臨床病原學檢測與標本正確留取演講者：崔煥敏臨床病原學檢測和標本的正確留取第1頁痰液標本采集與運輸痰液由氣管、支氣管和肺泡所分泌正常情況下分泌物甚少，呼吸道粘膜受刺激時，分泌物增多，但多為清楚、水樣，無臨床意義。病理情況下痰量增多，呈不透明并有性狀改變臨床病原學檢測和標本的正確留取第2頁采集目標普通可用于普通細菌、分枝桿菌、真菌和軍團菌涂片或培養(yǎng)檢測，經(jīng)氣管穿刺吸引物可用于厭氧菌檢測。臨床病原學檢測和標本的正確留取第3頁采集標本最正確時機應在使用抗菌藥品之前。宜采集清晨第二口痰液。對于普通細菌性肺炎，痰標本送檢天天1次，連續(xù)2～3天。不提議24小時內(nèi)屢次采樣送檢，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)改變。懷疑分枝桿菌感染者，應連續(xù)搜集3天清晨痰液送檢。普通標準臨床病原學檢測和標本的正確留取第4頁采集方法1、自然咳痰與霧化倒痰法：無痰或痰量極少者可用3%～5%氯化鈉溶液5ml霧化吸入約5min后留取痰液。如有可能，應在護理人員直視下留取清晨第二口痰。囑咐患者留取前摘去牙托，清潔口腔，如刷牙后重復用生理鹽水漱口；深吸氣后用力自氣管深部咳出痰液，置無菌容器內(nèi)。應盡可能預防唾液及鼻咽部分泌物混入樣品，不應用紙巾包裹痰液。臨床病原學檢測和標本的正確留取第5頁2、支氣管鏡法：鼻或口腔插入支氣管鏡。慣用采集方法有經(jīng)支氣管鏡吸引、支氣管肺泡灌洗、防污染毛刷采樣或防污染支氣管肺泡灌洗等。采集方法臨床病原學檢測和標本的正確留取第6頁3、經(jīng)人工氣道吸引法：進行手衛(wèi)生后將一次性吸痰管末端拆開，連接吸引器，調(diào)整吸引器置適宜負壓（成人：40.0～53.3kpa;小兒：＜40.0kpa）。將一次性吸痰管外包裝取出，戴手套持吸痰管試吸生理鹽水，檢驗管道是否通暢。折疊一次性吸痰管末端，插入口腔或鼻腔或人工氣道至適宜深度，放開吸痰管末端，輕柔、靈活、快速地左右旋轉(zhuǎn)上提吸痰管吸痰。采集方法臨床病原學檢測和標本的正確留取第7頁見吸痰管內(nèi)有痰液吸出，即折疊一次性吸痰管退出，將一次性吸痰管與吸引器分離（使用人工呼吸機者，一次吸痰時間不超出15s，高濃度氧氣1～2min）。將痰液注入無菌容器（試管）內(nèi)，如痰液粘稠可用一次性針筒向吸痰管末端注入少許生理鹽水，將痰液沖入無菌容器（試管）內(nèi)。采集方法臨床病原學檢測和標本的正確留取第8頁標本運輸痰以深咳排出后，應裝于有密封瓶蓋無菌塑料容器中，以免感染自己或他人。標本應及時送檢，室溫≤3h。若不能及時處理，可選擇運輸培養(yǎng)基運輸和保留標本，但不應≥48h。臨床病原學檢測和標本的正確留取第9頁痰標本要求

白細胞（WBC）≥25/LPF。鱗狀上皮細胞（SEC）＜10/LPF。如不符合上述指標，通知臨床重新采樣。臨床病原學檢測和標本的正確留取第10頁血培養(yǎng)標本采集一、血培養(yǎng)指征：患者出現(xiàn)寒戰(zhàn)，體溫超出38℃或低體溫（≤36℃)懷疑血流感染時，尤其存在以下情況時，應抽血做細菌和真菌培養(yǎng)：醫(yī)院內(nèi)肺炎；留置中心靜脈導管超出72h；感染性心內(nèi)膜炎；骨髓炎；有嚴重基礎(chǔ)疾病、免疫缺點伴全身感染癥狀，臨床醫(yī)生懷疑有血流感染可能其它情況。白細胞過多（≥10000/μl），并有核左移現(xiàn)象。中性粒細胞過少（≤1000/μl）。臨床病原學檢測和標本的正確留取第11頁二、采血時機：一旦懷疑有血流感染可能，應馬上采血做血培養(yǎng)最好在抗菌藥品治療前或停用抗菌藥品24h后，以寒戰(zhàn)、發(fā)燒時采集為宜。血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第12頁三、采血流程：消毒：1、培養(yǎng)瓶消毒程序：用酒精消毒培養(yǎng)瓶橡皮塞，待干燥后使用。2、皮膚消毒程序：用安爾碘消毒液從穿刺點向外劃圈消毒，至消毒區(qū)域直達5cm以上，待消毒液揮發(fā)干燥后（常須30s以上）穿刺采血。血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第13頁四、靜脈穿刺和培養(yǎng)瓶接種：采取負壓血培養(yǎng)瓶，將患者靜脈直接吸入血培養(yǎng)瓶，降低污染步驟。先注于厭氧培養(yǎng)瓶，血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第14頁五、采血部位采血部位通常為肘靜脈。對疑為細菌性骨髓炎或傷寒病人，在病灶或髂前（后）上棘處消毒后抽取骨髓培養(yǎng)。疑似細菌性心內(nèi)膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第15頁六、采血量：以培養(yǎng)基與血液之比10:1為宜，以稀釋血液中抗菌藥品、抗體等殺菌物質(zhì)。采血量過少會顯著降低陽性率。成人每次每培養(yǎng)瓶采血8～10ml，嬰幼兒每次每培養(yǎng)瓶采血2ml。血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第16頁需要采集多少份血培養(yǎng)？每名患者應最少采集2份血培養(yǎng)，最好為3份（CLSI要求采集2～3份血培養(yǎng)）。在一名敗血癥患者早期診療時，絕不能只采集1份血培養(yǎng)（CLSI強調(diào)了此觀點）。注意：1“份”是指一次靜脈穿刺。血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第17頁

運輸要求■全部標本采集后都應馬上送往試驗室，最好在2h內(nèi)?！黾偃绮荒芗皶r送檢，宜置于室溫環(huán)境。切勿冷藏?！鏊蜋z標本應正確粘貼條形碼，注明采樣時間和送檢時間?！霭踩雷o：放標本容器必須防漏，禁止將滲漏標本送往試驗室。

血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第18頁匯報要求：■緊急口頭（電話）匯報：血培養(yǎng)出現(xiàn)陽性警報時，馬上進行革蘭氏染色、鏡檢，并在最短時間內(nèi)將結(jié)果向臨床主管醫(yī)生進行緊急口頭（電話）匯報?！鲎罱K止果（書面）匯報血培養(yǎng)標本采集臨床病原學檢測和標本的正確留取第19頁穿刺腰椎取得，特殊情況可采取小腦延髓池或腦室穿刺采集后置無菌管馬上送檢，不能超出1h，同時應防止凝固和混入血液培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌時，應將標本置于25℃條件下保溫送檢，不可置冰箱保留做病毒檢驗腦脊液標本應放置冰塊，可在4℃保留72小時。腦脊液采集和運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第20頁尿液采集和運輸■正常人膀胱中尿液是無菌→外尿道排出時受外尿道中正常菌群污染→混有細菌?！霾杉瘯r機：宜為抗菌藥品使用之前清晨第一次尿液。臨床病原學檢測和標本的正確留取第21頁采集方法采集消毒中段尿，在采集尿液前，須以肥皂和清水洗凈尿道口，棄去前段尿，留取中段尿或無菌操作取中段尿于無菌容器中，馬上送檢，2h接種。取經(jīng)尿道排出中段尿，細菌數(shù)不會超出103cfu/ml。泌尿系感染時，尿中細菌數(shù)高于104~5/ml。因而，以此為界作為診療泌尿系感染依據(jù)尿液采集和運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第22頁導尿1、直接導尿法：使用安爾碘消毒劑消毒會陰局部，用導尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，先棄其前段尿液約15ml，再留取中段尿10～20ml于無菌容器內(nèi)。2、留置導尿管法：醫(yī)院內(nèi)尿路感染中，臨床最慣用此法。采集前先夾住導尿管，采集時則松管棄其前段尿液，使用安爾碘消毒劑消毒導尿管采樣部位，使用無菌注射器斜刺入導尿管（從采樣口或靠近尿道導尿管管壁）抽取10～20ml于無菌容器內(nèi)。尿液采集和運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第23頁標本運輸標本采集后應及時送檢并接種，室溫下保留時間不應超出2h（夏季保留時間應適當縮短或冷藏保留）。假如不能及時運輸或接種，應4℃冷藏，但保留時間也不應超出8h.尿液采集和運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第24頁注意事項不應從集尿袋中采集尿液。尿液中不應加防腐劑或消毒劑。若尿液培養(yǎng)前患者曾使用抗菌藥品，應重復屢次送檢。屢次采集或24h尿不應用于尿液培養(yǎng)。除非進行流行病學調(diào)查，不應對長久留置導尿管患者常規(guī)進行尿液培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果應結(jié)合臨床表現(xiàn)、菌落計數(shù)以及微生物種類等，進行綜合判斷。尿液采集和運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第25頁手術(shù)部位感染標本采集及運輸

普通標準在抗菌藥品使用前，且僅在有臨床感染癥狀或傷口惡化或長久不能愈合時采集標本。皮膚或粘膜表面清潔：1、閉合傷口和穿刺物標本：消毒方法同血培養(yǎng)標本皮膚消毒；2、開放傷口：無菌生理鹽水充分沖洗傷口部位。不能夠用消毒劑。3、采集新鮮感染組織，防止采集淺表組織碎屑。4、若能夠采集穿刺物或活檢標本，應防止拭子標本。容器：含有少許生理鹽水帶螺紋口無菌塑料容器。臨床病原學檢測和標本的正確留取第26頁采集方法：封閉性膿腫：1注射器穿刺抽取濃度。2若無法抽到膿液，應先皮下注射少許無菌生理鹽水，再次穿刺抽吸膿液；若膿液過多，應先切開引流，在基底部或膿腫壁采集標本。膿液量以大于1ml為宜。3排除注射器內(nèi)部及針頭氣體用無菌橡皮塞封閉針頭送檢；或直接打入血培養(yǎng)瓶中。疑為厭氧菌，應快速將膿液打入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶中手術(shù)部位感染標本采集及運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第27頁組織和活標本：1、采集足夠大組織，體積以1mm3為宜，防止在壞死區(qū)域采集。2、將小塊組織放在運輸培養(yǎng)基內(nèi)；較大放在無菌容器中，并加入少許無菌生理鹽水。3、開放傷口：（1）無菌生理鹽水徹底沖洗淺表部位，去除表面滲出物和碎屑。（2）用拭子深入傷口基底部或傷口-正常組織邊緣采集兩個標本，分別用于培養(yǎng)和革蘭氏染色。手術(shù)部位感染標本采集及運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第28頁

標本標識：填寫患者信息、標本類型（深部組織、表淺組織、膿腫和穿刺物等）、標本起源（腹腔、腿和上臂等），統(tǒng)計標本采集日期和時間及是否在使用抗菌藥品前采集，選擇檢驗項目（需氧培養(yǎng)或厭氧培養(yǎng)）

標本送檢：為了更加好分離病原菌，標本應在采集后30min內(nèi)送到試驗室。送檢時應保持標本濕潤。在送檢前或運輸過程中，禁止將標本放于冰箱。手術(shù)部位感染標本采集及運輸臨床病原學檢測和標本的正確留取第29頁正常人糞便中含有大量細菌（大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、腸球菌和各種厭氧菌）。標本采集和運輸用藥前自然排便，采集膿血、粘液部分2-3g；外觀無異常應不一樣部位取材；嬰幼兒患者，可用直腸拭子法采集標本。標本采集后應盡快送檢，有條件提倡使用運輸培養(yǎng)基。許多主要病原微生物如志賀菌在PH改變、溫度↓時不能存活，應馬上送檢。糞便

臨床病原學檢測和標本的正確留取第30頁正常內(nèi)生殖器應是無菌。外生殖器及接觸體表部分可有各種細菌。常見細菌有：葡萄球菌、鏈球菌、類白喉棒狀桿菌、大腸埃希菌、變形桿菌、雙歧桿菌及恥垢分枝桿菌等。

生殖道標本

臨床病原學檢測和標本的正確留取第31頁標本采集及送檢分泌物：用無菌生理鹽水清洗尿道口，無菌棉簽采取膿液標本，置無菌試管中。懷疑梅毒患者：從外生殖器硬下疳處先以無菌生理鹽水清理創(chuàng)面，再從潰瘍底部擠出少許組織液，用清潔玻片直接蘸取，加蓋玻片后送檢。女性生殖道標本采集：用長無菌棉簽采集陰道后穹隆分泌物。生殖道標本

臨床病原學檢測和標本的正確留取第32頁全部盛裝標本容器均進行無菌處理，并到達無菌要求。采取不易碎且堅硬材料；容器口大小要求便于患者留取標本；容器蓋要求為外置螺旋蓋，且不滲漏液體。血液、骨髓標本專用培養(yǎng)基應有相關(guān)科室提供。微生物標本容器要求

臨床病原學檢測和標本的正確留取第33頁泌尿生殖系統(tǒng)、眼、耳分泌物及咽刷拭子：管為無菌塑料，拭子桿為塑料或金屬，拭子頭為人造纖維。組織、痰、尿液、糞便、腦脊液、穿刺液、引流液及其它無菌體液：采取廣口、無菌帶螺口蓋密閉塑料盒。微生物標本容器要求

臨床病原學檢測和標本的正確留取第34頁結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)標本：采取無菌帶螺口蓋塑料離心管沒有有好質(zhì)量標本，試驗室采取任何先進分離、判定和藥敏技術(shù)都是無幾于事。所以，正確、規(guī)范采集標本是確保臨床微生物學檢驗質(zhì)量最主要前提。臨床規(guī)范搜集標本能夠加緊匯報時間，提升檢驗質(zhì)量。

微生物標本容器要求

臨床病原學檢測和標本的正確留取第35頁小區(qū)取得MRSA(CaMRSA)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（HaMRSA)耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRSCons）萬古霉素耐藥金葡菌（全球6株，