霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)目錄/Contents01微生物檢驗(yàn)室霉菌形態(tài)觀察技術(shù)01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（一）直接制片觀察法直接制片觀察法：是將培養(yǎng)物置于乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制片鏡檢。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片其特點(diǎn)是：①細(xì)胞不變形；②具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長(zhǎng)時(shí)間；③溶液本身呈藍(lán)色，有一定染色效果。

01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（二）載玻片培養(yǎng)觀察法載玻片培養(yǎng)觀察法：此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。這種方法可觀察霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)。

01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（三）玻璃紙培養(yǎng)觀察法玻璃紙培養(yǎng)觀察法：為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長(zhǎng)在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長(zhǎng)菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)（1）一般觀察法于潔凈載玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細(xì)心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)

（2）載玻片觀察法①將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好，用1.05kg/cm2，121.3℃滅菌20min或干熱滅菌，備用。②將6～7mL滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后，用無菌解剖刀切成0.5～1cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。01霉菌的形態(tài)觀察技術(shù)

（2）載玻片觀察法③用滅菌的尖細(xì)接種針或裝有柄的縫衣針，取（肉眼方能看見的）一點(diǎn)霉菌孢子，輕輕點(diǎn)在瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋。④在培養(yǎng)皿的濾紙上，加無菌的20％甘油數(shù)毫升，至濾紙濕潤(rùn)即可停加。將培養(yǎng)皿置28℃培養(yǎng)一定時(shí)間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。食品商業(yè)無菌的檢驗(yàn)?zāi)夸?Contents1材料、試劑及設(shè)備操作程序結(jié)果判定食品商業(yè)無菌的檢驗(yàn)2301材料、試劑及設(shè)備設(shè)備和材料冰箱；恒溫培養(yǎng)箱；恒溫水浴箱；均質(zhì)器及無菌均質(zhì)袋、均質(zhì)杯或乳缽；電位pH計(jì)（精確度pH0.05單位）；顯微鏡；開罐器和罐頭打孔器；電子秤或臺(tái)式天平；超凈工作臺(tái)或百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室01材料、試劑及設(shè)備培養(yǎng)基和試劑無菌生理鹽水；結(jié)晶紫染色液；二甲苯；含4％碘的乙醇溶液：4g碘溶于100mL的70%乙醇溶液。02操作程序02操作程序樣品準(zhǔn)備去除表面標(biāo)簽，在包裝容器表面用防水的油性記號(hào)筆做好標(biāo)記，并記錄容器、編號(hào)、產(chǎn)品性狀、泄漏情況、是否有小孔或銹蝕、壓痕、膨脹及其他異常情況稱重

1kg及以下的包裝物精確到1g，1kg以上的包裝物精確到2g，10kg以上的包裝物精確到10g，并記錄02操作程序保溫每個(gè)批次取1個(gè)樣品置2℃～5℃冰箱保存作為對(duì)照，將其余樣品在36℃±1℃下保溫10d。保溫過程中應(yīng)每天檢查，如有膨脹或泄漏現(xiàn)象，應(yīng)立即剔出，開啟檢查保溫結(jié)束時(shí)，再次稱重并記錄，比較保溫前后樣品重量有無變化。如變輕，樣品發(fā)生泄漏。將所有包裝物置于室溫直至開啟檢查02操作程序開啟膨脹樣品，先置于2℃～5℃冰箱內(nèi)冷藏?cái)?shù)小時(shí)后開啟用冷水和洗滌劑清洗待檢樣品的光滑面。水沖洗后用無菌毛巾擦干。以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面15min后用無菌毛巾擦干，密閉罩內(nèi)點(diǎn)燃至殘余的碘乙醇溶液全部燃燒完在超凈工作臺(tái)或百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室中開啟02操作程序留樣開啟后，用滅菌吸管或其他適當(dāng)工具以無菌操作取出內(nèi)容物至少30mL（g）至滅菌容器內(nèi)，保存2℃～5℃冰箱中，在需要時(shí)可用于進(jìn)一步試驗(yàn)，待該批樣品得出檢驗(yàn)結(jié)論后可棄去。開啟后的樣品可進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４?，以備日后容器檢查時(shí)使用02操作程序感官檢查在光線充足、空氣清潔無異味的檢驗(yàn)室中，將樣品內(nèi)容物傾入白色搪瓷盤內(nèi)，對(duì)產(chǎn)品的組織、形態(tài)、色澤和氣味等進(jìn)行觀察和嗅聞，按壓食品檢查產(chǎn)品性狀，鑒別食品有無腐敗變質(zhì)的跡象，同時(shí)觀察包裝容器內(nèi)部和外部的情況，并記錄02操作程序pH測(cè)定樣品處理：液態(tài)制品混勻備用，有固相和液相的制品則取混勻的液相部分備用測(cè)定：將電極插入被測(cè)試樣液中，并將pH計(jì)的溫度校正器調(diào)節(jié)到被測(cè)液的溫度分析結(jié)果：與同批中冷藏保存對(duì)照樣品相比，比較是否有顯著差異。pH相差0.5及以上判為顯著差異02操作程序涂片染色鏡檢涂片：取樣品內(nèi)容物進(jìn)行涂片。帶湯汁的樣品可用接種環(huán)挑取湯汁涂于載玻片上，固態(tài)食品可直接涂片或用少量滅菌生理鹽水稀釋后涂片，待干后用火焰固定染色鏡檢：涂片用結(jié)晶紫染色液進(jìn)行單染色，干燥后鏡檢，至少觀察5個(gè)視野，記錄菌體的形態(tài)特征以及每個(gè)視野的菌數(shù)03結(jié)果判定樣品經(jīng)保溫試驗(yàn)未出現(xiàn)泄漏；保溫后開啟，經(jīng)感官檢驗(yàn)、pH測(cè)定、涂片鏡檢，確證無微生物增殖現(xiàn)象，則可報(bào)告該樣品為商業(yè)無菌。樣品經(jīng)保溫試驗(yàn)出現(xiàn)泄漏；保溫后開啟，經(jīng)感官檢驗(yàn)、pH測(cè)定、涂片鏡檢，確證有微生物增殖現(xiàn)象，則可報(bào)告該樣品為非商業(yè)無菌鮮乳中抗生素殘留的檢驗(yàn)（嗜熱鏈球菌法）目錄/Contents1材料、試劑及設(shè)備操作程序結(jié)果判定鮮乳中抗生素殘留的檢驗(yàn)2301材料、試劑及設(shè)備設(shè)備和材料冰箱；恒溫培養(yǎng)箱；帶蓋恒溫水浴鍋；天平；無菌吸管；無菌試管；溫度計(jì)；旋渦混勻器01材料、試劑及設(shè)備菌種、培養(yǎng)基和試劑菌種：嗜熱鏈球菌。滅菌脫脂乳：無抗生素的脫脂乳4%2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液青霉素G參照溶液02操作程序02操作程序活化菌種取一接種環(huán)嗜熱鏈球菌菌種，接種在9mL滅菌脫脂乳中，置36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h～15h后，置2℃～5℃冰箱保存?zhèn)溆?。?5d轉(zhuǎn)種一次。02操作程序測(cè)試菌液將經(jīng)過活化的嗜熱鏈球菌菌種接種滅菌脫脂乳，36℃±1℃培養(yǎng)15h±1h，加入相同體積的滅菌脫脂乳混勻稀釋成為測(cè)試菌液02操作程序培養(yǎng)樣品9mL，置18mm×180min試管，每份樣品另外做一份平行樣。所有試管置80℃±2℃水浴加熱5min，冷卻至37℃以下，加入測(cè)試菌液1mL，輕輕旋轉(zhuǎn)試管混勻。36℃±1℃水浴培養(yǎng)2h，加4%TTC水溶液0.3mL，在旋渦混勻器上混合15s或振動(dòng)試管混勻。36℃土1℃水浴避光培養(yǎng)30min，觀察顏色變化02操作程序判斷方法在白色背景前觀察，試管中樣品呈乳的原色時(shí)，指示乳中有抗生素存在，為陽性結(jié)果。試管中樣品呈紅色為陰性結(jié)果。如最終觀察現(xiàn)象仍為可疑，建議重新檢測(cè)03結(jié)果報(bào)告最終觀察時(shí)，樣品變?yōu)榧t色，報(bào)告為抗生素殘留陰性。樣品依然呈乳的原色，報(bào)告為抗生素殘留陽性。本方法檢測(cè)幾種常見抗生素的最低檢出限為：青霉素0.004IU，鏈霉素0.5IU，慶大霉素0.4IU，卡那霉素5IU食品中雙歧桿菌的鑒定目錄/Contents1材料、試劑及設(shè)備鑒定程序結(jié)果報(bào)告食品商業(yè)無菌的檢驗(yàn)2301材料、試劑及設(shè)備設(shè)備和材料恒溫培養(yǎng)箱；氣相色譜儀配FID檢測(cè)器；冰箱；天平：感量0.1g；無菌試管：18mmx180mm、15mmxl00mm;無菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器（200μL～1000μL）及配套吸頭；無菌錐形瓶01材料、試劑及設(shè)備培養(yǎng)基和試劑雙歧桿菌培養(yǎng)基；PYG液體培養(yǎng)基；甲醇；三氯甲烷；硫酸；冰乙酸；乳酸乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；乙酸標(biāo)準(zhǔn)使用液乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；乳酸標(biāo)準(zhǔn)使用液02鑒定程序02操作程序樣品準(zhǔn)備樣品的全部制備過程均應(yīng)遵循無菌操作程序以無菌操作稱取25g（或25mL）樣品，置于裝有225mL生理鹽水的滅菌錐形瓶?jī)?nèi)，制成1：10的樣品勻液02操作程序稀釋及涂布培養(yǎng)制成1：100的樣品勻液做10倍遞增系列樣品勻液選擇3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL稀釋液，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。置36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h，培養(yǎng)后選取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)02操作程序純培養(yǎng)挑取3個(gè)或以上的可疑菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板，厭氧，36℃±1℃培養(yǎng)48h02操作程序鏡檢及生化鑒定涂片鏡檢。雙歧桿菌菌體為革蘭氏染色陽性，不抗酸、無芽孢，無動(dòng)力，菌體形態(tài)多樣，呈短桿狀、纖細(xì)桿狀或球形，可形成各種分支或分叉形態(tài)生化鑒定。過氧化氫試驗(yàn)為陽性。選取純培養(yǎng)平板上的3個(gè)單個(gè)菌落，分別進(jìn)行生化反應(yīng)檢測(cè)02操作程序有機(jī)酸代謝產(chǎn)物測(cè)定采用氣相色譜法測(cè)定雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物雙歧桿菌培養(yǎng)液制備標(biāo)準(zhǔn)液的配制：乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；乙酸使用液；乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；乳酸使用液方法：乙酸、乳酸的處理；氣相色譜條件；結(jié)果計(jì)算03報(bào)告根據(jù)鏡檢及生化鑒定的結(jié)果、雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物乙酸與乳酸微摩爾之比大于l，報(bào)告雙歧桿菌屬的種名食品中乳酸菌檢驗(yàn)?zāi)夸?Contents1材料、試劑及設(shè)備操作程序結(jié)果判定食品商業(yè)無菌的檢驗(yàn)2301材料、試劑及設(shè)備設(shè)備和材料恒溫培養(yǎng)箱；冰箱；均質(zhì)器及無菌均質(zhì)袋、均質(zhì)杯或滅菌乳缽；天平；無菌試管；無菌吸管或微量移液器及吸頭；無菌錐形瓶01材料、試劑及設(shè)備培養(yǎng)基和試劑MRS培養(yǎng)基及莫匹羅星鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基；MC培養(yǎng)基；0.5%蔗糖發(fā)酵管；0.5%纖維二糖發(fā)酵管；0.5%麥芽糖發(fā)酵管；0.5%甘露醇發(fā)酵管；0.5%水楊苷發(fā)酵管；.5%山梨醇發(fā)酵管；0.5%乳糖發(fā)酵管；七葉苷發(fā)酵管；革蘭氏染色液；莫匹羅星鋰鹽02操作程序02操作程序樣品準(zhǔn)備冷凍樣品可先使其在2℃～5℃條件下解凍固體和半固體食品：制成1：10樣品勻液液體樣品：制成1：10的樣品勻液02操作程序乳酸菌計(jì)數(shù)乳酸菌總數(shù)根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個(gè)MRS琮脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃土1℃，厭氧培養(yǎng)48℃土2h后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。從樣品稀釋到平板涂布要求在15min內(nèi)完成02操作程序嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)根據(jù)待檢樣品嗜熱鏈球菌活菌數(shù)的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取0.1mL樣品勻液分別置于2個(gè)MC瓊脂平板，使用L形棒進(jìn)行表面涂布。36℃土10C，需氧培養(yǎng)48h土2h后計(jì)數(shù)。嗜熱鏈球菌在MC瓊脂平板上的菌落特征為：菌落中等偏小，邊緣整齊光滑的紅色菌落，直徑2mm土lmm，菌落背面為粉紅色。15min內(nèi)完成02操作程序乳桿菌計(jì)數(shù)乳酸菌總數(shù)結(jié)果減去雙歧桿菌與嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)結(jié)果之和即得乳桿菌計(jì)數(shù)02操作程序菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位表示選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)02操作程序計(jì)數(shù)結(jié)果的表述若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，