背景介紹藥物與白蛋白的相互作用對藥物的藥理屬性影響顯著，因?yàn)橹挥形磁c白蛋白結(jié)合的藥物分子才具有治療活性。當(dāng)兩種或兩種以上的藥物同時(shí)進(jìn)入體內(nèi)時(shí)，它們可以在血漿白蛋白的同一部位結(jié)合。由于它們的競爭性結(jié)合，結(jié)合力更強(qiáng)的藥物將取代結(jié)合力較弱的藥物，從而增加了游離藥物分子的數(shù)量。因此，對于含有多種活性藥物成分的藥物制劑設(shè)計(jì)來說，研究藥物與血漿白蛋白之間的結(jié)合至關(guān)重要。本研究的主要目的是了解多藥聯(lián)合使用對血清白蛋白的影響；以期為洛索洛芬和三磷酸腺苷合并用藥的適宜性提供一定的理論基礎(chǔ)。文章亮點(diǎn)1.利用多光譜法結(jié)合分子對接模擬法探究在洛索洛芬和血漿中常見金屬離子存在下，三磷酸腺苷與血清蛋白的作用機(jī)制，確定猝滅和結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、熱力學(xué)參數(shù)、相互作用力類型、結(jié)合部位、藥物協(xié)同作用類型和構(gòu)象變化等；2.不僅給后續(xù)進(jìn)一步開展探究臨床實(shí)踐過程中應(yīng)用聯(lián)合用藥對疾病進(jìn)行治療提供一定參考價(jià)值，而且為設(shè)計(jì)聯(lián)合用藥方案，實(shí)現(xiàn)提高臨床療效，降低藥品毒性，延緩或避免抗藥性的產(chǎn)生一定的啟發(fā)。內(nèi)容介紹1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實(shí)驗(yàn)方法在10mL容量瓶中依次加入1.0mL（1.0mol/L）NaCl、2.0mL（0.05mol/L）Tris-HCl緩沖溶液（pH7.40）、1.0mL（2.0×10-5

mol/L）SA、0.2mL（3.549×10-3

mol/L）的洛索洛芬和不同體積的3.33×10-4

mol/L的三磷酸腺苷，用超純水定容，分別在26.2、36.2、46.2

oC水浴鍋內(nèi)20min后，通過多次掃描體系熒光光譜，找到最大激發(fā)波長在280nm，在其最大激發(fā)波長下掃描體系的激發(fā)光譜，并記錄最大發(fā)射波長下的數(shù)值（F）。上述容量瓶中未定容前，分別加入1mL（1×10-2

mol/L）鎂、鈷、鐵、錳和鉻離子再定容，測定熒光光譜。按照上述方法配制溶液并掃描蛋白-洛索洛芬-三磷酸腺苷（SA-LOX-ATP）體系的紫外-可見吸收譜圖。2

結(jié)果與討論2.1

抑制熒光強(qiáng)度的類型首先模擬實(shí)際血液環(huán)境，探究洛索洛芬、三磷酸腺苷和SA共存時(shí)熒光光譜的變化情況（見圖1）。固定CLOX和CSA濃度，改變CATP，以CATP為橫坐標(biāo)、F0/F為縱坐標(biāo)作圖，結(jié)果如圖2所示。根據(jù)線性方程的斜率和截距計(jì)算Kq等，結(jié)果列于表1。2.2

表觀結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)使用研究藥物與蛋白相互作用的lg[(F0-F)/F]=lgKb

+

nlgCATP公式[7-9]計(jì)算SA與LOX和ATP雙藥物分子相互作用的表觀結(jié)合常數(shù)KB與結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n。表2列出了其線性方程、相關(guān)系數(shù)以及由斜率和截距計(jì)算出的KB和n值。2.3

作用力利用熱力學(xué)方程[10]和Ross等[11]總結(jié)出的判斷規(guī)律推斷出抑制反應(yīng)的作用力類型。如表3所示，ΔG<0且ΔH

<0，表明洛索洛芬和三磷酸腺苷與蛋白的反應(yīng)為自發(fā)的放熱反應(yīng)。2.4

結(jié)合部位的確定依據(jù)單一藥物和蛋白相互作用的常用的Sulkowska課題組[12-14]報(bào)道的方法研究洛索洛芬和三磷酸腺苷與SA結(jié)合部位。2.5

藥物協(xié)同性2.6

位域分析2.7

金屬離子的影響2.8

分子對接分析3

結(jié)論本研究通過多光譜分析出在洛索洛芬存在條件下三磷酸腺苷對蛋白熒光產(chǎn)生靜態(tài)猝滅，兩者靠氫鍵和范德華力相互作用；洛索洛芬和三磷酸腺苷可以被蛋白運(yùn)輸；蛋白-洛索洛芬-三磷酸腺苷體系的結(jié)合位置位于SA的亞螺旋域ⅢA；洛索洛芬和三磷酸腺苷之間有弱的正協(xié)同效應(yīng)；洛索洛芬和三磷酸腺苷對蛋白的構(gòu)象產(chǎn)生一定的影響，結(jié)合位點(diǎn)離酪氨酸更近；詳細(xì)研究了錳、銅、鎘、鎳和鐵對雙藥物分子與蛋白結(jié)合的影響；分子對接結(jié)果佐證了光譜實(shí)驗(yàn)的結(jié)論?？傊斯ぷ鞑粌H給后續(xù)