藥材三七、葛根及其制劑中農(nóng)藥多殘留測(cè)定研究中成藥腦得生片由?三七、川芎、紅花、葛根、山楂五味藥材組成，其中三七和葛根藥材為生粉入藥，且三七和葛根都為根及根莖類藥材，是農(nóng)藥富集較為嚴(yán)重的部位。且兩者用量占處方總量較大，所以本研究就生粉入藥的藥材及成藥腦得生片進(jìn)行農(nóng)藥殘留研究。目前我國(guó)大多采用LC-MS和GC-MSMS兩種儀器測(cè)定農(nóng)藥多殘留。LC-MS偏向于測(cè)定極性較大的農(nóng)藥，GC-MSMS偏向于測(cè)定極性較小的農(nóng)藥。由于實(shí)驗(yàn)條件限制，本研究只采用GC-MSMS作為分析儀器進(jìn)行農(nóng)殘分析測(cè)定。農(nóng)藥多殘留分析過(guò)程中，樣品前處理過(guò)程主要包括取樣、提取、凈化、富集濃縮等過(guò)程。將農(nóng)藥充分提取的同時(shí)，又要有效地去除雜質(zhì)，同時(shí)要保持較高的回收率，這些問(wèn)題成為農(nóng)殘分析的關(guān)鍵。中藥中農(nóng)藥多殘留的測(cè)定不同于食品和環(huán)境中農(nóng)藥多殘留分析，由于中藥種類多，藥用部位不同，基質(zhì)種類復(fù)雜?，F(xiàn)階段在農(nóng)藥多殘留方面，依靠現(xiàn)有技術(shù)手段建立統(tǒng)一的前處理方法，是不現(xiàn)實(shí)的，因根據(jù)具體品種，具體分析。1實(shí)驗(yàn)儀器與材料1.1儀器與設(shè)備GCMS-TQ8040氣質(zhì)聯(lián)用儀（三重四級(jí)桿）（日本島津），Talboys旋渦混合器(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司），SCANPEED1580高速離心機(jī)（丹麥基因公司），BSA224S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器公司），XS105DU電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司），分散固相萃取凈化管[無(wú)水硫酸鎂900mg，N-丙基乙二胺（PSA)300mg，十八烷基硅烷鍵合硅膠300mg，硅膠300mg，石墨化炭黑150mg]。1.2標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)準(zhǔn)品名稱、英文名、生產(chǎn)廠家見(jiàn)表1。表1標(biāo)準(zhǔn)品信息表編號(hào)名稱英文名批號(hào)供貨單位標(biāo)示濃度單標(biāo)濃度μg/ml混標(biāo)濃度μg/ml1氯氰菊酯Cypermethin913001中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院/121.55642.43112毒死蜱Chlorpyrifos138849農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研100μg/ml10023溴氰菊酯Deltamethrin5219100μg/ml10024苯醚菊酯Phenothrin4213100μg/ml10025三唑醇TaiadimenolG130479

德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司/103.05382.06116P,P’-滴滴伊P,P’-DDE201709/100.42.0087腐霉利ProcymidoneG128442/195.01683.90038山梨醇D-Sorbit92129///9D(+)-核糖酸-γ-內(nèi)酯D(+)-RibonicAcidGamma-Lactone919545///10倍硫磷d6Fenthiob-d6295514上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司///1.3供試品7批三七藥材和7批葛根藥材信息見(jiàn)表2；中成藥腦得生片信息見(jiàn)表3。類別編號(hào)供樣單位三七1云南龍發(fā)制藥有限公司2云南文山三七國(guó)際交易市場(chǎng)3哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司4懷化正好制藥有限公司5白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司6吉林省松遼制藥有限公司7景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司葛根1云南龍發(fā)制藥有限公司2葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司3西安北方藥業(yè)有限公司4吉林省松遼制藥有限公司5懷化正好制藥有限公司6江蘇同濟(jì)醫(yī)藥有限公司7白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司表2藥材信息表表3腦得生片信息表生產(chǎn)企業(yè)劑型批數(shù)批號(hào)1吉林省松遼制藥有限公司片劑920160403，20160502，20160504，20160505，20160601，20160602，20160901，20160902，201912022哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司1020150408，2016010201，2016050502，20161001，20161002，2016110101，2016110102，20170101，20170201，20170202013景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司6160102，160401，160501，160502，160602，1701014西安北方藥業(yè)有限公司3150101，160502，1610015黑龍江紅豆杉藥業(yè)有限責(zé)任公司2160302，1503036廣東國(guó)醫(yī)堂制藥股份有限公司3160401，160701，1608017白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司11601028江西華太藥業(yè)有限公司4160807，161014，161250，1612559葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司320151101，20171103，2017020110四平市吉特藥業(yè)有限公司220170702，201510010211四平正和制藥有限公司3160601，161001，16120112云南龍發(fā)制藥有限公司116010113衛(wèi)材（遼寧）制藥有限公司1C161001214遼寧彭健藥業(yè)有限公司12015020115懷化正好制藥有限公司1160301總計(jì)501.4試劑乙腈、正己烷、乙酸乙酯、丙酮，以上均為色譜級(jí)試劑，無(wú)水硫酸鈉為分析純。2實(shí)驗(yàn)方法2.1溶液的制備2.1.1農(nóng)藥單標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品貯備液的配制精密稱取固體對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，即得。已是液體的對(duì)照品濃度合適，不用再單獨(dú)配制。具體濃度見(jiàn)表1。2.1.2混合對(duì)照品貯備液的配制精密吸取各配制好的單標(biāo)農(nóng)藥和成品液體農(nóng)藥200ml，至10ml量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得。具體濃度見(jiàn)表1。2.1.3內(nèi)標(biāo)貯備液的配制倍硫磷d-6對(duì)照品濃度為50mg/L，精密量取1ml，至10ml量瓶中，加乙腈定溶至刻度，搖勻，即得濃度為50μg/ml的倍硫磷d-6內(nèi)標(biāo)貯備液。2.1.4GCMSMS分析用內(nèi)標(biāo)-分析保護(hù)劑的配制:取D(+)-核糖酸-γ-內(nèi)酯99.98mg置10ml量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度（A液:濃度9.998mg/ml）。另取山梨醇49.88mg，置10ml量瓶中，加水2ml溶解，加乙腈至刻度（B液：濃度4.988mg/ml）。精密量取A液，B液5ml至25量瓶中，再加入上述內(nèi)標(biāo)貯備液5ml，加乙腈溶解并定容至刻度，得GCMSMS分析用內(nèi)標(biāo)-分析保護(hù)劑。(D(+)-核糖酸-γ-內(nèi)酯1.996mg/ml，山梨醇0.9996mg/ml，倍硫磷d-610μg/ml)2.1.5供試品溶液的制備提?。喝」┰嚻?，粉碎成粉末（過(guò)三號(hào)篩）。精密稱取供試品粉末5g，置50ml具塞離心管中，加丙酮40ml，再加無(wú)水硫酸鎂1g，振蕩30分鐘（轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min），離心，分取丙酮置圓底燒瓶中，殘?jiān)偌?0ml丙酮，振蕩30分鐘（轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min），離心，分取上清液丙酮，合并兩次分取的丙酮。置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，低于40℃，蒸至近干，加入乙腈5ml，再旋蒸置近干，用乙腈轉(zhuǎn)移近干的提取物至10ml量瓶中，混勻。凈化：取上述溶液6ml，置已預(yù)先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管，振蕩5分鐘（轉(zhuǎn)速2000轉(zhuǎn)/min），離心，取上清液，即得。2.1.6空白試樣溶液的制備不加供試品，按供試品溶液的制備方法制成空白試樣溶液。2.1.7空白溶劑的制備取色譜級(jí)乙腈直接進(jìn)樣。2.1.8GCMSMS測(cè)定精密量取空白試樣、混合對(duì)照品、供試品溶液800μl，加分析用內(nèi)標(biāo)-分析保護(hù)劑200μl，混勻，濾過(guò)。分別精密吸取1μl注入氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，測(cè)定，以內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線法計(jì)算，即得。2.2色譜條件2.2.1氣相色譜條件色譜柱：SH-Rxi-5SilMS柱（30.0M×0.25mm×0.25μm）；載氣：高純氦氣；進(jìn)樣口溫度：65℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比20；進(jìn)樣時(shí)間：1min；進(jìn)樣量：1μl；采用線速度控制模式，線速度36.2cm/sec；吹掃流量5.0ml/min。程序升溫見(jiàn)表4。表4氣相柱箱程序升溫表速率（℃/min）最終溫度（℃）保持時(shí)間(min)-40425125010300252.2.2質(zhì)譜條件（1）特征離子的確定。將較高濃度的75種農(nóng)藥的混標(biāo)選擇全掃描（SCAN）模式掃描，掃描質(zhì)量范圍（40-500），得到75種農(nóng)藥（含內(nèi)標(biāo)）的總離子流色譜圖（TIC），提取每個(gè)峰的質(zhì)譜圖，再化合物譜庫(kù)中進(jìn)行檢索，確證每一種農(nóng)藥。然后逐個(gè)優(yōu)化各農(nóng)藥的質(zhì)譜條件，在每種農(nóng)藥的質(zhì)譜圖中選擇三至四個(gè)豐度高、質(zhì)量數(shù)大、干擾小的碎片離子作為相應(yīng)農(nóng)藥定性、定量特征檢測(cè)離子。最終優(yōu)化好的參數(shù)表見(jiàn)附錄。（2）質(zhì)譜參數(shù)。離子源溫度：250℃；接口溫度：280℃；相對(duì)于調(diào)諧結(jié)果0.1KV；溶劑延遲時(shí)間：6min；閾值：100。檢測(cè)方式：分段掃描，MRM參數(shù)見(jiàn)4.3。GC程序時(shí)間：49.90min。2.3GCMSMS測(cè)定步驟2.3.1質(zhì)譜條件采用上述優(yōu)化好的參數(shù)對(duì)樣品進(jìn)行MRM分段掃描，先用正構(gòu)烷烴（C9-C40）校正相對(duì)保留時(shí)間。確定篩選范圍為：《中國(guó)藥典》2015年版四部通則2341農(nóng)藥殘留量測(cè)定法第四法農(nóng)藥多殘留質(zhì)譜測(cè)定法下75種農(nóng)藥（包括內(nèi)標(biāo)）。所得色譜圖根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間提取質(zhì)量色譜圖進(jìn)行特征離子和離子比率匹配選擇，對(duì)樣品中存在的農(nóng)藥種類的定性方法。2.3.2定量測(cè)定根據(jù)定性篩查結(jié)果，篩選檢出率較高的農(nóng)藥進(jìn)行定量測(cè)定。定量法用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，采用內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣測(cè)得。2.4方法學(xué)驗(yàn)證2.4.1專屬性實(shí)驗(yàn)取空白溶劑、空白試樣、三七供試品、葛根供試品、腦得生片供試品溶液分別采用上述MRM定性篩查方法進(jìn)樣。結(jié)果表明：空白溶劑和空白試驗(yàn)中均未檢出農(nóng)藥，表明專屬性良好。2.4.2線性范圍分別配置了10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)樣品中均含有相同量的GCMSMS分析用內(nèi)標(biāo)-分析保護(hù)劑，以化合物定量例子的峰面積對(duì)濃度做線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1-7。線性關(guān)系方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表5。編號(hào)名稱標(biāo)準(zhǔn)曲線方程相關(guān)系數(shù)R線性范圍ng/ml1腐霉利Y=0.0074X+23.760.999119.5015～3900.32毒死蜱Y=0.0067X+20.580.999610～20003溴氰菊酯Y=0.0456X+66.5820.991610～20004氯氰菊酯Y=0.0145X+69.7840.993812.1555～2431.15三唑醇Y=0.0059X+26.4410.998910.3055～2061.16苯醚菊酯Y0.0121X+43.4280.99710～20007P,P’-DDEY=0.0024X+5.88090.999810.04～2008表5標(biāo)準(zhǔn)曲線信息表圖1腐霉利標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1腐霉利標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)曲線圖4P,P’-DDE標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3三唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖4P,P’-DDE標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3三唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖6氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖5苯醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖6氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖5苯醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖7溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖7溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)曲線由上表可知，7種農(nóng)藥的回歸方程相關(guān)系數(shù)R在0.99～1之間，在各自的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。2.4.3回收率考察分別對(duì)三七藥材、葛根藥材和腦得生片進(jìn)行回收率試驗(yàn)，每個(gè)平行測(cè)定2份。分別取2.5g上述三種供試品，加入適量對(duì)照品，按供試品溶液制備的方法進(jìn)行制備。精密量取供試品溶液800μl，加分析用內(nèi)標(biāo)-分析保護(hù)劑200μl，混勻，濾過(guò)，即得。回收率結(jié)果見(jiàn)表6。表6回收率結(jié)果表編號(hào)農(nóng)藥名稱三七葛根腦得生片回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）1腐霉利90.64.089.84.689.64.92毒死蜱88.85.2//82.26.53溴氰菊酯80.35.480.27.677.47.84氰氯菊酯75.67.774.25.974.19.65三唑醇80.25.578.65.678.56.96苯醚菊酯////74.28.67P,P’-DDE82.34.679.35.580.29.4注：/：低于檢出限，未檢出。各農(nóng)藥回收率在74～90.6%之間，RSD<10%。其中菊酯類農(nóng)藥回收率低于其他農(nóng)藥，因?yàn)榫挣ヮ愞r(nóng)藥受基質(zhì)效應(yīng)影響更大，雖然已通過(guò)加入分析保護(hù)劑來(lái)避免基質(zhì)干擾，但菊酯類農(nóng)藥仍不理想。但74%的回收率也符合農(nóng)藥多殘留的規(guī)定。3樣品測(cè)定3.1定性篩查結(jié)果及分析利用分段掃描信息，對(duì)不同企業(yè)不同批號(hào)腦得生片和三七、葛根藥材進(jìn)行定性篩查。樣品中檢出的農(nóng)藥相應(yīng)的圖譜見(jiàn)圖8，藥材篩查結(jié)果見(jiàn)表7腦得生片篩查結(jié)果表8。圖8檢出農(nóng)藥色譜圖表7藥材篩查出農(nóng)藥信息表類別編號(hào)供樣單位檢出農(nóng)藥種類三七1云南龍發(fā)制藥有限公司五氯苯胺、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、艾氏劑、三唑酮、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯2云南文山筋條殺螟硫磷、毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯3哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司四氯硝基苯、b-六六六、毒死蜱、三唑酮、三唑醇、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯4懷化正好制藥有限公司毒死蜱、腐霉利5白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司六氯苯、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、艾試劑、腐霉利、氯氟氰菊酯、溴氰菊酯6吉林省松遼制藥有限公司毒死蜱、腐霉利、三唑醇、異菌脲、溴氰菊酯7景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯葛根1云南龍發(fā)制藥有限公司腐霉利、氯氰菊酯2葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司氯氰菊酯3西安北方藥業(yè)有限公司P，P’-DDE、甲氧滴滴涕、氯氰菊酯4吉林省松遼制藥有限公司氯硝胺、氯氰菊酯、溴氰菊酯5懷化正好制藥有限公司腐霉利、溴氰菊酯6江蘇同濟(jì)三唑酮、氟節(jié)胺、氯氰菊酯、溴氰菊酯7白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司腐霉利表8腦得生片篩查出農(nóng)藥信息表編號(hào)生產(chǎn)企業(yè)批號(hào)檢出農(nóng)藥類型1吉林省松遼制藥有限公司20160403毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯220160502毒死蜱、腐霉利320160504毒死蜱、腐霉利420160505五氯硝基苯、毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯520160601毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯620160602毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯720160901毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE820160902毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯、溴氰菊酯920161202毒死蜱、腐霉利10哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司20150408毒死蜱、腐霉利112016010201五氯硝基苯、甲基五氯苯基硫醚、毒死蜱、腐霉利、三唑醇、溴氰菊酯122016050502毒死蜱、腐霉利、氯氰菊酯1320161001毒死蜱、腐霉利1420161002毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯152016110101毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯162016110102毒死蜱、甲基五氯苯基硫醚、腐霉利、溴氰菊酯1720170101毒死蜱、腐霉利1820170201毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE192017020201腐霉利20景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司160102毒死蜱、腐霉利，苯醚菊酯21160401八氯二丙醚、毒死蜱、腐霉利、苯醚菊酯、溴氰菊酯22160501八氯二丙醚、毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE23160502毒死蜱、腐霉利24160602毒死蜱、三唑醇、腐霉利、O，P’-DDE25170101毒死蜱、腐霉利26西安北方藥業(yè)有限公司150101毒死蜱、腐霉利27160502毒死蜱、腐霉利28161001毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯苯醚菊酯29黑龍江紅豆杉藥業(yè)有限責(zé)任公司150302毒死蜱、腐霉利30150303氯硝胺、毒死蜱、腐霉利31廣東國(guó)醫(yī)堂制藥股份有限公司160401腐霉利、毒死蜱32160701毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯33160801毒死蜱、腐霉利34白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司160102毒死蜱、腐霉利35江西華太藥業(yè)有限公司160807腐霉利36161014腐霉利37161250毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯38161255毒死蜱、腐霉利39葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司20151101毒死蜱、腐霉利、苯醚菊酯4020151103六氯苯、毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯4120170201毒死蜱、腐霉利42四平市吉特藥業(yè)有限公司20150702毒死蜱、腐霉利、溴氰菊酯432015100102毒死蜱、腐霉利、P，P’-DDE44四平正和制藥有限公司160601毒死蜱、腐霉利45161001毒死蜱、腐霉利46161201毒死蜱、腐霉利、狄氏劑、氯氰菊酯、溴氰菊酯47云南龍發(fā)制藥有限公司160101毒死蜱、腐霉利48衛(wèi)材（遼寧）制藥有限公司C1610012腐霉利、三唑醇、溴氰菊酯49遼寧彭健藥業(yè)有限公司20150201腐霉利50懷化正好制藥有限公司160301毒死蜱、腐霉利、O，P’-DDE通過(guò)對(duì)7批三七藥材，7批葛根藥材和50批腦得生片進(jìn)行GCMSMS定性篩查，分析所有供試品農(nóng)藥的檢出情況：三七中檢出農(nóng)藥15種，其中農(nóng)藥殘留較高的是腐霉利和毒死蜱，檢出率100%，見(jiàn)圖9；葛根中檢出農(nóng)藥10種，其中農(nóng)藥殘留較高的是氯氰菊酯，腐霉利，溴氰菊酯，見(jiàn)圖10；成藥腦得生片中檢出農(nóng)藥14種，其中農(nóng)藥殘留檢出率較高的7種分別是腐霉利，毒死蜱，溴氰菊酯，氯氰菊酯、P，P’-DDE，三唑醇，苯醚菊酯，每一批次中都檢出有腐霉利，實(shí)驗(yàn)每進(jìn)五針會(huì)加一針空白溶劑或空白試樣，已排除殘留干擾。圖9三七中殘留農(nóng)藥檢出率圖表圖10葛根中殘留農(nóng)藥檢出率圖表圖11腦得生片中殘留農(nóng)藥檢出率圖表所有供試品中共檢出農(nóng)藥24種，大部分農(nóng)藥殘留在三七和葛根中。由于三七和部分葛根為生粉入藥，成藥中的農(nóng)藥極大可能由生粉帶入，且成藥中檢出率較高的農(nóng)藥正是三七和葛根中檢出率較高的農(nóng)藥，如腐霉利在三七中檢出率100%，成藥亦如此。故推斷生粉中農(nóng)藥殘留過(guò)量導(dǎo)致成藥中可以檢出相應(yīng)農(nóng)藥，具體為見(jiàn)圖12。圖12所有供試品中殘留農(nóng)藥檢出批數(shù)統(tǒng)計(jì)圖3.2檢出農(nóng)藥性質(zhì)及最大殘留量制定3.2.1農(nóng)藥性質(zhì)通過(guò)對(duì)14批藥材和50批腦得生片的定性篩查。確認(rèn)檢出率較高的七種農(nóng)藥分別是：腐霉利、毒死蜱、氯氰菊酯、溴氰菊酯、三唑醇、P,P’-DDE，苯醚菊酯。查閱文獻(xiàn)對(duì)上述農(nóng)藥的性質(zhì)簡(jiǎn)要介紹。檢出農(nóng)藥為兩類，一類是殺蟲(chóng)劑，一類是殺菌劑。腐霉利為新型低毒殺蟲(chóng)劑。用于果樹(shù)、蔬菜、花卉等的菌核病、灰霉病、黑星病、褐腐病、大斑病的防治。對(duì)眼睛和皮膚有刺激作用。動(dòng)物試驗(yàn)無(wú)致畸、致突變作用，二代繁殖試驗(yàn)也未見(jiàn)不良影響。毒死蜱廣譜殺蟲(chóng)、殺螨劑。用于多種咀嚼式和刺吸式口器害蟲(chóng)，也可用于防治衛(wèi)生害蟲(chóng)。對(duì)眼睛有輕度刺激，對(duì)皮膚有明顯刺激，長(zhǎng)時(shí)間接觸會(huì)產(chǎn)生灼傷。在試驗(yàn)劑量下未見(jiàn)致畸、致突變、致癌作用。對(duì)魚(yú)和水生動(dòng)物毒性較高，對(duì)蜜蜂有毒。氯氰菊酯為中等毒性殺蟲(chóng)劑。適用于防蟲(chóng)殺蟲(chóng)，例如蠅類、蚊類和蚋屬等昆蟲(chóng)。刺激呼吸系統(tǒng)和皮膚，與皮膚接觸可能致敏。溴氰菊酯為中等毒性殺蟲(chóng)劑。用于防治農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)、倉(cāng)庫(kù)害蟲(chóng)、衛(wèi)生害蟲(chóng)。皮膚接觸可引起刺激癥狀，出現(xiàn)紅色丘疹。急性中毒時(shí)，輕者有頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、食欲不振、乏力，重者還可出現(xiàn)肌束震顫和抽搐。對(duì)人的皮膚及眼粘膜有刺激作用，對(duì)魚(yú)和蜜蜂劇毒。苯醚菊酯為低毒殺蟲(chóng)劑。用于防治棉花；水稻；蔬菜；果樹(shù)茶樹(shù)等多種作物害蟲(chóng)，也用于防治衛(wèi)生害蟲(chóng)及牲畜害蟲(chóng)。對(duì)眼睛有輕度刺激作用。對(duì)兔皮膚無(wú)刺激作用。誤服，引起頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、流涎和血尿等。嚴(yán)重者出現(xiàn)抽搐和意識(shí)障礙。三唑醇為低毒性殺菌劑。用于防治黑穗病、白粉病、銹病、絲黑穗病。無(wú)慢性毒性。3.2.2MRL值和RL值的制定最大殘留限量（MRL)：是指農(nóng)畜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的法定最高允許量，其數(shù)值必須是毒理學(xué)上可以接受的。本研究參考GB2763-2016食品中農(nóng)藥殘留最大限量和中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)農(nóng)藥殘留限量，綜合考慮制定MRL。檢測(cè)限(RL)：是指殘留量被作為數(shù)值報(bào)告的最低濃度，在歐盟地區(qū)將此概念稱為報(bào)告限。該值具有可接受的準(zhǔn)確度和精密度，是高于實(shí)際方法定量限的一個(gè)人為規(guī)定的固定數(shù)值。一般認(rèn)為：當(dāng)MRL≧0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)≦1/10MRL；當(dāng)MRL<0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)≦1/5MRL。最大殘留量的制定是一個(gè)既專業(yè)又復(fù)雜過(guò)程，本研究制定的MRLs僅供參考。表9各農(nóng)藥MRL和RL值農(nóng)藥類別最大殘留量標(biāo)準(zhǔn)值MRL(mg/kg)檢測(cè)限RL（mg/kg)腐霉利50.5毒死蜱10.1溴氰菊酯0.50.05氯氰菊酯10.1三唑醇0.50.05苯醚菊酯0.50.05P,P’-DDE0.50.053.3定量結(jié)果及分析采用2.3.2的方法對(duì)14批藥材和50批成藥進(jìn)行定量測(cè)定。結(jié)果如下：表10藥材中檢出農(nóng)藥含量名稱企業(yè)毒死蜱mg/kg腐霉利mg/kg氯氰菊酯mg/kg溴氰菊酯mg/kgP,P’-DDEmg/kg三唑醇mg/kg苯醚菊酯mg/kg三七云南龍發(fā)制藥有限公司<RL<RL<RL0.1565<RL<RL<RL云南文山筋條<RL<RL<RL0.1815<RL<RL<RL哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司<RL1.0161<RL0.1549<RL0.0742<RL懷化正好制藥有限公司<RL3.8074<RL<RL<RL<RL<RL白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司<RL<RL<RL0.2438<RL<RL<RL吉林省松遼制藥有限公司<RL<RL<RL0.1921<RL0.0588<RL景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司0.31411.3363<RL0.2037<RL0.0770<RL葛根云南龍發(fā)制藥有限公司<RL<RL0.6100<RL<RL<RL<RL葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司<RL<RL0.3158<RL<RL<RL<RL西安北方藥業(yè)有限公司<RL<RL1.0848<RL<RL<RL<RL吉林省松遼制藥有限公司<RL<RL0.42760.1867<RL<RL<RL江蘇同濟(jì)<RL<RL0.45870.3167<RL<RL<RL白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL懷化正好制藥有限公司<RL<RL<RL0.1638<RL<RL<RL注：<RL:低于檢測(cè)限。通過(guò)表10可以看出：14批藥材檢出的農(nóng)藥部分未到達(dá)檢測(cè)限，過(guò)了檢測(cè)限的農(nóng)藥未超過(guò)最大殘留限量，在監(jiān)測(cè)范圍內(nèi)藥材農(nóng)藥殘留基本安全。通過(guò)試驗(yàn)，三七中腐霉利、葛根中氯氰菊酯殘留檢出率較高，雖未超過(guò)最大殘留量，但仍需提高意識(shí)進(jìn)行防范。表11藥材中檢出農(nóng)藥含量編號(hào)企業(yè)批號(hào)毒死蜱mg/kg腐霉利mg/kg溴氰菊酯mg/kg氯氰菊酯mg/kgP，P'-DDEmg/kg三唑醇mg/kg苯醚菊酯mg/kg1吉林省松遼制藥有限公司20160403<RL<RL<RL0.2572<RL<RL<RL220160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL320160504<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL420160505<RL<RL<RL0.2207<RL<RL<RL520160601<RL<RL<RL0.2161<RL<RL<RL620160602<RL<RL0.1630<RL<RL<RL<RL720160901<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL820160902<RL<RL0.16170.1877<RL<RL<RL920161202<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL10哈爾濱華雨制藥集團(tuán)有限公司20150408<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL112016010201<RL<RL0.1428<RL<RL0.0688<RL122016050502<RL<RL<RL0.1751<RL<RL<RL1320161001<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL1420161002<RL<RL0.2004<RL<RL<RL<RL152016110101<RL<RL0.1714<RL<RL<RL<RL162016110102<RL<RL0.1796<RL<RL<RL<RL1720170101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL1820170201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL192017020201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL20景忠山國(guó)藥（唐山）有限公司160102<RL<RL<RL<RL<RL<RL0.097621160401<RL<RL0.1489<RL<RL<RL0.131322160501<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL23160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL24160602<RL<RL<RL<RL<RL0.0784<RL25170101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL26西安北方藥業(yè)有限公司150101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL27160502<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL28161001<RL<RL0.1584<RL<RL<RL0.105229黑龍江紅豆杉藥業(yè)有限責(zé)任公司150302<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL30150303<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL31廣東國(guó)醫(yī)堂制藥股份有限公司160401<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL32160701<RL<RL0.2038<RL<RL<RL<RL33160801<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL34白云山和記黃埔萊達(dá)制藥（汕頭）有限公司160102<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL35江西華太藥業(yè)有限公司160807<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL36161014<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL37161250<RL<RL0.1664<RL<RL<RL<RL38161255<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL39葵花藥業(yè)集團(tuán)（伊春）有限公司20151101<RL<RL<RL<RL<RL<RL0.13644020151103<RL<RL0.2284<RL<RL<RL<RL4120170201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL42四平市吉特藥業(yè)有限公司20150702<RL<RL0.1564<RL<RL<RL<RL432015100102<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL44四平正和制藥有限公司160601<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL45161001<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL46161201<RL<RL0.24100.1764<RL<RL<RL47云南龍發(fā)制藥有限公司160101<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL48衛(wèi)材（遼寧）制藥有限公司C1610012<RL<RL0.1665<RL<RL0.0789<RL49遼寧彭健藥業(yè)有限公司20150201<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL50懷化正好制藥有限公司160301<RL<RL<RL<RL<RL<RL<RL注：<RL:低于檢測(cè)限。通過(guò)表11可以看出：50批腦得生片農(nóng)藥殘留均未超限。其中腐霉利、毒死蜱、P,P’-DDE均未過(guò)檢測(cè)限。而溴氰菊酯、氯氰菊酯、苯醚菊酯和三唑醇僅有個(gè)別過(guò)了檢測(cè)限，但低于MRL，符合安全性限度規(guī)定。相對(duì)藥材，成藥在農(nóng)藥殘留這方面相對(duì)安全。但在生粉投料時(shí)，需要對(duì)藥材進(jìn)行嚴(yán)格把控，藥材好，藥才好。3.4總體結(jié)論：從三七和葛根藥材以及腦得生片農(nóng)藥多殘留研究數(shù)據(jù)可以看出：高檢出率，高合格率。高檢出率代表了在藥材種植過(guò)程中農(nóng)藥濫用情況切實(shí)存在。高合格率代表了中藥的使用特點(diǎn)，需要炮制，不是新鮮使用，因此很多農(nóng)藥會(huì)在貯藏過(guò)程中講解，所以安全使用的風(fēng)險(xiǎn)仍屬基本可控。但是，按著國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局的要求，標(biāo)準(zhǔn)要嚴(yán)謹(jǐn)，監(jiān)管必須零容忍。所以即使樣品安全風(fēng)險(xiǎn)尚屬可控，也有必要加強(qiáng)種植等生產(chǎn)環(huán)節(jié)的監(jiān)管。4討論4.1樣品前處理?xiàng)l件考察4.1.1提取溶劑的考察根據(jù)各農(nóng)藥的性質(zhì)選用乙腈、乙酸乙酯、丙酮作為提取溶劑的考察對(duì)象，以三七藥材和成藥腦得生中檢出殘留農(nóng)藥峰面積作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：乙酸乙酯提取后指標(biāo)成分峰面積較小，丙酮和乙腈提取效率相近。但考慮到用量大，而乙腈的毒性較大，價(jià)格較貴，所以最終選擇用丙酮作為提取溶劑。此外，丙酮沸點(diǎn)低，在濃縮過(guò)程中縮短樣品處理時(shí)間，提取效率更高。但在濃縮定容的環(huán)節(jié)，用乙腈代替丙酮進(jìn)樣，是由于丙酮沸點(diǎn)低，無(wú)法保證進(jìn)樣體積的穩(wěn)定性，而乙腈進(jìn)樣對(duì)色譜柱稍有損害，但為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精密性和準(zhǔn)確性，選擇用乙腈進(jìn)樣，并選擇PTV分流進(jìn)樣，減少乙腈對(duì)色譜柱的損傷。4.1.2提取方法的選擇根據(jù)樣品的性質(zhì)，選用常用的超聲提取法和振蕩提取法作為提取方法的考察對(duì)象，以三七藥材和成藥腦得生中檢出殘留農(nóng)藥峰面積作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果表明，在其他條件一致的情況下，樣品采用振蕩提取的峰面積比超聲提取的大，故選擇振蕩提取作為提取方法。4.2基質(zhì)效應(yīng)的考察在進(jìn)行中藥中農(nóng)藥殘留分析時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)對(duì)于農(nóng)藥的準(zhǔn)確定性定量有較大影響。在氣相色譜分析中大多數(shù)農(nóng)藥表現(xiàn)為不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，主要表現(xiàn)為基體匹配標(biāo)液與相同濃度的純?nèi)軇┡渲频臉?biāo)液相比，具有更高的吸收值和更好峰性。一般認(rèn)為基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生的主要原因是由于樣品中的雜質(zhì)組分分子會(huì)與待測(cè)物分子競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)樣口或柱頭的金屬離子、硅烷基以及不揮發(fā)性物質(zhì)等所形成的活性位點(diǎn)，從而使待測(cè)物與活性位點(diǎn)的相互作用機(jī)會(huì)減少，而導(dǎo)致相同含量的待測(cè)物在實(shí)際樣品中要比在純?nèi)軇?biāo)樣中的響應(yīng)值高。為了減少待測(cè)物分子與進(jìn)樣口、柱頭活性位點(diǎn)相互作用，所以推薦選擇一種試劑競(jìng)爭(zhēng)性的與活性位點(diǎn)結(jié)合，達(dá)到屏蔽活性位點(diǎn)的效果，這種試劑稱為分析保護(hù)劑。本研究選擇D(+)-核糖酸-γ-內(nèi)酯—山梨醇為分析保護(hù)劑。4.3MRM參數(shù)分段掃描MRM參數(shù)如下表：表12MRM分段掃描信息分段分段時(shí)間（min）掃描間隔（sec）目標(biāo)離子對(duì)15.86-8.20.300185.0>93.028.2-11.020.038260.9>202.9169.1>66.0196.0>181.0306.1>264.1218.9>182.9283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0311.02-11.630.038196.0>181.0306.1>264.1283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0294.8>236.8231.00>174.9218.9>182.9411.63-12.130.034218.9>182.9283.8>248.8265.0>237.0206.0>176.0294.8>236.8231.0>174.9265.9>230.8177.0>127.1512.13-12.940.025218.9>182.9294.8>236.8231.00>174.9265.9>230.8177.0>127.1262.8>191.9285.0>212.0263.0>109.0271.80>236.90284.90>269.9612.94-13.380.025218.9>182.9262.8>191.9285.0>212.0263.0>109.0271.8>236.9284.9>269.9130.0>95.0277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0713.38-13.830.018285.0>212.0263.00>109.0271.8>236.9284.9>269.9130.0>95.0277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0813.83-14.080.020271.8>236.9284.9>269.9223.9>123.1313.9>257.9262.90>193.0300.9>222.9291.10>109208.10>181.0266.1>236.1330.9>315.9914.08-14.340.019277.0>260.0296.0>263.0223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0250.0>139.0266.0>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9352.8>262.9386.8>287.01014.34-14.790.015223.9>123.1224.0>123.0313.9>257.9262.9>193.0300.9>222.9291.1>109.0208.1>181.0250.0>139.0266.1>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9352.8>262.9386.8>287.0352.8>289.0283.0>96.0145.1>112.1168.1>70.0358.9>302.9372.8>336.81114.79-14.970.020250.0>139.0266.1>236.1330.9>315.9252.1>162.1366.9>212.9386.8>287.0352.8>