方法驗證的具體內(nèi)容概述驗證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、周密度〔包括重復(fù)性、中間周密度和重現(xiàn)性〕、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。一、準(zhǔn)確度：是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的9二、周密度：是指在規(guī)定的條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)過屢次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。1、重復(fù)性：一樣條件下，一個分析人員測定所得結(jié)果的周密度稱92、中間周密度：一個試驗室，不同時間不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的周密度。3、重現(xiàn)性：不同試驗室，不同分析人員測定結(jié)果的周密度。分析方法被法定標(biāo)準(zhǔn)承受應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗。三、專屬性：指在其他成分可能存在的狀況下，承受的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，用于簡單樣品分析時相互干擾的程度。鑒別反響、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，圴應(yīng)考察專屬性。四、檢測限：指試樣中被測物能被檢測出的最低量，無須定量。用百分?jǐn)?shù)、ppmppb表示。五、定量限：指樣品中被測物能被定量測定的最低量，測定結(jié)果應(yīng)具肯定的周密度和準(zhǔn)確度。六、線性：系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。七、范圍：能到達(dá)肯定的周密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的凹凸限濃度或量的區(qū)間。八、耐用性：指在肯定的測定條件稍有變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。方法驗證內(nèi)容如下。一、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率〔%〕表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。含量測定方法的準(zhǔn)確度原料藥可用純度的比照品或樣品進(jìn)展測定，或用本法所得結(jié)果與準(zhǔn)確度的另一個方法測定的結(jié)果進(jìn)展比較。制劑可用含量被測物的各組分混合物進(jìn)展測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中參加量的被測物進(jìn)展測定，或用本法所得結(jié)果與準(zhǔn)確度的另一個方法測定結(jié)果進(jìn)展比較。如該分析方法已經(jīng)測試并求出了周密度、線性和專屬性，在準(zhǔn)確度也可推算出來的狀況下，這一項可不必再做。雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑中參加量雜質(zhì)進(jìn)展測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)展比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗證的方法。在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或?qū)υ纤幍南鄬憫?yīng)因子狀況下，可用原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)明確說明單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比〔%〕或面積比〔%〕。數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果進(jìn)展評價，例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)展測定。應(yīng)報告參加量的回收率〔%〕，或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限?！惨庖?：是否對所設(shè)定的濃度范圍作出要求，如：該方法用于藥品的含量測定，回收率試驗的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于含量 100％的±20％之間；用于溶出〔釋放〕曲線考察時，回收率試驗的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于全曲線范圍的上、中、下部位?！扯⒅苊芏戎苊芏认抵冈谝?guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)屢次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。周密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在一樣條件下，由一個分析人員測定所得結(jié)果的周密度稱為重復(fù)性；在同一個試驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的周密度，稱為中間周密度；在不同試驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的周密度，稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考慮方法的周密度。1．重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果進(jìn)展評價，例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試溶液，進(jìn)展測定?；?00%的6中間周密度為考察隨機變動因素對周密度的影響，應(yīng)設(shè)計方案進(jìn)展中間周密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。重現(xiàn)性當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)承受，應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗，例如，建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)留意重現(xiàn)性試驗用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。三、專屬性專屬性系指在其他成分〔如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等〕可能存在下，承受的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反響、雜質(zhì)檢查、含量測定方法均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)承受多個方法予以補充。鑒別反響應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或構(gòu)造相像化合物區(qū)分。不含被測成分的樣品，以及構(gòu)造相像或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反響〔不呈正反響？〕。含量測定和雜質(zhì)測定色譜法和其他分別方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置。色譜法中的分別度應(yīng)符合要求。在雜質(zhì)可獲得的狀況下，對于含量測定，試樣中可參加雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。對于雜質(zhì)測定也可向試樣中參加肯定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)能否得到分別。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的狀況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)展測定，與另一個閱歷證了的或藥典方法比較結(jié)果。用強光照耀，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法進(jìn)展加速破壞，以爭論可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測定方法應(yīng)比對二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對檢出的雜質(zhì)個數(shù)，必要時可承受二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)展峰純度檢查。四、檢測限檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的鑒別試驗和雜質(zhì)檢查方法，均應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下。1．非儀器分析目視法用濃度的被測物，試驗出能被牢靠地檢測出的最低濃度或量。2．信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)展比較，算出能被牢靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3．?dāng)?shù)據(jù)要求應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。五、定量限定量限系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具肯定準(zhǔn)確度和周密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測定方法爭論時，應(yīng)確定方法的定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。六、線性線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)周密稀釋，或分別周密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)展測定，至少制備5份供試樣品。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀看是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)展線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)展線性回歸計算。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖?！惨庖?：“線性”、“范圍”中，如測定方法用于溶出〔釋放〕曲線考察時，是否規(guī)定樣品濃度的范圍應(yīng)涵蓋整條曲線?！称摺⒎秶秶抵改艿竭_(dá)肯定周密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的凹凸限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)依據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、周密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍應(yīng)為測試濃度的 80%～120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測試濃度的70%～130%，依據(jù)劑型特點，如氣霧劑、噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的±20%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的＋20%；雜質(zhì)測定，爭論時，范圍應(yīng)依據(jù)初步實測，擬訂為規(guī)定限度的±20%。假設(shè)含量測定與雜質(zhì)檢查同時進(jìn)展，用百分歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度〔或上限〕的＋20%。八、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗供給依據(jù)。開頭爭論分析方法時就應(yīng)考慮其耐用性。假設(shè)測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流淌相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。附表檢驗工程和驗證內(nèi)容工程鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定內(nèi)容定量限度準(zhǔn)確度－＋－＋周密度－－－＋重復(fù)性－＋－＋中間周密度－＋①－＋①專屬性②＋＋＋＋檢測限－－③＋－定量限－＋－－線性－＋－＋范圍－＋－＋耐用性＋＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間周密度。②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充。③視具體狀況予以驗證。床前明月光，疑是地上霜。二、方法驗證的具體內(nèi)容〔一〕準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率〔%〕表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。用于定量測定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗證。測定方法的準(zhǔn)確度可用純度的比照品做加樣回收測定，即于被測成分含量的供試品中再周密參加肯定量的純度的被測成分比照品，依法測定。用實測值與供試品中含被測成重量之差，除以參加比照品量計算回收率。回收率%=式中：A為供試品所含被測成重量；BC在加樣回收試驗中，應(yīng)留意比照品的參加量與供試品中被測成分含有量之和必需在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；應(yīng)留意參加比照品的時間〔供試品預(yù)處理前〕；比照品的參加量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對削減，真實性差。數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個測定結(jié)果進(jìn)展評價；或設(shè)計3個不同濃度，每個濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)展測定，用9個測定結(jié)果進(jìn)展評價，一般中間濃度參加量與所取供試品含量之比掌握在1:1左右。應(yīng)報告供試品取樣量、供試品中含有量、比照品參加量、測定結(jié)果和回收率(％)計算值，以及回收率(％)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差〔RSD％〕或可信限?！捕持苊芏戎苊芏认抵冈谝?guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)屢次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。周密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。用于定量測定的分析方法均應(yīng)考察方法的周密度。周密度包括重復(fù)性、中間周密度和重現(xiàn)性。重復(fù)性在一樣操作條件下，由一個分析人員在較短的間隔時間內(nèi)測定所得結(jié)果的周密度稱為重復(fù)性。在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個測定結(jié)果進(jìn)展評價；或設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)展測定，9中間周密度在同一個試驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的周密度，稱為中間周密度。為考察隨機變動因素對周密度的影響，應(yīng)進(jìn)展中間周密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。重現(xiàn)性在不同試驗室由不同分析人員測定結(jié)果之間的周密度，稱為重現(xiàn)性。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)承受時，應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗。例如，建立獸藥典分析方法時應(yīng)通過不同試驗室的復(fù)核檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，復(fù)核檢驗的目的、過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)留意重現(xiàn)性試驗用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。〔三〕專屬性1.意義與要求專屬性系指在其他成分可能存在下，承受的方法能正確測定出藥材、飲片、藥材提取物或制劑中被測成分的特性。鑒別、限量檢查、含量測定等方法均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)承受其他方法予以補充。鑒別試驗鑒別應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或構(gòu)造相像化合物區(qū)分。不含被測成分的供試品，以及構(gòu)造相像或組分中的有關(guān)化合物，均不得干擾測定。顯微鑒別、色譜及光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖像或圖譜。含量測定和限量檢查以不含被測成分的供試品(除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬復(fù)方)試驗說明方法的專屬性。色譜法和其他分析方法，應(yīng)附代表性圖譜，并標(biāo)明主成分在圖中的位置，以空白比照〔除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬復(fù)方〕試驗說明方法的專屬性。色譜法中的分別度應(yīng)符合要求，必要時可承受二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，對色譜峰進(jìn)展定性檢查。〔四〕檢測限檢測限系指供試品中被測物能被檢測出的最低量。確定檢測限常用的方法如下。1.直觀法用一系列濃度的供試品進(jìn)展分析，試驗出能被牢靠地檢測出的最低濃度或量?？捎糜诜莾x器分析方法，也可用于儀器分析方法。2.信噪比法僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把低濃度供試品測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)展比較，算出能被牢靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3.數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果?！参濉扯肯薅肯尴抵腹┰嚻分斜粶y成分能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具肯定準(zhǔn)確度和周密度。用于限量檢查的定量測定的分析方法均應(yīng)確定定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)展確定?！擦尘€性線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與供試品中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)周密稀釋，或分別周密稱樣，制備一系列供試品的方法進(jìn)展測定，至少制備5個濃度的供試品。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀看是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)展線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)展線性回歸計算。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖?！财摺撤秶秶抵改艿竭_(dá)肯定周密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的凹凸限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)依據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、周密度結(jié)果及要求確定。對于有毒的、具特別成效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的±20％。〔八〕耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗供給依據(jù)。開頭爭論分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。假設(shè)測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流淌相的組成比例或pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測器溫度等。薄層色譜的變動因素有：不同廠牌的薄層板，點樣方式及薄層開放時溫度及相對濕度的變化等。經(jīng)試驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效?！簿拧诚到y(tǒng)適用性試驗對一些儀器分析方法，在進(jìn)展方法驗證時，有必要將分析設(shè)備、電子儀器與試驗操作、測試樣品等一起當(dāng)作完整的系統(tǒng)進(jìn)展評估。系統(tǒng)適用性便是對整個系統(tǒng)進(jìn)展評估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗參數(shù)的設(shè)置需依據(jù)被驗證方法類型而定。色譜方法對分析設(shè)備、電子儀器的依靠程度較高，因此全部色譜方法均應(yīng)進(jìn)展該指標(biāo)驗證，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成局部。具體驗證參數(shù)和方法參考《中國獸藥典》有關(guān)規(guī)定。三、方法再驗證在某些狀況下，如原藥提取工藝轉(zhuǎn)變、制劑處方或