于DNA上位于mRNA上位置DNA片段三個(gè)相鄰堿基本質(zhì)啟動(dòng)(終止)子啟始(終止)密碼子2、完成下表結(jié)果：片段相同的DNA分子會(huì)停留在相同的條帶，因此可以鑒別PCR的產(chǎn)物是否為目的基因。1234561：Marker、標(biāo)準(zhǔn)大小的DNA分子2：目的基因3-5：不同循環(huán)次數(shù)的PCR產(chǎn)物6：清水瓊脂糖凝膠電泳目的基因的篩選與獲取一2至5都為含目的基因的DNA片段,因?yàn)橐锸且罁?jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)的，引物只能和含目的基因的DNA片段結(jié)合，并在耐高溫的DNA聚合酶的作用下延伸基因表達(dá)載體的構(gòu)建復(fù)制原點(diǎn)標(biāo)記基因KanR啟動(dòng)子多克隆位點(diǎn)終止子X(jué)baIHindIIIBamHISmaIpBI121表達(dá)載體HindIII酶切HindIIIHindIIIBamHICCCAAGCTTAAGCTTGGGTTCGAACCCCCTAGGBt基因GGATCCGGGTTCGAA核心步驟HindIIIHindIIIBamHIAGCTTCCTAGGBt基因GGATCCATTCGAA同一種限制酶切CGATTAGCTTAAACGATTA

G

CTTA如何改進(jìn)?DNA連接酶ACGACGATTTTAGCTTAAGCTTAABt基因ACGACGATTTTAGCTTAAGCTTAABt基因Bt基因Bt基因Bt基因Bt基因HindIIIBamHIAGCTTBt基因ACCTAGG用兩種限制酶切CGATTGATCCGADNA連接酶GCGATAGTTCCGATCCAAGCTTAGBt基因HindIIIHindIIIBamHICCCAAGCTTAAGCTTGGGTTCGAACCCCCTAGGBt基因GGATCCGGGTTCGAA原則：1.限制酶切位點(diǎn)不得破壞目的基因和載體上的各類(lèi)有功能的基因2.用兩種酶切割，可以避免目的基因自接，質(zhì)粒自身環(huán)化，目的基因與質(zhì)粒倒接3.用于切割目的基因和質(zhì)粒的限制酶必須是同種酶復(fù)制原點(diǎn)標(biāo)記基因KanR啟動(dòng)子多克隆位點(diǎn)終止子X(jué)baIHindIIIBamHISmaIpBI121表達(dá)載體小本137題9小本137題12大本73體驗(yàn)區(qū)

題1(2016·全國(guó)課標(biāo)卷Ⅰ，40)某一質(zhì)粒載體如圖所示，有人將此質(zhì)粒用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是______；并且_____

和____的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是________________

_

。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有________的固體培養(yǎng)基。二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有目的基因的重組質(zhì)粒

二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素即含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌在其中不能生長(zhǎng)，而含有普通質(zhì)粒的大腸桿菌能生長(zhǎng)．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)朐思?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法——顯微注射法——Ca2+處理法（感受態(tài)細(xì)胞法）（我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng))將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三轉(zhuǎn)化：指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定維持和表達(dá)的過(guò)程。（雙子葉植物、裸子植物)（葉肉細(xì)胞)（受精卵)（大腸桿菌)基因槍法（單子葉植物)1.花粉管通道法或②在植物受粉后一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通過(guò)花粉管通道進(jìn)入胚囊。①用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；花粉管通道法導(dǎo)入外源DNA將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（一)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞是我國(guó)科學(xué)家周光宇在1987年獨(dú)創(chuàng)的。將重組DNA滴加到植物受粉后形成的花粉管通道內(nèi)，進(jìn)入卵細(xì)胞、合子或早期胚胎細(xì)胞中。此方法直接、簡(jiǎn)便且經(jīng)濟(jì)，已應(yīng)用于水稻、小麥、棉花、大豆等多種植物中。2.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法-雙子葉植物、裸子植物目的基因插入到農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中重組DNA轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌侵入植物將目的基因帶入植物細(xì)胞含外源目的基因的重組DNA整合到植物細(xì)胞的基因組中目的基因遺傳特性穩(wěn)定維持和表達(dá)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法步驟：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（一)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞構(gòu)建基因表達(dá)載體Ti質(zhì)粒目的基因含目的基因的重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞目的基因插入植物細(xì)胞染色體DNA中植物細(xì)胞植物組織培養(yǎng)表現(xiàn)出新性狀的植株總結(jié)：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法流程圖該過(guò)程經(jīng)過(guò)__次拼接、__次導(dǎo)入①第一次拼接_______________________________②第二次拼接______________________________________________________________③第一次導(dǎo)入__________________________________④第二次導(dǎo)入__________________________________將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上插入目的基因的T-DNA拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上（非人工操作）兩兩將含目的基因的Ti質(zhì)粒重新導(dǎo)入農(nóng)桿菌含目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（非人工操作）2.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法-雙子葉植物、裸子植物將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（一)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞

基因槍法又稱(chēng)微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。3.基因槍法適用于單子葉植物將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（一)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞基因槍法意圖1.顯微注射法操作程序：（為什么常選用受精卵作為受體細(xì)胞呢？)①體積大，易操作。②全能性高，易培養(yǎng)成完整個(gè)體。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（二)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞提純含目的基因表達(dá)載體受精卵顯微注射移植到輸卵管或子宮受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物2.科學(xué)家也用病毒DNA

與目的基因一起構(gòu)建的載體，去感染受體動(dòng)物細(xì)胞，也能使目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞內(nèi)。如慢病毒載體、腺病毒載體等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三（二)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞使用Ca2+處理：可使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。過(guò)程微生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：繁殖快，單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，易于培養(yǎng)操作Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三原核生物作為受體細(xì)胞產(chǎn)生的真核生物的蛋白質(zhì)通常沒(méi)有生物活性，需要在體外進(jìn)行再加工。（三)將目的基因?qū)朐思?xì)胞（增加細(xì)胞壁的透性，與細(xì)胞膜無(wú)關(guān)）常用菌：大腸桿菌Ca2+感受態(tài)細(xì)胞吸收返校要帶的生物資料1.生物必修一《分子與細(xì)胞》教材2.選擇性必修三單元復(fù)習(xí)清單默寫(xiě)（還沒(méi)打印的同學(xué)要打印帶回來(lái)）3.筆記本（大一點(diǎn)厚一點(diǎn)，一輪復(fù)習(xí)用）4.選擇性必修三教材，大小本目的基因的檢測(cè)與鑒定四在棉花細(xì)胞中，重組表達(dá)載體是否導(dǎo)入成功？是否可以穩(wěn)定維持并表達(dá)出Bt蛋白？表達(dá)出的Bt蛋白是否具有殺蟲(chóng)的功效？1.分子水平檢測(cè)2.個(gè)體水平鑒定③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因PCR技術(shù)或分子雜交技術(shù)抗原-抗體雜交技術(shù)（一)分子水平的檢測(cè)1.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體DNA上是否插入了目的基因方法：PCR擴(kuò)增或DNA分子雜交技術(shù)M：marker；1-陽(yáng)性質(zhì)粒；2：原始品系；3-9轉(zhuǎn)Bt品系；轉(zhuǎn)Bt基因品系PCR瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果DNA分子雜交（Southern-blot)流程圖DNA分子雜交結(jié)果圖目的基因的檢測(cè)與鑒定四15N15N變性變性①首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA；過(guò)程:②將含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記,以此做探針；③使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示出雜交帶,表明目的基因已插入染色體DNA中。（基因探針：指用熒光或放射性同位素標(biāo)記的DNA分子2.檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA方法：PCR擴(kuò)增或DNA-RNA分子雜交技術(shù)RNA分子雜交(NorthernBlot)流程圖Bt基因在抗蟲(chóng)棉中的表達(dá)從左至右依次是苗期葉片、花鈴期葉片，苞葉，花，雌雄蕊和鈴殼目的基因的檢測(cè)與鑒定四（一)分子水平的檢測(cè)用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。3.檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法：抗原-抗體雜交技術(shù)蘇云金芽孢桿菌提取Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)抗體標(biāo)記抗體提取蛋白電泳分離抗原抗體雜交目的基因的檢測(cè)與鑒定四（一)分子水平的檢測(cè)轉(zhuǎn)Bt基因非轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等采摘抗蟲(chóng)棉植株葉接種棉鈴蟲(chóng)蟲(chóng)沒(méi)有死蟲(chóng)被殺死沒(méi)有表達(dá)目的基因表達(dá)目的基因的檢測(cè)與鑒定四（二)個(gè)體水平的鑒定轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)方法觀察指標(biāo)抗蟲(chóng)植物害蟲(chóng)吞食害蟲(chóng)死亡抗病毒(菌)植物病毒(菌)感染未侵染上病斑抗鹽植物鹽水澆灌正常生長(zhǎng)抗除草劑植物噴灑除草劑正常生長(zhǎng)獲取目的基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因生物提取細(xì)胞產(chǎn)物與天然產(chǎn)品進(jìn)行功能活性比較細(xì)胞產(chǎn)物功能活性正常常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因生物在個(gè)體水平上鑒定、檢測(cè)的方法（列舉如下表）目的基因的檢測(cè)與鑒定四（二)個(gè)體水平的鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定（小結(jié))四類(lèi)型步驟檢測(cè)內(nèi)容方法分子水平檢測(cè)第一步轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因PCR擴(kuò)增DNA分子雜交技術(shù)第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAPCR擴(kuò)增DNA-RNA分子雜交技術(shù)第三步目的基因是否翻譯形成蛋白質(zhì)抗原-抗體雜交技術(shù)個(gè)體水平鑒定抗蟲(chóng)或抗病的接種實(shí)驗(yàn)抗性以及抗性程度抗性檢測(cè)；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能活性比較

功能活性。目的基因的檢測(cè)與鑒定四基因工程的基本操作程序獲取質(zhì)粒、噬菌體等載體篩選和獲取目的基因用限制酶切割載體和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA連接酶連接，構(gòu)建基因表達(dá)載體將含有目的基因的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞檢測(cè)和鑒定目的基因是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性目的基因的篩選和獲取-前提利用PCR獲取和擴(kuò)增化學(xué)方法人工合成構(gòu)建基因表達(dá)載體-核心目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞-關(guān)鍵農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(植物)、顯微注射法(動(dòng)物)、感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法(微生物);目的基因的檢測(cè)與鑒定-保證分子檢測(cè)：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯個(gè)體水平：是否具有抗性以及抗性強(qiáng)度等?；蚬こ痰幕静僮鞒绦颍?個(gè)步驟）單元網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建一、目的基因的篩選與獲取基因工程的基本操作程序1.篩選適合的目的基因：3.利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因：2.獲取目的基因的方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中篩選。直接獲取，人工合成，利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增全稱(chēng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNA半保留復(fù)制體外（PCR擴(kuò)增儀/PCR儀）對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制DNA模板，4種脫氧核苷酸，2種引物，耐高溫的DNA聚合酶，能量原理操作環(huán)境目的條件過(guò)程變性（90℃以上）→復(fù)性（50℃左右）→延伸（72℃左右）DNA合成方向5’端→3’端結(jié)果DNA數(shù)：2n,需要的引物數(shù)：2n＋1－2擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)瓊脂糖凝膠電泳單元網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建基因工程的基本操作程序二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建（核心）1.目的2.組成3.啟動(dòng)子4.終止子5.標(biāo)記基因：6.描述基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程7.切割載體和切割含有目的基因的DNA片段的方法（1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，且可以遺傳給下一代；（2）使目的基因能夠在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用。=復(fù)制原點(diǎn)

+目的基因+啟動(dòng)子+終止子

+標(biāo)記基因基因的上游（一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段）緊挨轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)基因的下游（一段特殊的DNA片斷），終止mRNA的轉(zhuǎn)錄鑒定或篩選含有目的基因的受體細(xì)胞注意：1.限制酶切位點(diǎn)不得破壞目的基因和載體上的各類(lèi)有功能的基因2.用于切割目的基因和質(zhì)粒的限制酶必須是同種酶優(yōu)點(diǎn)：可以避免目的基因自接，質(zhì)粒自身環(huán)化，目的基因與質(zhì)粒倒接雙酶切單元網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

基因工程的基本操作程序三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四、目的基因的檢測(cè)與鑒定將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)朐思?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法——顯微注射法——Ca2+處理法（感受態(tài)細(xì)胞法）（我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng))（雙子葉植物、裸子植物)基因槍法（單子葉植物)1.分子水平檢測(cè)2.個(gè)體水平鑒定③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因PCR擴(kuò)增或分子雜交技術(shù)抗原-抗體雜交技術(shù)1.在實(shí)際種植過(guò)程中，棉鈴蟲(chóng)是否對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性？證據(jù)是什么？

科研人員對(duì)長(zhǎng)江流域種植的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，2011年的數(shù)據(jù)顯示，大部分轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種的抗蟲(chóng)性屬于中抗及高抗水平；2013年的數(shù)據(jù)表明，如果棉田周?chē)嬖诖罅刻烊槐幼o(hù)所，靶標(biāo)害蟲(chóng)棉鈴蟲(chóng)、紅鈴蟲(chóng)等并未對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生明顯抗性。在我國(guó)、澳大利亞、印度等國(guó)的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室中，通過(guò)毒素的連續(xù)抗性篩選，已經(jīng)培育出多個(gè)高抗水平的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種。

到社會(huì)中去2.科研工作者在沒(méi)有發(fā)現(xiàn)棉鈴蟲(chóng)出現(xiàn)抗性之前，就應(yīng)該想辦法應(yīng)對(duì)。他們想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的措施有哪些？這些措施的原理是什么？有效嗎？

科研人員想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的