江蘇省鹽城中學(xué)2023-2024學(xué)年高二下學(xué)期3月月考生物試卷

學(xué)校：___________姓名：班級：___________考號：

一,單選題

1.研究小組用作物秸稈、小型發(fā)酵瓶、纖維素分解菌和酵母菌生產(chǎn)燃料乙醇（葡萄糖

的酒精發(fā)酵）。下列敘述正確的是（）

A.對秸稈進(jìn)行滅菌后直接用酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵

B.接種后采用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)液進(jìn)行滅菌

C.發(fā)酵過程中需要適時松開瓶口目的是提供氧氣

D.酸性重鋁酸鉀檢測酒精時需排除葡萄糖的影響

2.野生鐵皮石斛是名貴的中藥，因過度利用被列為國家重點保護(hù)植物。某科研團(tuán)隊利

用植物細(xì)胞工程技術(shù)進(jìn)行了種苗培育和有效物質(zhì)工廠化生產(chǎn)的研究。下列說法錯誤的

是（）

A.愈傷組織再分化形成的芽產(chǎn)生的生長素會抑制愈傷組織生根

B.利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)能保留植物親本的優(yōu)良性狀

C.酒精和次氯酸鈉處理后用無菌水清洗可降低兩者對外植體的傷害

D.生長素和細(xì)胞分裂素是啟動外植體細(xì)胞分裂和脫分化的關(guān)鍵激素

3.研究人員利用胚胎干細(xì)胞制造出了不能發(fā)育成完整胚胎的“擬原腸胚”模型，可用

來研究人類的早期胚胎發(fā)育。下列說法錯誤的是（）

A.動物的早期胚胎、骨髓、神經(jīng)系統(tǒng)中均存在干細(xì)胞

B.對“擬原腸胚”進(jìn)行胚胎分割，可以提高移植胚胎的利用率

C.該模型可用于研究酒精、藥物和病原體對早期胚胎發(fā)育的影響

D.利用核移植技術(shù)也能獲得胚胎干細(xì)胞，但其遺傳物質(zhì)主要來自供核體

4.猴痘是一種病毒性人畜共患病，在人類中出現(xiàn)的癥狀與過去在天花患者身上所看到

的癥狀相似，B6R蛋白是猴痘病毒的抗原。為制備抗B6R蛋白的單克隆抗體，研究人

員進(jìn)行了相關(guān)實驗，如圖所示，其中①~④表示細(xì)胞。下列敘述正確的是（）

①。。③

A.細(xì)胞①含有從小鼠的脾中得到的能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞

B.誘導(dǎo)細(xì)胞①②融合的常用方法與誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法相同

C.④過程需要添加抗生素等物質(zhì)，以防止病毒污染

D.圖中的培養(yǎng)瓶需要置于含有95%。2和5%CO2的混合氣體中培養(yǎng)

5.已知限制酶BamHI和Bglll的識別位點分別是-GJGATCC-、-AJGATCT-。下列有

關(guān)說法錯誤的是（）

A.限制酶的識別序列可能由4個、6個、8個或其他數(shù)目的核甘酸組成

B.上述兩種限制酶切割出的末端只能用E.coliDNA連接酶進(jìn)行“縫合”

C.上述兩種限制酶切割出的末端之間相互連接后可能不會再被兩種限制酶識別

D.若用兩種限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒，可提高重組質(zhì)粒構(gòu)建的成功率

6.科研人員以抗四環(huán)素基因為標(biāo)記基因，通過基因工程的方法讓大腸桿菌生產(chǎn)鼠的隹

珠蛋白，治療鼠的鐮刀型細(xì)胞貧血癥。下列相關(guān)實驗設(shè)計中，合理的是（）

A.基因表達(dá)載體中的啟動子是DNA聚合酶識別和結(jié)合的位點

B.利用小鼠的成熟紅細(xì)胞提取mRNA可獲得隹珠蛋白基因的編碼序列

C.常用Ca2+處理大腸桿菌使其成為易于吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞

D.用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出的大腸桿菌一定含有隹珠蛋白基因

7.關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（）

A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解

B.DNA既溶于2moi/LNaCl溶液也溶于蒸儲水

C.粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)

D.將粗提取的DNA溶于2moi/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑DNA被染成藍(lán)色

8.PCR擴增儀的溫度、時間和循環(huán)次數(shù)等參數(shù)設(shè)定不當(dāng)會影響到基因的擴增結(jié)果。下

圖是PCR擴增目的基因時的參數(shù)設(shè)定，圖中線上、線下分別為溫度和時間設(shè)定。下列

敘述錯誤的是（）

步驟1步驟2步驟3步驟4步驟5步驟6步驟7

（起始變性）

98℃

72℃72℃

2min10s\

GOTO

56°C/30s7min

\98℃

30s1:25

OO

A.步驟2的溫度及時間設(shè)定主要依據(jù)目的基因的G、C含量

B.步驟3的溫度及時間設(shè)定主要依據(jù)引物的長度及G、C含量

C.步驟4延伸時間的設(shè)定主要依據(jù)目的基因的堿基數(shù)目

D.步驟5除設(shè)定循環(huán)次數(shù)（25次）外，還應(yīng)將“GOTO”設(shè)定為步驟3

9.用A和B兩種限制酶同時和分別處理同一DNA片段，限制酶對應(yīng)切點一定能切

開。兩種酶切位點及酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果如圖1和圖2所示。下列敘述錯誤的是（）

電泳方向A+B酶①②

d(

限制酶A限制酶BY)q-8000

***M-6000

3500X1500500S-4500

W-3500

圖1-2000

1500

-500

圖2

A.用A和B兩種限制酶同時處理圖中同一DNA片段得到6個游離的磷酸基團(tuán)

B.圖1中X代表的堿基對數(shù)為4500,Y是限制酶A的酶切位點

C.電泳凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子大小和構(gòu)象等有關(guān)

D.設(shè)計引物從圖1中完整DNA片段中擴增出完整X,至少需要3次PCR

10.在基因工程的基本操作程序中，不進(jìn)行堿基互補配對的是（）

A.人工合成目的基因B.目的基因與運載體結(jié)合

C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D.目的基因的檢測和表達(dá)

11.常規(guī)PCR只能擴增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴增已知DNA序列兩側(cè)的未知

DNA序列，可用反向PCR技術(shù)。反向PCR技術(shù)擴增的原理如圖所示。下列敘述錯誤

的是（）

MLN

（未知序列）（已知序列）（未知序列）

電甥電冽FInTrr^n

切勿珍W珊皿;n：

A.酶切階段，L中不能含有酶切時所選限制酶的識別序列

B.PCR技術(shù)的操作步驟依次是高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸

C.圖中引物，應(yīng)選擇引物1和引物4,且二者間不能互補配對

D.PCR擴增，每輪循環(huán)前應(yīng)加入限制酶將環(huán)狀DNA切割成線狀

12.下圖為培育轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人隹酪蛋白的流程圖，下列敘述正確的是（）

A.一般通過口服促性腺激素對性成熟的母羊?qū)嵭谐瑪?shù)排卵處理

B.過程①所用的人供酪蛋白基因不可以從人cDNA文庫中獲得

C.過程③可使用胚胎分割技術(shù)擴大轉(zhuǎn)基因山羊群體

D.過程④人隹酪蛋白基因在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯

13.疫苗是人類預(yù)防疾病強有力的手段，疫苗產(chǎn)業(yè)也是醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)

的重點發(fā)展領(lǐng)域之一，目前生產(chǎn)疫苗的兩種方法主要有：利用轉(zhuǎn)基因工程菌和借助動

物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。例如，生產(chǎn)乙肝疫苗時，可以將S基因?qū)氪竽c桿菌構(gòu)建工程

菌生產(chǎn)重組乙肝疫苗，或者大規(guī)模培養(yǎng)能夠表達(dá)S蛋白的中國倉鼠卵巢細(xì)胞獲得乙肝

疫苗。下列有關(guān)兩種方法敘述錯誤的是（）

A.兩種方法都需用轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建工程菌或工程細(xì)胞

B.將S基因?qū)氪竽c桿菌構(gòu)建工程菌時需要使用鈣離子處理細(xì)胞

c.體外培養(yǎng)中國倉鼠卵巢細(xì)胞時要定期更換培養(yǎng)液以創(chuàng)造無菌環(huán)境

D.哺乳動物細(xì)胞表達(dá)的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白

14.重組PCR技術(shù)是一項新的PCR技術(shù)，通過重組PCR技術(shù)能將兩個不同的DNA

連接成為一個新DNA分子。某科研小組從豬源大腸桿菌中擴增得到LTB和ST1兩個

基因片段，利用重組PCR技術(shù)構(gòu)建了LTB—ST1融合基因，制備過程如下圖1所示。

圖2是PCR擴增后的電泳結(jié)果，據(jù)圖判斷下列說法錯誤的是（）

LTB基因ST1基因

引物P1引物P3

M表示標(biāo)準(zhǔn)對照基因

LTB—ST1融合基因1、2、3表示不同DNA電泳結(jié)果

注:?表示連接LTB和ST1基因的DNA片段

圖1圖2

A.LTB和ST1基因能夠融合的關(guān)鍵之一是引物P2、P3的部分區(qū)域能進(jìn)行堿基互補配對

B.PCR擴增時，完整的引物P2、P3應(yīng)位于子鏈的3,端才能保證擴增順利進(jìn)行

C.圖1中②過程的反應(yīng)體系中不用額外加入引物

D.LTB—ST1融合基因最可能是圖2中的條帶3

二、多選題

15.鹽害是全球水稻減產(chǎn)的重要原因之一，中國水稻研究所等單位的專家通過農(nóng)桿菌

中的質(zhì)粒將CMO基因、BADH基因、mtld基因、gutD基因和SAMDC基因5個耐鹽

基因?qū)胨?，獲得了一批耐鹽轉(zhuǎn)基因植株。有關(guān)耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻培育的分析正確的

是（）

A.該轉(zhuǎn)基因水稻與原野生型水稻不存在生殖隔離

B.該基因工程所需的限制性核酸內(nèi)切酶可能有多種

C.只要目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞，水稻就會表現(xiàn)出抗鹽性狀

D.可通過將水稻種植到有農(nóng)桿菌的土壤中觀察目的基因是否表達(dá)

16.某實驗室通過提高小鼠胚胎干細(xì)胞pSTAT3基因的表達(dá)水平，體外制備出桑意胚

樣全潛能細(xì)胞。該細(xì)胞在分子水平及發(fā)育潛能上均具有自然胚胎桑甚期細(xì)胞特性，并

在體外成功模擬了小鼠胚胎發(fā)育至原腸胚階段。根據(jù)該研究，下列敘述正確的是（）

取內(nèi)如胞團(tuán)

----------??

MApSTAH

。一麴哼一。的表達(dá)皋&N細(xì)他

注：pSTAT3是調(diào)控胚胎發(fā)育的關(guān)鍵基因

A.桑甚胚樣細(xì)胞不可誘導(dǎo)發(fā)育至囊胚期

B.誘導(dǎo)桑甚胚樣細(xì)胞時，基因的堿基序列和表達(dá)的情況都發(fā)生改變

C.囊胚期細(xì)胞重置至桑甚樣細(xì)胞的過程類似于脫分化

D.據(jù)圖推測，桑甚胚發(fā)育成囊胚的過程中，pSTAT3的表達(dá)下降

17.B型血友病患者因缺乏凝血因子IX（HX）導(dǎo)致凝血功能障礙。某腺病毒

（AAV）是一種單鏈DNA病毒，野生型AAV無致病性、免疫原性弱、有復(fù)制缺陷，

需要輔助病毒進(jìn)行復(fù)制，可作為B型血友病基因治療的載體。如圖為重組AAV病毒制

備及治療過程示意圖（HEK293細(xì)胞是人的某種細(xì)胞）。下列敘述錯誤的是（）

A.圖中目的基因是FIX基因，質(zhì)粒1~3可通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入HEK293細(xì)胞

B.HEK293細(xì)胞為重組AAV病毒的增殖提供了DNA模板、酶、ATP、氨基酸等

C.重組AAV病毒以胞吞方式進(jìn)入人體的肝細(xì)胞，攜帶的目的基因在細(xì)胞核中完成轉(zhuǎn)錄

D.質(zhì)粒上的標(biāo)記基因有利于篩選含目的基因的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)

18.鏈霉菌是一種異養(yǎng)需氧型的細(xì)菌，為利用鏈霉菌生產(chǎn)藥物A,研究者構(gòu)建重組

DNA并導(dǎo)入鏈霉菌。重組DNA含啟動子P、藥物A基因和Neo基因（卡那霉素抗性

基因）。培養(yǎng)和篩選過程如下圖所示。

Ml

DNA「[■密加深琳INe理因

即NA導(dǎo)入稀釋后

鏈霉;篩選得到

重組DNA整

合到基因組接種至培養(yǎng)含不同濃度卡那霉素

中的鏈霉菌基因培養(yǎng)并的培養(yǎng)基上各接種等

誘變處理量同一稀釋度的培養(yǎng)液

下列敘述不正確的是()

A.實驗所用培養(yǎng)基需要先調(diào)pH再行高壓蒸汽滅菌后才能使用

B.稀釋后涂布時應(yīng)用涂布器沾取少量菌液并均勻地涂布在培養(yǎng)基的表面

C.卡那霉素抗性強弱與藥物A基因的表達(dá)量呈正相關(guān)

D.應(yīng)選用培養(yǎng)基b的菌株進(jìn)一步鑒定以生產(chǎn)藥物A

三、讀圖填空題

19.從自然界篩選嗜鹽菌的一般步驟是：

采集菌樣-富集培養(yǎng)一純種分離一性能測定

(1)培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從環(huán)境采集。

(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)

量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對嗜鹽產(chǎn)淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)

應(yīng)采取的措施是選擇以為唯一碳源的培養(yǎng)基，并在__________條件下培

養(yǎng)。在富集培養(yǎng)過程中，將錐形瓶放在搖床上振蕩的目的是：、

(3)研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。

酶活性

測定

I號培養(yǎng)基按功能分類稱為培養(yǎng)基。過程①②合稱為,這是最

常用的微生物接種方法之一。若該過程所得平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液

的體積為0.2mL,稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)約為個。

(4)國際酶學(xué)會議規(guī)定的酶活力單位是Kat：在最適條件下，1秒鐘能使1摩爾底物轉(zhuǎn)化

的酶量。若菌落的大小大致相同，菌落發(fā)生的時間也相同，(填“能”或“不

能”)僅根據(jù)菌落周圍透明圈的大小來判斷該菌落所產(chǎn)生的淀粉酶單位酶量酶活力的高

低，理由是。

20.傳統(tǒng)的人工繁殖蘭花的方法是分株繁殖和種子繁殖，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們

開始采用“組織培養(yǎng)繁殖蘭花”，如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

組織細(xì)胞葉片

(1)圖中①過程為,②與④相比，分化程度,全能性

(2)蘭花的葉肉細(xì)胞之所以能培養(yǎng)為新個體，是因為細(xì)胞中含有、具有發(fā)育

成完整個體的潛能。

(3)圖中①③過程中，培養(yǎng)基的成分通常包括水、無機營養(yǎng)、有機營養(yǎng)和

等，同時，在培養(yǎng)過程中，除必要的溫度、光照和02等外界條件外，成功的另一個關(guān)

鍵是操作過程中必須保證_________操作。培養(yǎng)基的有機營養(yǎng)一般選用蔗糖而不選用

葡萄糖的理由是。

(4)有人利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)解決蘭花生根速度慢、幼苗生存能力弱的問題，操作

后得到“韭菜一蘭花”。植物體細(xì)胞雜交依據(jù)的生物學(xué)原理有.o

(5)若蘭花細(xì)胞內(nèi)有m條染色體，韭菜細(xì)胞內(nèi)有n條染色體，則“韭菜一蘭花”細(xì)胞含

.條染色體。若雜種細(xì)胞培育成的“韭菜一蘭花”植株為四倍體，則此雜種植

株的花粉經(jīng)離體培育得到的植株屬于倍體植株。

21.蝦青素可由隹胡蘿卜素在隹胡蘿卜素酮化酶(BKT)和隹胡蘿卜素羥化酶

(CRTR-B)的作用下轉(zhuǎn)化而來，具有抗衰老、增強免疫、保護(hù)心血管等功能，杜氏鹽

藻是單細(xì)胞浮游植物，生長快，易培養(yǎng)，能大量合成隹胡蘿卜素，科研人員將BKT基

因和CRTR-B基因?qū)攵攀消}藻，構(gòu)建杜氏鹽藻細(xì)胞工廠高效生產(chǎn)蝦青素。

(1)獲取目的基因：雨生紅球藻是天然蝦青素重要來源，提取雨生紅球藻的總DNA為

模板，設(shè)計特異性引物擴增BKT基因和CRTR-B基因，此過程需要酶的催

化。

8

上游同源序列2BKT基因CRTR-B基因下游同源序列2

(2)構(gòu)建轉(zhuǎn)化載體：“無縫克隆法”是構(gòu)建重組質(zhì)粒的新方法，指利用同源重組酶將末端

具有一致同源序列的線性化載體和目的基因連接形成重組質(zhì)粒，圖1表示利用“無縫克

隆法”向質(zhì)粒中插入抗除草劑基因的基本過程。

I.PCR獲取抗除草劑基因過程中，為確?；騼啥司哂兴柰葱蛄?，需在引物的

.端添加對應(yīng)的同源序列。若要確?？钩輨┗蚰軌驈闹亟M質(zhì)粒中切除，

還需要在基因兩側(cè)加入限制酶識別序列，則所需引物(5，-3，)的序列應(yīng)為：

A.同源序列+特異性擴增引物序列+限制酶識別序列

B.同源序列+限制酶識別序列+特異性擴增引物序列

C.特異性擴增引物序列+限制酶識別序列+同源序列

n.科研人員利用“無縫克隆法”同時將BKT基因和CRTR-B基因插入質(zhì)粒，形成的重組

質(zhì)粒對應(yīng)部位如圖2所示，推測此過程擴增BKT基因所用的引物為；擴增

CRTR-B基因所用的引物為；

III.最終形成的重組質(zhì)粒如圖3所示，其中atpA啟動子和psbA啟動子均為杜氏鹽藻葉

綠體啟動子，選用內(nèi)源性啟動子的目的是.；

IV.與傳統(tǒng)的酶切法構(gòu)建重組質(zhì)粒相比，“無縫克隆法”具備的優(yōu)勢有o

(3)目的基因?qū)爰跋嚓P(guān)檢測：采用基因槍法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入杜氏鹽藻葉綠體，一段時

間后，用含的培養(yǎng)基篩選已轉(zhuǎn)化的杜氏鹽藻，通過相關(guān)技術(shù)檢測目的基因

是否成功表達(dá)。

(4)葉綠體轉(zhuǎn)化是植物基因工程的新熱點，葉綠體的諸多特點為葉綠體轉(zhuǎn)化提供優(yōu)勢，

如葉綠體基因組小，功能清晰，使基因操作方便；葉綠體細(xì)胞具有自我復(fù)制功能，一

個植物細(xì)胞可含有多個葉綠體，每個葉綠體中含有多個基因組，可大大提高

;另外,葉綠體基因位于細(xì)胞質(zhì)中，可有效避免。

四、實驗探究題

22.我國研究人員在世界上率先利用去甲基化酶(Kd4d)的mRNA,經(jīng)體細(xì)胞核移植

技術(shù)培育出第一批靈長類動物——食蟹猴，流程如圖所示，①?⑥表示過程，該動物

可作為研究癌癥等人類疾病的動物模型。請據(jù)圖分析回答:

雌性食蟹猴

囊胚形成率(Y/X)%內(nèi)細(xì)胞團(tuán)形成率(Z/Y)%

801

11/17

成纖維細(xì)胞

60'

注入Kd4dmRNA''^[②

40'

融合細(xì)胞20-

0/4II

0

A組B組

⑥注：X為融合細(xì)胞發(fā)育成的胚胎數(shù)

Y為囊胚數(shù)

體細(xì)胞核移植食蟹猴Z為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)

(1)動物細(xì)胞核移植過程中，通常采用卵(母)細(xì)胞作為受體細(xì)胞，原因可能是其細(xì)胞

質(zhì)中。用于核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代至10代內(nèi)的細(xì)胞，原因是傳至

10代內(nèi)的細(xì)胞o

(2)進(jìn)行過程①時，細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分與植物組織培養(yǎng)基成分最主要的區(qū)別在于前

者含有,且在進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)時會出現(xiàn)現(xiàn)象。

(3)動物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是。圖中過程⑤用到

技術(shù)，其實質(zhì)是早期胚胎在__________條件下空間位置的轉(zhuǎn)移。除圖中所

示外，胚胎的來源還有(答出兩點)。

(4)研究人員在確定去甲基化酶(Kd4d)的mRNA的作用時，做了兩組實驗，其中A

組用正常培養(yǎng)液培養(yǎng)融合細(xì)胞，B組用正常培養(yǎng)液培養(yǎng)注入了Kd4d的mRNA的融合

細(xì)胞，實驗結(jié)果如下圖所示。分析實驗數(shù)據(jù)可知，Kd4d的mRNA的作用是

(5)有人提出：將經(jīng)特定抗原刺激的B淋巴細(xì)胞核移植到去核骨髓瘤細(xì)胞中來產(chǎn)生單克

隆抗體，此方法（填“能”或“不能”）獲得既能分泌抗體、又能無限增殖的

細(xì)胞。

23.CRISPR-Casl2a系統(tǒng)是第二類用于編輯哺乳動物基因組的CRISPR-Cas系統(tǒng)，該

系統(tǒng)主要包含crRNA和Casl2a蛋白兩部分，crRNA能特異性識別并結(jié)合特定的DNA

序列，從而引導(dǎo)Casl2a蛋白到相應(yīng)位置剪切DNA。某科研團(tuán)隊基于CRTSPR-Casl2a

系統(tǒng)對宮頸癌細(xì)胞中的KIFC1基因進(jìn)行敲除，來探討KIFCI基因在宮頸癌細(xì)胞中的功

能及對宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的影響。

⑴在CRISPR-Casl2a系統(tǒng)中，crRNA的序列與目的基因特定堿基序列部分結(jié)合，結(jié)合

區(qū)域最多含種核甘酸；細(xì)菌細(xì)胞中的_________也能起到類似Casl2a蛋白

的作用。若要將KIFCI基因從目標(biāo)DNA上剪切下來，需要設(shè)計種

crRNAo

（2）為保證目的基因與PX458質(zhì)粒正確連接，在擴增目的基因時，應(yīng)在引物端加入相應(yīng)

的限制酶序列，其中P1的堿基序列為5。.3（寫出前9個堿基）。采用

PCR技術(shù)對一個DNA進(jìn)行擴增時，第n次循環(huán)共需要引物_________個。

U6為啟動子，以a鏈為轉(zhuǎn)錄模板;

CMV為啟動子；

4amp，為氨芳青霉素抗性基因；

5'-GAACTAAAAC-GTGCCGTGAG-3'三種限制酶的識別序列為：

3'-CTTGATTTTG-CACGGCACTC-5'Pvitll：5'CAGICTG3'

P2>crRNA對應(yīng)的基因序列KpnI：5'GIGTACC3'

EcoRI：5'GIAATTC3'

（A鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈）

⑶在目的基因與PX458質(zhì)粒連接時，可用（填“E.coliDNA連接酶”或

T4DNA連接酶”）進(jìn)行連接。

（4）將crRNA-Casl2a重組載體成功轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞，與對照組相比，實驗組中KIFC1

蛋白表達(dá)量如圖2所示，細(xì)胞數(shù)目的變化如圖3所示，由此可得出的結(jié)論是KIFC1基

因可以HeLa細(xì)胞的增殖，判斷依據(jù)是敲除細(xì)胞株中KIFC1蛋白表達(dá)量明

顯下降，證明HeLa細(xì)胞中；KIFC1敲除組細(xì)胞數(shù)目顯著對照

組，表明KIFC1敲除可使HeLa細(xì)胞

對照組實驗組o?

14oa對照組

KIICIb實驗組

^3整o

7(o

參照蛋白40o

)o，■_?時間

246810

圖2圖3

參考答案

1.答案：D

解析：A、秸稈中含有纖維素，纖維素分解菌將纖維素分解為葡萄糖后酵母菌再利用

葡萄糖進(jìn)行酒精發(fā)酵，酵母菌不能分解纖維素，A錯誤；

B、酒精發(fā)酵前需對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，接種后滅菌會將培養(yǎng)液菌體全部殺

死，影響發(fā)酵，B錯誤；

C、酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精，發(fā)酵過程中需要適時松開瓶蓋，目的是排出二氧化

碳，C錯誤；

D、由于葡萄糖也能與酸性重銘酸鉀反應(yīng)發(fā)生顏色變化，因此酸性重銘酸鉀檢測酒精

時，應(yīng)將酵母菌的培養(yǎng)時間適當(dāng)延長以耗盡溶液中的葡萄糖，以排除葡萄糖的影響，

D正確。

故選D。

2.答案：A

解析：A、愈傷組織再分化形成的芽產(chǎn)生的生長素會促進(jìn)愈傷組織生根，A錯誤；

B、利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)能保留植物親本的優(yōu)良性狀，屬于無性繁殖，B正確；

C、酒精和次氯酸鈉作為消毒劑，長時間處理會毒害外植體，故酒精和次氯酸鈉處理

后用無菌水清洗可降低兩者對外植體的傷害，C正確；

D、生長素促進(jìn)生根，細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂，生長素和細(xì)胞分裂素是啟動外植體

細(xì)胞分裂和脫分化的關(guān)鍵激素，D正確。

故選A。

3.答案：B

解析：A、干細(xì)胞是動物和人體內(nèi)保留的少數(shù)具有分裂分化能力的細(xì)胞，存在于動物

的早期胚胎、骨髓、神經(jīng)系統(tǒng)中，A正確;B、胚胎分割移植需要選擇形態(tài)正常，發(fā)育

良好的桑甚胚或囊胚，B錯誤;C、根據(jù)題意可推知，該模型可以研究酒精、藥物和病

原體對胚胎發(fā)育的影響，C正確;D、利用核移植技術(shù)也能獲得胚胎干細(xì)胞，而核移植

技術(shù)所得的細(xì)胞的遺傳物質(zhì)主要來自供核體，D正確。故選B。

4.答案：A

解析：A、單克隆抗體制備過程中需要將產(chǎn)生特定抗體的漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，

給小鼠注射B6R蛋白的目的是使小鼠針對該抗原產(chǎn)生特異性免疫，從而使體內(nèi)出現(xiàn)能

產(chǎn)生抗B6R蛋白抗體的漿細(xì)胞，因此從小鼠脾臟提取的細(xì)胞①含有能產(chǎn)生特定抗體的

B淋巴細(xì)胞，A正確；

B、誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合特有的方法是滅活的病毒，因此誘導(dǎo)細(xì)胞①②融合的常用方法

與誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法不完全相同，B錯誤；

C、抗生素可以抑制細(xì)菌的生長，不能抑制病毒的生長，C錯誤；

D、圖中的培養(yǎng)瓶需要置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體中培養(yǎng)，D錯誤。

故選Ao

5.答案：B

解析：A、不同限制酶識別序列有差異，限制酶的識別序列可能由4個、6個、8個或

其他數(shù)目的核甘酸組成，A正確；

B、上述兩種限制酶切割出的末端為粘性末端，能用E.coliDNA連接酶和T4DNA連

接酶進(jìn)行“縫合”，B錯誤；

-AGATCC-

C、上述兩種限制酶切割出的末端之間相互連接后形成的序列為-TCTAGG-,不會再

被兩種限制酶識別，C正確；

D、若用兩種限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒，可形成不同的末端，能避免目的基因

和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接，從而提高重組質(zhì)粒構(gòu)建的成功率，D正確。

故選B。

6.答案：C

解析：A、基因表達(dá)載體中的啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，可用于驅(qū)動基

因的轉(zhuǎn)錄，A錯誤；

B、哺乳動物的成熟紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核和核糖體等結(jié)構(gòu)，所以不能利用小鼠的成熟

紅細(xì)胞提取mRNA,B錯誤；

C、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法，常用Ca2+處理大腸桿菌使其成為

易于吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞，C正確；

D、標(biāo)記基因的作用是篩選含有目的基因的受體細(xì)胞，用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出

已經(jīng)導(dǎo)入隹珠蛋白編碼序列的大腸桿菌，不一定能產(chǎn)生供珠蛋白，D錯誤。

故選C。

7.答案：D

解析：A、低溫時DNA酶的活性較低，過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止

DNA降解，A正確；

B、DNA既溶于2moi/LNaCl溶液也溶于蒸儲水，且溶解度較高，B正確；

C、粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)，因此為了獲得純度較高的DNA需要

進(jìn)一步提純，C正確；

D、將粗提取的DNA溶于2moi/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑后經(jīng)過水浴加熱可發(fā)

現(xiàn)DNA被染成藍(lán)色，D錯誤。

故選D。

8.答案：D

解析：A、步驟2是變性過程，是在高溫條件下使DNA分子解旋的過程，由于G和C

之間有3個氫鍵，熱穩(wěn)定性高，故步驟2的溫度及時間設(shè)定主要依據(jù)目的基因的G、C

含量，A正確；

B、步驟3是復(fù)性過程，一般情況下，引物的長度越長，G和C比例越高，則復(fù)性步

驟中的復(fù)性溫度設(shè)定就越高，B正確；

C、步驟4是延伸過程，時長的設(shè)置依據(jù)目的基因的長度，即主要依據(jù)目的基因的堿

基數(shù)目，C正確；

D、“GOTO”是設(shè)置返回的步驟序號，參數(shù)應(yīng)設(shè)置為步驟“1”，D錯誤。

故選D。

9.答案：A

解析：A、由題可知，圖2中三列條帶分別對應(yīng)用A和B兩種限制酶同時以及單獨使

用限制酶A、限制酶B處理DNA片段的酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果，再通過①和②的結(jié)

果結(jié)合圖1,分析可知①是單獨使用限制酶A處理DNA片段的酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)

果，②是單獨使用限制酶B處理DNA片段的酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果。限制酶能夠識

別雙鏈DNA分子的特定核昔酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核甘酸之間

的磷酸二酯鍵斷開。用A和B兩種限制酶同時處理圖中同一DNA片段最終得到8個

游離的磷酸基團(tuán)，A錯誤；

B、結(jié)合圖1和圖2中第一列A+B酶同時處理的電泳條帶結(jié)果分析可知，圖1中X代

表的堿基對數(shù)為4500,根據(jù)圖2中①電泳分離結(jié)果存在3500bp長度的條帶可知①是

單獨使用限制酶A處理DNA片段的酶切產(chǎn)物電泳分離結(jié)果，再根據(jù)①電泳分離結(jié)果

存在500bp長度和6000bp長度的條帶可知Y是限制酶A的酶切位點，B正確；

C、電泳凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子大小和構(gòu)象等有關(guān)，C

正確；

D、設(shè)計引物從圖1中完整DNA片段中擴增出完整X,至少需要3次PCR,D正確。

故選A。

10.答案：C

解析：A、人工合成基因形成雙鏈時，需要進(jìn)行堿基互補配對，A錯誤；

B、目的基因與運載體結(jié)合時，黏性末端之間的連接進(jìn)行堿基互補配對，B錯誤；

C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時不進(jìn)行堿基互補配對，C正確；

D、檢測目的基因時需要用到基因探針，進(jìn)行堿基互補配對；目的基因的表達(dá)包括轉(zhuǎn)

錄和翻譯，進(jìn)行堿基互補配對，D錯誤。

故選C。

11.答案：D

解析：A、在酶切階段，已知序列L中不能含有酶切時所選限制酶的識別序列，不然

會將已知序列L切斷，造成序列識別混亂，A正確；

B、PCR技術(shù)的操作步驟依次是高溫使DNA變性、低溫復(fù)性（使DNA單鏈與引物結(jié)

合）、中溫延伸，B正確；

C、PCR過程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3,端通過堿基互補配對結(jié)

合，為保證延伸的是已知序列兩側(cè)的未知序列，應(yīng)該選擇引物1和引物4,且二者間

不能互補配對，C正確；

D、PCR的擴增只需要第一次循環(huán)前加入足夠的限制酶，并不需要每輪都加入，D錯

誤。

故選D。

12.答案：C

解析：A、促性腺激素的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，不能口服，A錯誤；

B、由圖可知，①過程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，獲取目的基因（人隹酪蛋白基因）

的方法之一就是從人cDNA文庫中獲取，B錯誤；

C、③表示胚胎分割移植，胚胎分割技術(shù)可以得到多個遺傳性狀相同的個體，在③過

程中可以應(yīng)用，C正確；

D、④表示人隹酪蛋白基因表達(dá)，包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個過程，對于真核生物而言，轉(zhuǎn)

錄主要發(fā)生在細(xì)胞核中，翻譯過程發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)中，D錯誤。

故選：Co

13.答案：C

解析：A、前者生產(chǎn)乙肝疫苗時，需要培養(yǎng)導(dǎo)入了S基因的大腸桿菌，后者生產(chǎn)乙肝

疫苗時，需要大規(guī)模培養(yǎng)中國倉鼠卵巢細(xì)胞，A正確；

B、將S基因?qū)氪竽c桿菌構(gòu)建工程菌時需要使用鈣離子處理細(xì)胞，鈣離子增加細(xì)胞

的通透性，有利于S基因的導(dǎo)入，B正確；

C、體外培養(yǎng)中國倉鼠卵巢細(xì)胞時要定期更換培養(yǎng)液以補充營養(yǎng)，減少代謝廢物的積

累，C錯誤；

D、哺乳動物細(xì)胞為真核生物細(xì)胞，可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的加工，乙肝病毒感染

真核細(xì)胞，因此真核細(xì)胞表達(dá)的外源蛋白，更接近乙肝病毒的S蛋白，D正確。

故選C。

14.答案：B

解析：A、LTB和ST1基因能夠融合的關(guān)鍵是P2和P3兩種引物的部分區(qū)域能發(fā)生堿

基互補配對，堿基互補配對區(qū)域的堿基之間能夠重合在一起，從而將兩個基因融合在

一起，A正確；

B、DNA的合成方向是從子鏈的5,端自3,端延伸的，因此PCR擴增時，完整的引物

P2、P3應(yīng)位于子鏈的5,端才能保證擴增順利進(jìn)行，B錯誤；

C、②過程不需要加入引物，兩條母鏈的起始段位置的堿基序列即為引物，可以作為

子鏈合成的引物，為DNA聚合酶提供3,端，C正確；

D、電泳時DNA的遷移速率主要受核酸片段長度影響，核酸片段長度越長遷移速率越

慢，LTB—ST1融合基因相對LTB、ST1基因核酸片段長度大，故最可能是圖2中的條

帶3,D正確。

故選B。

15.答案：AB

解析：A、轉(zhuǎn)基因?qū)儆诨蛑亟M，未產(chǎn)生新物種，該轉(zhuǎn)基因水稻與原野生型水稻不存

在生殖隔離，A正確；

B、不同的目的基因可能需要不同的限制酶進(jìn)行切割，因此該基因工程所需的限制性

核酸內(nèi)切酶可能有多種，B正確；

C、目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞后，還要檢測目的基因是否表達(dá)，如果不表達(dá)水稻不會表

現(xiàn)出抗鹽性狀，C錯誤；

D、可通過將水稻種植到鹽堿地觀察水稻是否表現(xiàn)出抗鹽性狀，D錯誤。

故選ABo

16.答案：CD

解析：A、胚胎發(fā)育的過程為受精卵一桑根胚―囊胚―原腸胚一幼體，因此桑甚胚樣

細(xì)胞可誘導(dǎo)發(fā)育至囊胚期，A錯誤；

B、誘導(dǎo)桑甚胚樣細(xì)胞時，其本質(zhì)是細(xì)胞分化，基因的堿基序列并未發(fā)生改變，B錯

誤；

C、胚胎發(fā)育至囊胚期即開始了細(xì)胞分化，因此囊胚期細(xì)胞重置至桑甚樣細(xì)胞的過程

類似于脫分化，C正確；

D、具體分析通過提高小鼠胚胎干細(xì)胞pSTAT3基因的表達(dá)水平，體外制備出桑甚胚樣

全潛能細(xì)胞，因此推斷桑意胚發(fā)育成囊胚的過程中，pSTAT3的表達(dá)下降，D正確。

故選CDo

17.答案：ABD

解析：A、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法，而HEK293細(xì)胞是

人的某種細(xì)胞，質(zhì)粒1~3可通過顯微注射法導(dǎo)入HEK293細(xì)胞，A錯誤；

B、HEK293細(xì)胞無法為重組AAV病毒的增殖提供DNA模板，重組AAV病毒的增殖

的模板為其自身的遺傳物質(zhì)，B錯誤；

C、從圖示信息可以看出，重組AAV病毒以胞吞方式進(jìn)入人體的肝細(xì)胞，攜帶的目的

基因在細(xì)胞核中完成轉(zhuǎn)錄，最終合成FIX,C正確；

D、質(zhì)粒上的標(biāo)記基因有利于篩選含目的基因的細(xì)胞，沒有促進(jìn)目的基因表達(dá)的作

用，D錯誤。

故選ABDo

18.答案：BD

解析：A、培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌，否則會被再次污染，所以在制培養(yǎng)基時，都

是要先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌，A正確；

B、先取少量菌液滴加到培養(yǎng)基表面，再用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，B

錯誤；

C、藥物A基因和Neo基因（卡那霉素抗性基因）共用一個啟動子，二者共同表達(dá)，

所以卡那霉素抗性強弱可反映藥物A基因的表達(dá)量，二者呈正相關(guān)，C正確；

D、誘變處理后將菌液稀釋后涂布，在含不同濃度卡那霉素的培養(yǎng)基上各接種等量同

一稀釋度的培養(yǎng)液，應(yīng)該選擇含卡那霉素濃度最高的培養(yǎng)基（即d）上所長出的菌

落，其生產(chǎn)藥物A的能力也較強，D錯誤。

故選BDo

19.答案：(1)高鹽

(2)淀粉；高鹽；提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；增加培養(yǎng)液中的溶氧量

(3)選擇；稀釋涂布平板；2.5x107個

(4)不能；透明圈的大小可能是不同菌落產(chǎn)生的酶量不同導(dǎo)致

解析：(1)自然界中目的菌株的篩選的依據(jù)是根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)

境中去尋找，培養(yǎng)噬鹽菌的菌樣應(yīng)從海灘等含鹽高的環(huán)境采集取樣。

(2)若要獲得目的菌株，需要對嗜鹽產(chǎn)淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇以淀粉為唯一

碳源的培養(yǎng)基，并在高鹽條件下培養(yǎng)。在富集培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振

蕩，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能增加培養(yǎng)

液中的溶氧量，從而更有利于該微生物的生長繁殖。

(3)按功能分，圖中I號培養(yǎng)基是為了選出目的菌株，為選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基需以

淀粉為唯一的碳源。從液體菌種到固體平板的過程及菌落生長均勻可推知，過程①②

為稀釋涂布平板法。每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)約為50+0.2x105=2.5x107個。

(4)酶活力相同時，酶量越大，透明圈就越大，透明圈的大小可能由不同菌落產(chǎn)生的

酶量不同導(dǎo)致，因此若菌落的大小大致相同，菌落發(fā)生的時間也相同，不能僅根據(jù)菌

落周圍透明的大小來判斷該菌落所產(chǎn)生的淀粉酶單位酶量酶活力的高低。

20.答案：(1)脫分化；低；高

(2)本物種的全部遺傳信息

(3)植物激素；無菌；蔗糖較葡萄糖能更好地調(diào)節(jié)培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓

(4)細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞的全能性

(5)m+n；單

解析：(1)由圖可知：①過程為脫分化，②為愈傷組織，④是胚狀體。②與④相比，

②的細(xì)胞分裂能力強，分化程度低，全能性高。

(2)由于蘭花的葉肉細(xì)胞含有本物種的全部遺傳信息，所以能將離體的蘭花葉肉細(xì)胞

培養(yǎng)為新個體。

(3)①表示脫分化，③表示再分化，在其過程中，培養(yǎng)基的成分通常包括水、無機營

養(yǎng)、有機營養(yǎng)和植物激素等，同時，在培養(yǎng)過程中，除必要的溫度、光照和02等外界

條件外，成功的另一個關(guān)鍵是操作過程中必須保證無菌操作。培養(yǎng)基的有機營養(yǎng)一般

選用蔗糖而不選用葡萄糖的理由是葡萄糖更易被細(xì)胞選擇性吸收，所以蔗糖較葡萄糖

能更好地調(diào)節(jié)培養(yǎng)基內(nèi)的滲透壓。

（4）植物體細(xì)胞雜交經(jīng)過了植物細(xì)胞融合和植物組織培養(yǎng)兩個階段，其原理分別是細(xì)

胞膜的流動性和植物細(xì)胞的全能性，也即植物體細(xì)胞雜交的原理。

（5）經(jīng)過植物體細(xì)胞雜交，所得到的“韭菜一蘭花”細(xì)胞中含有的染色體數(shù)目是蘭花細(xì)

胞和韭菜細(xì)胞的染色體數(shù)目之和，即m+n。四倍體的“韭菜一蘭花”植株，經(jīng)過花藥離

體培養(yǎng)，得到的植株是單倍體。

21.答案：（l）TaqDNA聚合酶

（2）5,；B；①③/③①；⑥⑧/⑧⑥；確保目的基因能表達(dá)；可同時導(dǎo)入多個外源基因；

不受限制種識別序列的限制，可在載體的任意位點插入目的基因

（3）除草劑

（4）目的基因的表達(dá)量；基因污染

解析：（1）因雨生紅球藻是天然蝦青素重要來源，是目的基因的來源，故可提取雨生

紅球藻的總DNA為模板，設(shè)計特異性引物擴增其DNA中的BKT基