CCSA80代替GB/T21607—2008化學品一代繁殖毒性試驗方法國家市場監(jiān)督管理總局I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21607—2008《化學品一代繁殖毒性試驗方法》,與GB/T21607—2008相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：——更改了實驗動物種屬和品系的選擇規(guī)定中的部分內(nèi)容(見4.1,2008年版的4.1);——更改了試驗步驟中分組和對照規(guī)定中的部分內(nèi)容(見5.1,2008年版的5.1);——更改了染毒時間和程序(見5.4,2008年版的5.4)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由全國危險化學品管理標準化技術(shù)委員會(SAC/TC251)提出并歸口。本文件起草單位：天津海關(guān)工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心、中檢科健(天津)檢驗檢測有限責任公司、天津工業(yè)大學、廈門凱越特科技有限公司、廣東義勝檢測有限公司。向小云。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2008年首次發(fā)布為GB/T21607—2008;——本次為第一次修訂。1化學品一代繁殖毒性試驗方法本文件規(guī)定了化學品的一代繁殖毒性試驗的實驗動物、試驗步驟、結(jié)果評價、試驗報告、試驗結(jié)果的解釋。本文件適用于化學品的一代繁殖毒性的試驗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T14924.1實驗動物配合飼料通用質(zhì)量標準GB14925實驗動物環(huán)境及設施3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。繁殖毒性reproductiontoxicity化學品引起的雌性或雄性實驗動物生殖功能的損傷或生殖能力的降低，或引起子代的非遺傳性不良效應。注1:生殖能力降低，如繁殖率的下降。注2:子代的非遺傳性不良效應，如生長發(fā)育毒性，包括哺乳期的健康損害效應和致畸性。4實驗動物4.1實驗動物的選擇選擇健康初成年且至少經(jīng)過5d適應期的實驗動物(首選大鼠或小鼠)來進行繁殖毒性試驗。雌性動物應選擇未產(chǎn)過仔的。試驗開始時動物體重的差異不應超過平均體重的士20%。4.2實驗動物的數(shù)量雄性和雌性實驗動物按1:1或1:2的比例合籠交配。交配的實驗動物數(shù)應保證每個劑量組及空白對照組都能獲得20只左右懷孕的實驗動物。4.3飼養(yǎng)環(huán)境實驗動物的飼養(yǎng)和環(huán)境設施應符合GB/T14924.1和GB14925的要求。實驗動物自由飲食。懷孕的實驗動物臨近分娩時，應單籠飼養(yǎng)，需要時在分娩籠中放置造窩墊料。25試驗步驟5.1分組和對照染毒前將實驗動物隨機分為受試劑量組和空白對照組。如果受試樣品使用賦形劑，空白對照組應采用賦形劑的試驗組最大使用量進行平行染毒。如果受試樣品引起動物食物攝入量和利用率下降時，那么空白對照組的實驗動物應與受試劑量組實驗動物配對喂飼。5.2劑量水平試驗至少設最高劑量、中間劑量、低劑量三個劑量組和一個空白對照組。最高劑量應使親代實驗動物(F0代)出現(xiàn)明顯的毒性反應，但不引起實驗動物死亡；中間劑量可引起輕微的毒性反應；低劑量應不引起實驗動物及其子代的任何毒性反應。如果受試樣品的毒性較低，劑量達到1000mg/kg時，仍未對繁殖過程產(chǎn)生任何毒作用，則可以采用限量試驗，即試驗不設其他劑量組。若高劑量的預試驗觀察到明顯的母體(F0代)毒性作用，但對生育無影響，也可以采用預試驗的高劑量進行限量試驗。5.3染毒劑量如果受試樣品是通過灌胃或膠囊染毒時，給樣量應按每只實驗動物的體重來確定，且每周進行調(diào)整。對于妊娠期的母體(FO代),給樣量應按每日體重計算，或按妊娠的第0天或第5天的體重計算。5.4染毒時間和程序?qū)嶒瀯游锶径緯r間，如采用大鼠，雄性FO代至少適應5d后開始給與受試樣品，染毒時間不少于10周，如采用小鼠，染毒時間約8周(至少覆蓋一個完整的精子生長周期)。交配后處死雄性實驗動物并進行檢查，或保留雄性實驗動物至第二窩生產(chǎn)后試驗結(jié)束前處死并進行大體解剖和指標檢測。對于雌性大鼠F0代，至少適應5d后開始給與受試物，給與時間從交配期兩周前開始并覆蓋交配期(3周時間)、妊娠期直到F1代斷乳的整個周期。5.5交配程序5.5.1雄性和雌性實驗動物按1:1或1:2的比例進行交配。5.5.2雌性實驗動物應始終與同劑量組的同一只雄性實驗動物合籠直至受孕，合籠最長時間可為3周。將檢查到精子或陰栓的當天計為雌性實驗動物妊娠的第0天(判為交配成功實驗動物)。5.6窩的規(guī)格出生后的第4天，應將幼仔數(shù)盡量隨機調(diào)整到每窩4雌和4雄。若得不到4雌和4雄，可作不均等的調(diào)整(如5雄3雌),但每窩的幼仔數(shù)至少為8只。5.7觀察及檢查每日應至少觀察實驗動物一次，記錄有無行為改變，難產(chǎn)或滯產(chǎn)以及所有的毒性反應(包括死亡)。3GB/T21607—20225.7.2體重和食物攝入量5.7.2.1在交配前和交配期，應測定每只實驗動物每天的食物攝入量(交配期間雌、雄實驗動物攝食量分別按交配前一周平均值計算)。5.7.2.2產(chǎn)仔后，每窩幼仔稱量體重時，母體(F0代)的食物攝入量也應同時計算。5.7.2.3如受試樣品是添加到水中進行染毒的，還應記錄水的攝入量。5.7.2.4親代實驗動物(FO代)應在染毒的第1天進行稱重，之后每周稱量體重一次。5.7.2.5妊娠周期應從懷孕的第0天開始計算。生產(chǎn)下的幼仔應盡早分辨性別，記錄每窩的出生數(shù)、活仔數(shù)以及幼仔外觀有無異常和畸形，同時記錄母體(F0代)或幼仔在生理上和行為上的異常表現(xiàn)。5.7.2.6以每窩為單位，對幼仔于出生的當天、第4天、第7天、第14天和第21天進行稱重，并記錄母體(F0代)或幼仔在生理上和行為上的異常表現(xiàn)。5.7.3大體解剖檢查死亡和到期處死的親代實驗動物(FO代)都應解剖進行大體檢查，肉眼觀察有無組織器官形態(tài)上的改變，特別是生殖器官。死亡或瀕臨死亡的幼仔也應接受檢查，查看是否有外觀或器官形態(tài)上的缺陷。5.7.4病理組織學檢查保留解剖檢查的所有親代實驗動物(FO凝固腺、腦下垂體和靶器官標本。先對最高劑量組和空白對照組的動物標本以及剖檢中發(fā)現(xiàn)異常的標本進行組織病理學檢查。如最高劑量組沒有發(fā)現(xiàn)有意義的病變，其他劑量組的標本可不再進行病理檢查。若最高劑量組發(fā)現(xiàn)有意義的病理改變，則其他劑量組相關(guān)的標本也應做進一步的檢查。6結(jié)果評價6.1繁殖指數(shù)通過參數(shù)計算公式(1)～公式(5)評價繁殖指數(shù)。 (1) (2) (3) (4) (5)6.2數(shù)據(jù)處理6.2.1用列表表示試驗數(shù)據(jù)，表中應顯示每組的實驗動物數(shù)、交配的雄性動物數(shù)、受孕的雌性動物數(shù)、各種毒性反應，包括但不限于生殖率的改變、臨床異常、體重減輕、死亡率的影響及其他的毒性反應。6.2.2應采用適當?shù)慕y(tǒng)計方法對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。6.3結(jié)果評價應逐一比較空白對照組與受試劑量組動物繁殖指數(shù)是否有顯著性差異，還可根據(jù)出現(xiàn)統(tǒng)計學差異4的指標(如體重等觀察指標、大體解剖和病理組織學檢查結(jié)果等),進一步估計繁殖毒性的損害作用7試驗報告試驗報告應包括以下內(nèi)容：——實驗動物的種屬、品系、性別、體重、數(shù)量和來源(注明實驗動物合格證號和實驗動物級別);——實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對濕度、合籠或單籠飼養(yǎng)、實驗動物使用許可證號；——親代實驗動物(F0代)的食物攝入量和體重資料；——按性別和劑量組分別記錄的毒性反應，包括繁殖、妊娠和發(fā)育能力的異常；——試驗過程中，動物死亡的時間以及試驗到期時是否還有存活的動物；——每窩幼仔的體重和幼仔的平均體重，以及試驗后期單個幼仔的重量；——任何有關(guān)繁殖、幼仔及其生長發(fā)育的毒性和其他健康損害效應；——觀察到的各種異常癥狀的時間和持續(xù)過程； 大體解剖檢查的結(jié)果——詳述病理組織學檢查結(jié)果；——統(tǒng)計分析的結(jié)果；——結(jié)論。8試驗結(jié)果的解釋本試驗可反映實驗動物在多次接觸某一受試樣品后所產(chǎn)生的一代繁殖毒性。在分析結(jié)果時，應將其與亞慢性試驗、致畸試驗以