第一篇第四章動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器動物細胞培養(yǎng)方法貼壁培養(yǎng)(單層細胞培養(yǎng))

分散的細胞懸浮在培養(yǎng)瓶中很快(幾十分鐘至幾小時)就貼附在瓶壁上，

稱為細胞貼壁，

貼壁后的細胞形態(tài)形成多態(tài)性，

呈單層生長，

所以此法又叫單層細胞培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)

細胞在培養(yǎng)器中自由懸浮生長的過程，不貼壁，主要用于懸浮型細胞培養(yǎng)，如淋巴細和腫瘤細胞的培養(yǎng)。固定化培養(yǎng)一種包埋培養(yǎng)。對兩類細胞都適用,細胞生長密度高,抗剪切力和抗污染能力強。懸浮型細胞常用海藻酸鈣包埋,貼壁型細胞常用膠原包埋。動物細胞培養(yǎng)方法動物細胞培養(yǎng)可生產(chǎn)得生物制品1、病毒疫苗:口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等2、非抗體免疫調(diào)節(jié)劑:干擾素(IFN)、白介素(IL)等3、多肽生長因子:神經(jīng)生長因子(NGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)4、酶:組織血纖維溶酶原激活劑(t-PA)5、激素:紅細胞生成素(EPO)、促黃體生成素(LH)6、病毒殺蟲劑7、腫瘤特異性抗原:癌胚抗原(CEA)8、單克隆抗體9、皮膚重植10、細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)得應(yīng)用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)得應(yīng)用動物細胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品工藝實例1、組織纖溶酶激活劑生產(chǎn)工藝流程細胞單層細胞懸液細胞培養(yǎng)物培養(yǎng)培養(yǎng)液提取液層析液濃縮液層析液tPA成品分散分離提取層析純化濃縮層析精制凍干2.抗HBsAS的單克隆抗體生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)液雜種細胞混合物大鼠骨髓瘤＋免疫大鼠脾淋巴細胞融合融合混合物篩選克隆化雜交瘤克隆系種質(zhì)培養(yǎng)細胞種質(zhì)擴大培養(yǎng)分離粗制McAb精制層析液超慮濃縮液凍干McAb精品動物細胞培養(yǎng)得特點1、細胞生長緩慢,易受微生物污染,培養(yǎng)時需要抗生素;2、動物細胞較微生物大得多,無細胞壁,機械強度低,適應(yīng)環(huán)境能力差;3、培養(yǎng)過程需氧量少,且不耐受強力通風(fēng)與攪拌;4、在機體中,細胞相互粘連以集群形式存在;5、培養(yǎng)過程產(chǎn)物分布于細胞內(nèi)外,成本高,產(chǎn)品價格昂貴;6、大規(guī)模培養(yǎng)時,不可套用微生物反應(yīng)得經(jīng)驗;7、原代培養(yǎng)細胞一般繁殖50代即退化死亡。動物細胞培養(yǎng)得特點無論就是貼壁細胞還就是懸浮細胞,深層培養(yǎng)得操作方式可分細胞培養(yǎng)得操作方式分批式、流加式、半連續(xù)式、連續(xù)式和灌注式。分批式操作操作簡單、就是最常用得操作方式。分批式培養(yǎng)過程中,細胞得生長可分為延遲期、對數(shù)生長期、減速期、平穩(wěn)期和衰退期分批式培養(yǎng)細胞生長曲線流加式操作半連續(xù)式操作細胞培養(yǎng)得操作方式能夠調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)得濃度。連續(xù)操作能提高細胞密度，應(yīng)用于培養(yǎng)懸浮型細胞。灌注培養(yǎng)大大提高細胞密度，有助于產(chǎn)物的表達和純化。9大家應(yīng)該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器通氣攪拌式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器通氣攪拌式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器氣升式細胞培養(yǎng)反應(yīng)器氣升式培養(yǎng)系統(tǒng)得優(yōu)點:

①沒有移動部件;②完全密封;③便于無菌操作;④設(shè)計簡單;⑤便于放大生產(chǎn);⑥氧得轉(zhuǎn)換率高。動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器細胞培養(yǎng)流程動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器中空纖維細胞培養(yǎng)反應(yīng)器動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器中空纖維細胞培養(yǎng)反應(yīng)器優(yōu)點:

①培養(yǎng)體積小,細胞高密度生長;②有濃縮產(chǎn)品得功能;③產(chǎn)物純度高;④自動化程度高,細胞生長周期長。缺點:

中空纖維價格昂貴,生產(chǎn)成本高。動物細胞培養(yǎng)反應(yīng)器微囊細胞培養(yǎng)反應(yīng)器特點: